一种重组HEK‑293T细胞及其分泌的抗寨卡病毒融合蛋白的制作方法

文档序号:12097166阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种重组HEK-293T细胞,其特征在于,该重组HEK-293T细胞是以HEK-293T细胞为宿主转染外源融合基因获得,其中所述的外源融合基因的核酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的一种重组HEK-293T细胞,其特征在于,所述的由以下方法制得:

(1)分别从GenBank中获取ZIKA病毒E蛋白结构域III和人IgG1Fc的核苷酸序列,并将二者采用柔性肽(GGGS)3连接,然后进行密码子优化,得到如SEQ.ID.NO.1所示的融合基因;将所得到的融合基因的起始端和终止端密码子分别进行酶切,然后克隆至载体pMD19-T中,得到重组载体命pMD19-ZDIII-hFc;

(2)先取FUGW质粒用PacⅠ酶切后补平再用BamHⅠ酶切回收载体大片段,再取pCDNA3.0质粒先用BglⅡ酶切后补平再用BamHⅠ酶切后回收CMV启动子,然后用Roche ligation kit将所回收的载体大片段和CMV启动子连接后得到慢病毒表达质粒pLV-CMV-EGFP;

(3)将慢病毒表达质粒pLV-CMV-EGFP双酶切回收大片段,再将pMD19-ZDIII-hFc双酶切回收核酸序列如SEQ.ID.NO.1所示的融合基因ZDⅢ-hFc,然后将所回收的大片段与融合基因ZDⅢ-hFc在T4DNA连接酶作用下连接,转化stab3感受态细胞后涂布含氨苄的LB平板,过夜培养后挑取单菌落扩增培养并提取得到慢病毒重组载体pLV-CMV-EGFP-ZDⅢ-hFc;

(4)将所述慢病毒重组载体pLV-CMV-EGFP-ZDⅢ-hFc与慢病毒包装辅助质粒共转染HEK-293T细胞,即得重组HEK-293T细胞。

3.一种由权利要求1所述重组HEK-293T细胞分泌的抗寨卡病毒的融合蛋白,该融合蛋白的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。

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