本发明涉及烟用香精香料的制取方法，具体是指一种固定化β-葡萄糖苷酶制备烟用藏红花提取物的方法。
背景技术：
在烟草制品中，烟草的香气和吸味是至关重要的，添加香料是卷烟工艺中的关键环节，也是完善产品风格和提高卷烟香气质量的有效手段之一，可以给消费者提供一些香气和吸味满意的卷烟制品。目前，我国烟草中添加的烟用香料大多是采用传统的方法配制的，即以天然提取物单体和合成单体混合调配而成，这样所制得的烟用香料虽然市场操作简单，但存在香气单调，对烟草改善性不足，而且改善卷烟抽吸品质效果不明显等缺点。
藏红花(学名：polianthestuberosa)，又名夜来香、月下香，石蒜科藏红花属植物，分布于墨西哥、南美等地区。藏红花中含有藏红花醛、2,4,4-三甲基-3-甲醛-5-羟基-2,5-环己二烯-1-酮、2-羟基-3,5,5-三甲基-2-环己烯-1,4-二酮、2,2,6-三甲基-1,4-环己二酮、二氢-β-紫罗兰酮、异佛尔酮等香气物质，这些香气物质具有特征的甜香香韵。而花类的芳香物质大多以糖苷键合态形式存在，难以释放出来。如果用常规制备方法获得香料，香料中香气物质的得率较低，使得藏红花提取物在卷烟中的烟香不明显，从而限制了藏红花提取物在卷烟中的应用。
β-葡萄糖苷酶(β-d-glucosidase)，又称β-d-葡萄糖苷葡萄糖水解酶，别名龙胆二糖酶、纤维二糖酶(cellobias)和苦杏仁苷酶。它属于纤维素酶类，是纤维素分解酶系中的重要组成成分，能够水解糖苷类，同时释放出β-d-葡萄糖和香气成分。
固定化酶(immobilizedenzyme)是20世纪60年代发展起来的一种新技术，是用物理或化学方法处理水溶性的酶使之变成不溶于水或固定于固相载体的但仍具有酶活性的酶衍生物。与游离酶相比，固定化酶可以较长时间内反复分批反应和装柱连续反应，从而提高了酶的使用效率，增加产物的收率，降低了成本；在反应完成后固定化酶极易与产物分开，简化提纯工艺，提高了产物的质量。因此，广泛应用于污水治理、医药工程、化工合成等领域，但在烟用藏红花提取物制备中却未见报道。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种固定化β-葡萄糖苷酶制备烟用藏红花提取物的方法，该方法工艺简单，成本低，藏红花提取得率高、品质好。
本发明的制备方法包括以下步骤：
(1)取藏红花干花，加入其5～15倍重量的水，微波提取两次，每次1-3h，将提取液静置冷却后过滤，收集滤液得到藏红花提取液；
(2)将0.1～0.3g固体β-葡萄糖苷酶溶于1ml柠檬酸缓冲液(0.1mol/l，ph4.5)中，加入15～20ml质量浓度为2％的海藻酸钠溶液，搅拌均匀，再加入20～30ml质量浓度为2％氯化钙溶液，4℃包埋1～3h后，用缓冲溶液洗涤，得海藻酸钠固定化酶，其承载量为10～20u/g。
(3)取固定化β-葡萄糖苷酶处理藏红花提取液，固定化β-葡萄糖苷酶固体用量0.5g/l～5g/l，酶处理的ph值3～7，酶处理温度30℃～40℃，酶处理时间5h～30h，处理完成后在3℃沉降处理36h～48h；
(4)将酶处理后的提取液过滤，得澄清的藏红花提取液，将过滤后的藏红花提取液减压浓缩，浓缩至相对密度为1.10～1.30，收集浓缩液得到烟用藏红花提取物。
进一步的，所述酶处理后的提取液过滤时，用滤纸过滤去大颗粒的杂质，得澄清的藏红花提取液。
进一步的，所述过滤后的藏红花提取液减压浓缩时，浓缩温度为50～80℃，浓缩压力为0.01～0.1个大气压。
本发明的有益效果：本发明以固定化β-葡萄糖苷酶处理藏红花提取物，水解藏红花中的香气前体物质，释放出潜在的芳香成分，大大提高了藏红花中的芳香物质的提取得率，得到香气更丰富、品质更好的特色烟用香原料。本发明所制备的藏红花提取物具有清新的花香香气，并带有宜人的甜香香韵。将藏红花提取物添加到卷烟中，具有丰富烟香、增加甜香香韵的作用。本发明改善了藏红花提取物的品质，提升了了藏红花提取物在卷烟中适应性；该方法实现了连续操作，，生产工艺简单，便于工业化转化；提高了产物的得率，降低了成本。
利用固定化β-葡萄糖苷酶处理藏红花提取物，释放藏红花提取物中藏红花醛、二氢-β-紫罗兰酮、异佛尔酮等芳香物质，制备特色的烟用藏红花提取物，该方法工艺简单，成本低，提取得率高，香料品质好。与游离β-葡萄糖苷酶处理藏红花提取物相比，固定化处理后，不需要通过膜分离去除游离酶，简化了生产工艺，便于工业化生产转化；减少了提取分离过程中的损失，得率提高了3.8％～10.9％；藏红花提取物中主要香气物质藏红花醛、二氢-β-紫罗兰酮、异佛尔酮相对含量提高了13.3％～14.8％，添加到卷烟中，卷烟香气更加丰富，甜香韵更加明显。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的有关技术问题作进一步详细的描述。
实施例1
(1)取藏红花干花，加入其5倍重量的水，微波提取两次，每次1小时，将提取液静置冷却后过滤，收集滤液得到藏红花提取液；
(2)将0.2g固体β-葡萄糖苷酶溶于1ml柠檬酸缓冲液(0.1mol/l，ph4.5)中，加入18ml质量浓度为2％的海藻酸钠溶液，搅拌均匀，再加入26ml质量浓度为2％(w/v)氯化钙溶液，4℃包埋1.5h后，用缓冲溶液洗涤，得海藻酸钠固定化酶，其承载量为15u/g。
(3)取固定化β-葡萄糖苷酶处理藏红花提取液，固定化β-葡萄糖苷酶固体用量0.5g/l，酶处理的ph值3～4，酶处理温度35℃，酶处理时间30h，处理完成后在3℃沉降处理36h；
(4)将酶处理后的提取液用滤纸过滤去除大颗粒的杂质，得澄清的藏红花提取液，将过滤后的藏红花提取液减压浓缩，浓缩温度为50℃，浓缩压力为0.01个大气压，浓缩至相对密度为1.10，收集得到烟用藏红花提取物。
实施例2
(1)取藏红花干花，加入其15倍重量的水，微波提取两次，每次3小时，将提取液静置冷却后过滤，收集滤液得到藏红花提取液；
(2)将0.1g固体β-葡萄糖苷酶溶于1ml柠檬酸缓冲液(0.1mol/l，ph4.5)中，加入15ml质量浓度为2％的海藻酸钠溶液，搅拌均匀，再加入20ml质量浓度为2％(w/v)氯化钙溶液，4℃包埋1h后，用缓冲溶液洗涤，得海藻酸钠固定化酶，其承载量为10u/g。
(3)取固定化β-葡萄糖苷酶处理藏红花提取液，固定化β-葡萄糖苷酶固体用量5g/l，酶处理的ph值5～6，酶处理温度30℃，酶处理时间15h，处理完成后在3℃沉降处理40h；
(4)将酶处理后的提取液用滤纸过滤去除大颗粒的杂质，得澄清的藏红花提取液，将过滤后的藏红花提取液减压浓缩，浓缩温度为80℃，浓缩压力为0.1个大气压，浓缩至相对密度为1.30，收集得到烟用藏红花提取物。
实施例3
(1)取藏红花干花，加入其10倍重量的水，微波提取两次，每次2小时，将提取液静置冷却后过滤，收集滤液得到藏红花提取液；
(2)将0.3g固体β-葡萄糖苷酶溶于1ml柠檬酸缓冲液(0.1mol/l，ph4.5)中，加入20ml质量浓度为2％的海藻酸钠溶液，搅拌均匀，再加入30ml质量浓度为2％(w/v)氯化钙溶液，4℃包埋3h后，用缓冲溶液洗涤，得海藻酸钠固定化酶，其承载量为20u/g。
(3)取固定化β-葡萄糖苷酶处理藏红花提取液，固定化β-葡萄糖苷酶固体用量2g/l，酶处理的ph值6～7，酶处理温度40℃，酶处理时间5h，处理完成后在3℃沉降处理48h；
(4)将酶处理后的提取液用滤纸过滤去除大颗粒的杂质，得澄清的藏红花提取液，将过滤后的藏红花提取液减压浓缩，浓缩温度为65℃，浓缩压力为0.06个大气压，浓缩至相对密度为1.2，收集得到烟用藏红花提取物。
实施例4
(1)取藏红花干花，加入其7倍重量的水，微波提取两次，每次1.4h，将提取液静置冷却后过滤，收集滤液得到藏红花提取液；
(2)将0.15g固体β-葡萄糖苷酶溶于1ml柠檬酸缓冲液(0.1mol/l，ph4.5)中，加入16ml质量浓度为2％的海藻酸钠溶液，搅拌均匀，再加入27ml质量浓度为2％氯化钙溶液，4℃包埋2h后，用缓冲溶液洗涤，得海藻酸钠固定化酶，其承载量为17u/g。
(3)取固定化β-葡萄糖苷酶处理藏红花提取液，固定化β-葡萄糖苷酶固体用量3.5g/l，酶处理的ph值5.5～6.6，酶处理温度36℃，酶处理时间20h，处理完成后在3℃沉降处理38h；
(4)将酶处理后的提取液用滤纸过滤去大颗粒的杂质，得澄清的藏红花提取液，将过滤后的藏红花提取液减压浓缩，浓缩温度为72℃，浓缩压力为0.08个大气压浓缩至相对密度为1.24，收集浓缩液得到烟用藏红花提取物。
本发明采用固定化β-葡萄糖苷酶处理藏红花提取液，将其与其他步骤与本发明相同，而采用游离β-葡萄糖苷酶处理藏红花提取液的处理方式比较，如表1所示，为不同处理方式藏红花提取物中藏红花醛、二氢-β-紫罗兰酮、异佛尔酮相对含量比较，如表2所示，将不同处理方式下的藏红花提取物，添加到卷烟中的卷烟评吸结果。
表1藏红花醛、二氢-β-紫罗兰酮、异佛尔酮相对含量比较
表2不同处理方式的藏红花提取在卷烟中的感官评价效果
本发明的制备方法使藏红花提取物的得率提高了3.8％～10.9％；以上实验结果表明：藏红花提取物中主要香气物质藏红花醛、二氢-β-紫罗兰酮、异佛尔酮相对含量提高了13.3％～14.8％，将其添加到卷烟中，卷烟香气更加丰富，甜香韵更加明显。充分说明了采用本发明的提取方法制备出了产量更高、品质更好的藏红花提取物。
以上所述仅为本发明的具体实施方案的详细描述，并不以此限制本发明，凡在本发明的设计思路上所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。