一种同步检测五种动物源性成分的多重PCR引物体系及检测方法与流程

技术特征：

1.一种同步检测五种动物源性成分的多重PCR引物体系，其包括如下五对引物对：

1)针对牛物种特异性基因设计的引物对I：

正向引物：5’-GATTGGACTAGCATTAGCTGCAACC-3’；

反向引物：5’-CTTGAAGGCGTTTGAGGGGTAGTGAT-3’；

2)针对猪物种特异性基因设计的引物对II：

正向引物：5’-GCCTAAATCTCCCTCAATGGTA-3’；

反向引物：5’-ATGAAAGAGGCAATAGATTTTCG-3’；

3)针对羊物种特异性基因设计的引物对III：

正向引物：5’-CAATGAAAATAACCGTTCCTAAT-3’；

反向引物：5’-GTAAGGTTGTACTATGAGGATCGTG-3’；

4)针对鸡物种特异性基因设计的引物对IV：

正向引物：5’-AGCAATTCCTACATTGGACACA-3’；

反向引物：5’-GATGATAGTATACCTGCGATTGCA-3’；

5)针对鸭物种特异性基因设计的引物对V：

正向引物：5’-CACAATCTAGCCTGGACAC-3’；

反向引物：5’-TCGTCTTTAGTCTGGAGTT-3’。

2.一种同步检测五种动物源性成分的多重PCR检测方法，其包括如下步骤：

1)以待检样品的总DNA为模板，利用如权利要求1所述的多重PCR引物体系进行多重PCR扩增实验，反应结束后，根据琼脂糖凝胶电泳判定结果；其中，所述待检样品的总DNA模板为牛、猪、羊、鸡、鸭物种肉产品中的一种或一种以上；

2)结果判定：待检样品扩增出733bp条带的，判定为牛源性成分阳性；待检样品扩增出212bp条带的，判定为猪源性成分阳性；待检样品扩增出468bp条带的，判定为羊源性成分阳性；待检样品扩增出133bp条带的，判定为鸡源性成分阳性；待检样品扩增出292bp条带的，判定为鸭源性成分阳性。

3.根据权利要求2所述的同步检测五种动物源性成分的多重PCR检测方法，其特征在于，所述多重PCR扩增实验的PCR反应体系包括：

4.根据权利要求2或3所述的同步检测五种动物源性成分的多重PCR检测方法，其特征在于，所述多重PCR扩增实验的PCR反应体系包括：

5.根据权利要求2或3所述的同步检测五种动物源性成分的多重PCR检测方法，其特征在于，所述多重PCR扩增实验的PCR反应体系包括：

6.根据权利要求2所述的同步检测五种动物源性成分的多重PCR检测方法，其特征在于，所述多重PCR扩增实验的特定PCR反应程序为：依次进行90-100℃下预变性5-20min，90-100℃变性20-60s，50-64℃退火30-60s，70-74℃延伸60-150s，进行30-60次循环，70-74℃下延伸5-20min，最后在4-20℃下保持＞1min后结束。

7.根据权利要求2或5所述的同步检测五种动物源性成分的多重PCR检测方法，其特征在于，所述多重PCR扩增实验的特定PCR反应程序为：依次进行95℃下预变性10min，94℃变性30s，60℃退火45s，72℃延伸90s，进行40次循环，72℃下延伸l0min，最后在4℃下保持1min后结束。

8.如权利要求2-7任一项所述的多重PCR检测方法在用于物种检测中的应用，所述的物种检测对象为牛、猪、羊、鸡和鸭中的一种或多种。

9.如权利要求2-7任一项所述的多重PCR检测方法在牛、猪、羊、鸡和鸭产品的真伪及掺假鉴定中的应用。

10.一种含有如权利要求1所述多重PCR引物体系的牛猪羊鸡鸭动物源性成分检测的多重PCR检测试剂盒。