本发明属于生物发酵技术领域，具体涉及一种抗菌肽菌种种子液的制备方法。
背景技术：
抗菌肽是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽,这类活性多肽多数具有碱性、热稳定性以及广谱抗菌等特点。与抗生素相比，对人和动物正常细胞无伤害，无副作用、无残留，在医药抗菌领域、食品防腐保鲜领域以及饲料添加剂领域中有着广阔的应用前景。
但是，目前对于抗菌肽发酵培养基在工业化生产过程中存在很多问题，如成本高，抗菌肽菌种种子液制备过程中往往需要经过三级扩大培养，在传代的过程中会出现种子液污染的情况，影响菌种的生产性能，进而制约着抗菌肽的产量和质量。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供了一种抗菌肽菌种种子液的制备方法，该方法采用两步扩大，增加了二级种子罐的容积，同时调整了搅拌速度、培养温度及培养时间，得到原来三级扩大培养的效果，进而提高了抗菌肽的产率，避免了转移过程中出现种子液污染的情况。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明提供了一种抗菌肽菌种种子液的制备方法，它包括以下步骤：
（1）摇瓶种子的制备：摇瓶种子培养基经过灭菌冷却后，在无菌条件下，用接种针刮下斜面菌丝体于种子瓶中，置32±1℃摇床上培养 12-14小时后，下摇床备用；
（2）一级种子的制备：一级种子培养基经过灭菌冷却后，在无菌条件下将摇瓶种子接入一级种子罐中培养，培养温度 34±1℃，通气量1：1 v/v／min，培养时间12-14小时；
（3）二级种子的制备：二级种子培养基经过灭菌冷却后，通过已灭菌过的移种管道将一级种子移入二级种子罐中培养，培养温度 36±1℃，通气量1：1 v/v／min，培养时间10-12小时，得到抗菌肽菌种种子液；所述二级种子罐的容积为一级种子罐体积的5-10倍。
根据上述的抗菌肽菌种种子液的制备方法，步骤（3）中的培养温度比步骤（2）中的培养温度高1-2℃。
根据上述的抗菌肽菌种种子液的制备方法，步骤（3）中的二级种子罐的搅拌速度比步骤（2）中的一级种子罐内的搅拌速度提高10-20rpm。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
本发明方法采用两步扩大，增加了二级种子罐的容积，同时调整了搅拌速度、培养温度及培养时间，得到原来三级扩大培养的效果，进而提高了抗菌肽的产率，避免了转移过程中出现种子液污染的情况。
具体实施方式
以下实施例旨在进一步说明本发明的内容，但不限制本发明的保护范围。
实施例1
一种抗菌肽菌种种子液的制备方法，它包括以下步骤：
（1）摇瓶种子的制备：摇瓶种子培养基经过灭菌冷却后，在无菌条件下，用接种针刮下斜面菌丝体于种子瓶中，置32±1℃摇床上培养 12-14小时后，下摇床备用；
（2）一级种子的制备：一级种子培养基经过灭菌冷却后，在无菌条件下将摇瓶种子接入一级种子罐中培养，培养温度 34±1℃，通气量1：1 v/v／min，培养时间12-14小时；
（3）二级种子的制备：二级种子培养基经过灭菌冷却后，通过已灭菌过的移种管道将一级种子移入二级种子罐中培养，培养温度 36±1℃，通气量1：1 v/v／min，培养时间10-12小时，得到抗菌肽菌种种子液；所述二级种子罐的容积为一级种子罐体积的5-10倍。
上述的抗菌肽菌种种子液的制备方法中，步骤（3）中的培养温度比步骤（2）中的培养温度高1-2℃；步骤（3）中的二级种子罐的搅拌速度比步骤（2）中的一级种子罐内的搅拌速度提高10-20rpm。
同等条件下，利用本发明方法制备与传统的三级培养方法相比，本发明方法制备抗菌肽菌种种子液的性能与传统方法制备的抗菌肽菌种种子液的性能相当。