本发明涉及一种补骨脂素酯类衍生物及用途，尤其涉及该类化合物经过抗白癜风和抗菌活性筛选，所有补骨脂素酯类衍生物均可用于临床上制备治疗白色念珠菌(Candida albicans)感染的药物；除8e-8j、8p以外的其余13个化合物均可用于临床上制备治疗白癜风的药物；且化合物5和7还可用于临床上制备治疗金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染的药物。
背景技术：
白癜风是一种常见的自发或特发性的色素脱失性皮肤病，被称为世界皮肤病三大顽症之一，困扰全世界5000万以上的患者。在世界不同地域、不同种族间发病率从0.1％-8％不等，我国一般人群患病率为0.56％左右，大约一半患者于20周岁以前发病，男性和女性的患病率相等。白癜风主要表现为皮肤、粘膜的白斑及灰/白色毛发等。西医认为白癜风是由于皮肤和毛囊的黑素细胞内酪氨酸酶系统的功能减退、丧失而引起的。
补骨脂为豆科一年生草本植物补骨脂(Psoralea corylifolia L.)的干燥成熟果实，收载于《中国药典》、《维吾尔药志》、《中华本草-维吾尔分卷》等，是历代传统维吾尔医治疗白癜风的主要经典药物。维吾尔医学认为白癜风主要由异常粘液质引起，治疗时主张清除异常体液，纠正异常气质，从而恢复机体自然力。补骨脂具有生干生热、清除异常黏液质、净血解毒、增加色素、杀驱肠虫等功效。此外，补骨脂还具有抗菌、雌激素样作用、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节和抗抑郁等多种生物活性。
目前以植物补骨脂为主要成分的药物和制剂，临床上主要用于治疗白癜风：如复方补骨脂颗粒、补骨脂注射液、复方补骨脂酊、驱白巴布斯片、复方卡力孜然酊(维药名维阿露)等。尽管维药治疗白癜风效果显著，优势明显，但是其物质基础研究薄弱，作用机制和体内外代谢过程亦不明晰，严重的制约了其二次开发。
经过多年研究，国内外研究人员已经从补骨脂(Psoralea corylifolia L.)中分离出补骨脂素类化合物(呋喃香豆素类化合物)、黄酮类、萜类、以及少量脂类和挥发油。其中补骨脂素类化合物(呋喃香豆素类化合物)作为其中的主要化学成分，研究范围最广。
补骨脂素类化合物(Psoralen)是目前临床上治疗白癜风最常用的光敏性药物，但是必须配合日光或长波紫外线(UVA)照射治疗，所以此种治疗方法称为PUVA(Psoralen+UVA)。常用的有8-甲氧基补骨脂素(8-MOP)和5-甲氧补骨脂素(5-MOP)，后来又人工合成了三甲基补骨脂素(TMP)，如结构所示。在白癜风的治疗中，PUVA能够激活酪氨酸酶活性，催化黑素合成，促进黑素细胞的分裂及移动，最终使黑色素合成增加，白斑颜色逐渐恢复。
三种常用补骨脂素类化合物的结构
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本发明在国内外有关专利、文献的综合分析和本课题组前期研究工作的基础上，对该植物中的活性化合物—补骨脂素进行进一步的改造和修饰，通过酯化反应将取代苯基等引入到补骨脂素分子中，提高其成药性，并研究了这些酯类衍生物对小鼠B16细胞中黑素生成的影响，以期发现疗效显著、靶点明确、作用机理清晰的抗白癜风新药；除此以外，还研究了这些衍生物对白色念珠菌(Candida albicans)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑制作用，以期发现具有抗菌活性的候选药物。
技术实现要素：
本发明的目的在于，提供一种补骨脂素酯类衍生物及用途，该类化合物为4-甲基-7-羟基香豆素(中间体1)；4-甲基-7-羟乙氧基香豆素(中间体2)；4-甲基-7-甲酰甲氧基香豆素(中间体3)；5-甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮(化合物4)；7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-甲醛(化合物5)；5-羟甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮(化合物6)；(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-基)甲基乙酸酯(化合物7)和化合物8a-8p。并考察这20个补骨脂素酯类衍生物对小鼠B16细胞中黑素生成的影响和对白色念珠菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用，抗白癜风结果：除8e-8j、8p以外的其余13个化合物在制备治疗白癜风的药物用途。抗菌结果：所获得的20个补骨脂素酯类衍生物在制备治疗白色念珠菌感染的药物用途，且化合物5和7还可用于在制备治疗金黄色葡萄球菌感染的药物用途。
本发明所述的一种补骨脂素酯类衍生物，该类衍生物结构式为：
其中：化合物4为5-甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮；
化合物5为7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-甲醛；
化合物6为5-羟甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮；
化合物7为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-基)甲基乙酸酯；
化合物8a为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-甲基)苯甲酸酯；
化合物8b为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-甲基)苯甲酸酯；
化合物8c为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-甲氧基)苯甲酸酯；
化合物8d为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-甲氧基)苯甲酸酯；
化合物8e为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-氯)苯甲酸酯；
化合物8f为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-氯)苯甲酸酯；
化合物8g为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3,4-二氯)苯甲酸酯；
化合物8h为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3,5-二氯)苯甲酸酯；
化合物8i为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-氟)苯甲酸酯；
化合物8j为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2,4-二氟)苯甲酸酯；
化合物8k为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基苯甲酸酯；
化合物8l为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-硝基)苯甲酸酯；
化合物8m为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-三氟甲基)苯甲酸酯；
化合物8n为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3-硝基)苯甲酸酯；
化合物8o为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3,5-二硝基)苯甲酸酯；
化合物8p为(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-碘)苯甲酸酯。
所述的补骨脂素酯类衍生物在制备治疗白色念珠菌感染的药物中的用途。
所述的补骨脂素酯类衍生物中化合物4-7，化合物8a-8d和化合物8k-8o在制备治疗白癜风的药物中的用途。
所述的补骨脂素酯类衍生物中化合物5和7在制备治疗金黄色葡萄球菌感染的药物中的用途。
本发明所述的一种补骨脂素酯类衍生物及用途，该类化合物以间苯二酚为起始原料，在硫酸的作用下，首先与乙酰乙酸乙酯缩合得到4-甲基-7-羟基香豆素(中间体1)；中间体1再与氯乙醇反应得到4-甲基-7-羟乙氧基香豆素(中间体2)；然后将中间体2氧化得到4-甲基-7-甲酰甲氧基香豆素(中间体3)；由中间体3在氢氧化钠的催化下，关环形成呋喃环，从而得到5-甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮(化合物4)；将得到的母核化合物4后，进一步利用二氧化硒氧化其5-位甲基，得到7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-甲醛(化合物5)；再在室温条件下，将化合物5的醛基还原成羟甲基，得到5-羟甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮(化合物6)；最后，采用乙酸酐和不同的取代苯甲酸为酯化试剂，制备得到(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-基)甲基乙酸酯(化合物7)和化合物8a-8p。再将获得的这20个补骨脂素酯类衍生物对小鼠B16细胞中黑素生成的影响和对白色念珠菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用考察，其结果：
抗白癜风结果显示：与阴性对照相比，除8e-8j、8p以外的其余13个化合物可促进B16细胞中黑素的生成，且促进作用从112％到200％不等；与阳性对照相比，化合物6、8a-8d、8l、8n-8o对黑素生成的促进作用均优于阳性对照，其中化合物8n和8o对黑素生成的促进作用接近阳性对照的1.5倍。
抗菌结果显示：所获得的20个补骨脂素酯类衍生物对白色念珠菌(Candida albicans)均有抑制作用，其中化合物5对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)也表现出了抑制作用，且对白色念珠菌(Candida albicans)的活性优于阳性对照两性霉素B(Amphotericin B)；化合物7对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)也表现出了抑制作用，且对白色念珠菌(Candida albicans)的活性优于阳性对照两性霉素B(Amphotericin B)。所有化合物均可用于临床上制备治疗白色念珠菌(Candida albicans)感染的药物，且化合物5和化合物7还可用于临床上制备治疗金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染的药物。
本发明所述的一种补骨脂素酯类衍生物，其结构如通式(I)所示：
本发明所述的补骨脂素酯类衍生物的制备方法，按下列步骤进行：
中间体1的制备：
a、在冰浴条件下，将间苯二酚溶解在适量的干燥1,4-二氧六环中，搅拌至全部溶解，缓慢滴加浓硫酸，使其温度不超过20℃，滴加完毕后，再加入乙酰乙酸乙酯，然后升温至60℃，充分搅拌使其反应完全，反应液倾倒入冰水中，静置后采用乙酸乙酯萃取，有机相合并干燥，浓缩后得中间体1，4-甲基-7-羟基香豆素；
中间体2的制备：
b、将适量碳酸钾和4-甲基-7-羟基香豆素溶解在20mL的丙酮中，并加入2-氯乙醇，回流反应至原料全部消失，反应液过滤，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比1∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得中间体2，4-甲基-7-羟乙氧基香豆素；
中间体3的制备：
c、将草酰氯至于-78℃的低温反应器中，缓慢滴加二甲基亚砜(DMSO)，搅拌半小时，再将步骤b所得到的4-甲基-7-羟乙基氧基香豆素溶解于干燥的二氯甲烷中，缓慢滴加至反应体系中，滴加完毕后搅拌半小时，再滴加三乙胺是反应体系中所形成复合物解离，滴加完毕后缓慢伸至室温，反应液水洗三遍，有机相干燥过夜，浓缩得中间体3，4-甲基7-甲酰甲氧基香豆素；
化合物4的制备：
d、制备1mol/L的NaOH水溶液，加热使其回流，将步骤c中所得到的4-甲基-7-甲酰甲氧基香豆素溶解在1-,4二氧六环中，缓慢滴加至回流的NaOH水溶液中，充分搅拌并保持回流反应至原料全部消失，冷却至室温，加入1mol/L盐酸溶液调节pH至中性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比7∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得化合物4，5-甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮；
化合物5的制备：
e、将步骤d所得到的化合物4和二氧化硒溶解在干燥二甲苯中，加热至回流反应，待原料全部消失后，冷却至室温，母液过滤，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比10:1的石油醚∶乙酸乙酯，即得化合物5，7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-甲醛；
化合物6的制备：
f、将步骤e中所得到的化合物5溶解在无水乙醇中，充分搅拌使其溶解，分次加入硼氢化钠，继续在室温下反应直到原料全部消失，加入稀盐酸淬灭反应，加水稀释后用乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比5∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得化合物6，5-羟甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮；
化合物7的制备：
g、将步骤f中所得到化合物6，4-二甲胺基吡啶和一滴乙酸酐溶解在少量干燥的吡啶中，室温搅拌过夜，加入适量冰水，乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比10∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得化合物7，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-基)甲基乙酸酯；
化合物8a-8p的制备：
h、冰浴条件下，将步骤g中所得到的化合物7，二环己基碳二亚胺(DCC),4-二甲胺基吡啶(DMAP)和相应的苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比15∶1—10:1的石油醚∶乙酸乙酯，即得化合物8a-8p；
本发明所述的补骨脂素酯类衍生物及用途，其中补骨脂素酯类衍生物，是以间苯二酚为起始原料，在硫酸的作用下与乙酰乙酸乙酯得到4-甲基7-羟基香豆素(中间体1)；中间体1再与氯乙醇反应得到4-甲基-7-羟乙氧基香豆素(中间体2)；氧化中间体2的羟乙基得到4-甲基-7-甲酰甲氧基香豆素(中间体3)；中间体3再在碱的作用下关环得到5-甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮(化合物4)。接下来，进一步氧化4得到7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-甲醛(化合物5)；再将5的醛基还原成羟甲基，得到5-羟甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮(化合物6)；最后，采用乙酸酐和不同的取代苯甲酸将6酯化，制备得到(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-基)甲基乙酸酯(化合物7)和化合物8a-8p。化学反应式为：
(i)乙酰乙酸乙酯，浓硫酸，温度60℃；(ii)氯乙醇，碳酸钾，丙酮，回流；(iii)温度-78℃,草酰氯，二甲基亚砜，三乙胺，二氯甲烷；(iv)1M氢氧化钠水溶液，1,4-二氧六环；(v)二氧化硒，二甲苯，回流；(vi)无水乙醇，硼氢化钠，室温；(vii)4-二甲胺基吡啶，乙酸酐，吡啶，室温；(viii)二环己基碳二亚胺，4-二甲胺基吡啶，二氯甲烷，温度0℃-室温；其中R1分别为4-甲基、2-甲基、4-甲氧基、2-甲氧基、4-氯、2-氯、3,4-二氯、3,5-二氯、4-氟、2,4-二氟、氢、4-硝基、4-三氟甲基、3-硝基基、3,4-二硝基、2-碘。
具体实施方式
依据实施例对本发明进一步说明，但本发明不仅限于这些实施例；
试剂：所有试剂均为市售的分析纯；
实施例1
中间体2的制备：
在室温条件下，将1.76g(10mmol)中间体1和2.76g(20mmol)碳酸钾溶解在50mL丙酮中，再加入1.20g(15mmol)2-氯乙醇，加热至回流反应，待原料全部消失后，停止反应，冷却至室温，过滤，滤液浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比1∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得2.10g中间体2，4-甲基-7-羟乙氧基香豆素；
4-甲基-7-羟乙氧基香豆素(中间体2)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)d 7.51(d,J＝9.0Hz,1H),6.91–6.83(m,2H),6.15(d,J＝1.1Hz,1H),4.15(t,J＝8.7Hz,2H),4.01(m,2H),2.40(d,J＝1.1Hz,3H).
中间体3的制备：
在温度-78℃的低温反应条件下，将50.25g(2mmol)草酰氯溶于少量的干燥二氯甲烷中，缓慢滴加含有0.16g(2mmol)二甲基亚砜(DMSO)的二氯甲烷溶液，搅拌半小时，再将0.22g(1mmol)中间体2溶解于干燥的二氯甲烷中，缓慢滴加至反应体系中，滴加完毕后搅拌半小时，最后将0.51g(5mmol)三乙胺滴加至反应体系，使反应体系中所形成复合物解离，滴加完毕后缓慢伸至室温，反应液水洗三遍，有机相干燥过夜，浓缩得到0.21g中间体3，4-甲基7-甲酰甲氧基香豆素；
4-甲基7-甲酰甲氧基香豆素(中间体3)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.85(s,1H),7.53(d,J＝8.8Hz,1H),6.89(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),6.78(d,J＝2.5Hz,1H),6.15(d,J＝1.0Hz,1H),4.68(s,2H),2.39(d,J＝0.9Hz,3H).
化合物4的制备：
配置1M的氢氧化钠水溶液，加热使其回流，将1.09g(5mmol)4-甲基-7-甲酰甲氧基香豆素溶解在50mL 1-,4二氧六环中，缓慢滴加至回流的1mol/L的NaOH水溶液中，充分搅拌至原料全部消失，冷却至室温，加入1mol/L盐酸溶液调节pH至中性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，浓缩，将残渣采用洗脱剂为体积比7∶1的石油醚:乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，即得0.60g化合物4，5-甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮；
5-甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮(化合物4)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.81(s,1H),7.69(d,J＝2.2Hz,1H),7.47(s,1H),6.85(d,J＝2.1Hz,1H),6.27(s,1H),2.50(s,3H).
化合物5的制备：
将0.20g(1mmol)化合物4和0.17g(1.5mmol)二氧化硒溶解在干燥二甲苯中，加热至回流反应，待原料全部消失后，冷却至室温，母液过滤，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比10:1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.16g化合物5，7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-甲醛；
7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-甲醛(化合物5)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.14(s,1H),8.90(s,1H),7.72(d,J＝2.1Hz,1H),7.54(s,1H),6.89(d,J＝2.0Hz,1H),6.86(s,1H).
化合物6的制备：
将0.21g(1mmol)化合物5溶解在无水乙醇中，充分搅拌使其溶解，分次加入0.019g(0.5mmol)硼氢化钠，继续在室温下反应直到原料全部消失，加入稀盐酸淬灭反应，加水稀释后用乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比5∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.17g化合物6，5-羟甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮；
5-羟甲基-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-7-酮(化合物6)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.98(s,1H),7.89(d,J＝2.3Hz,1H),7.57(s,1H),6.99(d,J＝2.1,1H),6.58(s,1H),4.97(s,2H).
化合物7的制备：
将0.216g(1mmol)化合物6，1mg 4-二甲胺基吡啶和一滴乙酸酐溶解在少量干燥的吡啶中，室温搅拌过夜，加入适量冰水，乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比10∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.20g化合物7，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-基)甲基乙酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-基)甲基乙酸酯(化合物7)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.82(s,1H),7.71(d,J＝2.1,1H),7.47(s,1H),6.86(d,J＝2.0,1H),6.49(s,1H),5.37(s,2H),2.23(s,3H).
化合物8a的制备：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.16g(1.2mmol)4-甲基苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比15∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.30g化合物8a，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-甲基)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-甲基)苯甲酸酯(化合物8a)的核磁数据：
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.02(d,J＝8.1Hz,2H),7.81(s,1H),7.71(d,J＝2.1Hz,1H),7.53(s,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,2H),6.86(d,J＝2.1Hz,1H),6.60(s,1H),5.60(s,2H),2.44(s,3H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ165.77,160.75,156.37,151.71,149.62,147.14,144.67,129.89,129.40,126.23,124.94,115.46,113.68,111.57,106.57,100.37,61.65,21.76。
实施例2
化合物8b的制备：
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.16g(1.2mmol)2-甲基苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比15∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.31g化合物8b，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-甲基)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-甲基)苯甲酸酯(化合物8b)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(8.04(dd,J＝7.8,0.8Hz,1H),7.83(s,1H),7.72(d,J＝2.1Hz,1H),7.54(s,1H),7.50-7.44(m,1H),7.33-7.28(m,2H),6.87(d,J＝2.2Hz,1H),6.59(s,1H),5.60(s,2H),2.65(s,3H)；
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.28,160.68,156.35,151.71,149.55,147.11,141.04,132.82,132.00,130.76,125.99,124.91,115.45,113.69,111.74,106.53,100.36,61.61,21.88。
实施例3
化合物8c的制备：
化合物2-化合物7的制备依据实施例1。
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.18g(1.2mmol)4-甲氧基苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比15∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.32g化合物8c，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-甲氧基)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-甲氧基)苯甲酸酯(化合物8c)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.09(d,J＝8.8Hz,2H),7.82(s,1H),7.71(d,J＝2.1Hz,1H),7.54(s,1H),6.97(d,J＝8.9Hz,2H),6.86(d,J＝2.0Hz,1H),6.59(s,1H),5.60(s,2H),3.89(s,3H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ165.56,160.91,156.52,151.87,149.90,147.28,132.12,129.20,125.08,121.44,115.62,114.11,113.91,111.67,106.72,100.51,61.68,55.69。
实施例4
化合物8d的制备：
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.18g(1.2mmol)2-甲氧基苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比15∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.31g化合物8d，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-甲氧基)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-甲氧基)苯甲酸酯(化合物8d)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.92(dd,J＝7.9,1.8Hz,1H),7.82(s,1H),7.71(d,J＝2.2Hz,1H),7.57-7.50(m,1H),7.06-7.00(m,2H),6.86(d,J＝2.2Hz,1H),6.73(s,1H),5.60(s,2H),3.95(s,3H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ165.56,160.86,159.54,156.33,151.72,149.65,147.10,134.49,132.20,124.87,120.35,118.61,115.50,113.73,112.11,111.79,106.57,100.30,61.78,55.94。
实施例5
化合物8e的制备：
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.19g(1.2mmol)4-氯苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.33g化合物8e，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-氯)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-氯)苯甲酸酯(化合物8e)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.07(d,J＝8.6Hz,2H),7.80(s,1H),7.72(d,J＝2.3Hz,1H),7.55(s,1H),7.48(d,J＝8.6Hz,2H),6.87(d,J＝2.1Hz,1H),6.57(s,1H),5.62(s,2H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ164.89,160.63,156.42,151.72,149.20,147.22,140.40,131.23,129.10,127.41,125.00,115.41,113.58,111.72,106.56,100.46,62.03。
实施例6
化合物8f的制备：
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.19g(1.2mmol)2-氯苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.33g化合物8f，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-氯)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-氯)苯甲酸酯(化合物8f)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.95(dd,J＝7.6,1.3Hz,1H),7.82(s,1H),7.72(d,J＝2.3Hz,1H),7.54(s,1H),7.53-7.48(m,2H),7.41-7.35(m,1H),6.87(d,J＝2.2Hz,1H),6.64(s,1H),5.63(s,2H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ164.92,160.79,156.55,151.89,149.04,147.33,134.37,133.55,131.94,131.60,128.88,127.01,125.11,115.68,113.74,112.24,106.71,100.56,62.57。
实施例7
化合物8g的制备：
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.23g(1.2mmol)3,4-二氯苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.35g化合物8g，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3,4-二氯)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3,4-二氯)苯甲酸酯(化合物8g)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝2.0Hz,1H),7.95(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H),7.80(s,1H),7.73(d,J＝2.3Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(s,1H),6.87(d,J＝2.1Hz,1H),6.55(s,1H),5.63(s,2H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.97,160.54,158.21,153.31,147.28,143.32,138.63,136.04,131.73,130.90,128.83,127.59,122.64,120.23,115.41,111.86,106.56,100.50,62.34。
实施例8
化合物8h的制备：
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.23g(1.2mmol)3,5-二氯苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.35g化合物8h，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3,5-二氯)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3,5-二氯)苯甲酸酯(化合物8h)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝1.9Hz,2H),7.79(s,1H),7.73(d,J＝2.2Hz,1H),7.62(t,J＝1.9Hz,1H),7.55(s,1H),6.87(d,J＝2.1Hz,1H),6.54(s,1H),5.63(s,2H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.67,160.63,156.59,151.86,148.84,147.41,135.83,133.77,131.88,128.96,128.32,125.18,115.52,112.04,106.68,100.63,62.64。
实施例9
化合物8i的制备：
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.17g(1.2mmol)4-氟苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.30g化合物8i，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-氟)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-氟)苯甲酸酯(化合物8i为)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.19-8.12(m,2H),7.81(s,1H),7.72(d,J＝2.2Hz,1H),7.54(s,1H),7.18(t,J＝8.6Hz,2H),6.87(d,J＝2.1Hz,1H),6.57(s,1H),5.62(s,2H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ164.87,160.78,156.54,151.85,149.47,147.35,146.81,132.62,125.13,116.20,115.98,115.56,111.78,106.69,100.56,62.04。
实施例10
化合物8j的制备：
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.19g(1.2mmol)2,4-二氟苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.32g化合物8i，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2,4-二氟)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2,4-二氟)苯甲酸酯(化合物8j)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(td,J＝8.5,6.5Hz,1H),7.81(s,1H),7.72(d,J＝2.2Hz,1H),7.54(s,1H),7.04-6.90(m,2H),6.87(d,J＝2.0Hz,1H),6.63(s,1H),5.63(s 2H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ165.18,164.55,162.94,160.79,156.54,151.85,149.00,147.33,134.41,125.10,115.56,113.67,112.34,112.12,111.97,106.70,105.76,100.56,62.40。
实施例11
化合物8k的制备
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.15g(1.2mmol)苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.29g化合物8i，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基苯甲酸酯(化合物8k)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16-8.11(m,2H),7.82(s,1H),7.72(d,J＝2.2Hz,1H),7.64(t,J＝7.4Hz,1H),7.56-7.47(m,3H),6.87(d,J＝2.2Hz,1H),6.61(s,1H),5.63(s,2H).
13C NMR(101MHz,CDCl)δ165.87 160.85,156.54,151.88,149.61,147.32,133.94,131.04,130.01,128.85,125.11,115.60,113.81,111.79,106.72,100.55,61.96。
实施例12
化合物8l的制备
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.20g(1.2mmol)4-硝基苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.30g化合物8l，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-硝基)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-硝基)苯甲酸酯(化合物8l)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38-8.26(m,5H),7.81(s,1H),7.73(d,J＝2.3Hz,1H),7.56(s,1H),6.87(d,J＝2.1Hz,1H),6.57(s,1H),5.68(s,2H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ165.87,160.85,156.54,151.88,149.61,147.32,133.94,131.04,130.01,128.85,125.11,115.60,113.81,111.79,106.72,100.55,61.96。
实施例13
化合物8m的制备
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.23g(1.2mmol)4-三氟甲基苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.34g化合物8m，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-三氟甲基)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(4-三氟甲基)苯甲酸酯(化合物8m)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(d,J＝8.0Hz,2H),7.81(s,1H),7.77(d,J＝8.3Hz,2H),7.73(d,J＝2.3Hz,1H),7.56(s,1H),6.87(d,J＝2.2Hz,1H),6.58(s,1H),5.66(s,2H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.84,160.71,156.60,151.87,149.06,147.42,137.47,130.44,127.12,125.94,125.18,115.53,112.03,110.18,106.70,100.67,62.48。
实施例14
化合物8n的制备
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.23g(1.2mmol)3-硝基苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.31g化合物8n，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3-硝基)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3-硝基)苯甲酸酯(化合物8n)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52-8.37(m,4H),7.83(s,1H),7.73(d,J＝2.2Hz,1H),7.56(s,1H),6.87(d,J＝2.1Hz,1H),6.56(s,1H),5.69(s,2H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ164.82,162.22,156.99,156.59,147.46,142.58,135.51,133.05,130.20,129.53,128.34,125.05,115.55,112.20,109.31,106.70,100.71,62.77。
实施例15
化合物8o的制备
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.25g(1.2mmol)3,5-二硝基苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.35g化合物8o，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3,5-二硝基)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(3,5-二硝基)苯甲酸酯(化合物8o)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.30(s,1H),9.24-9.21(m,2H),7.83(s,1H),7.74(d,J＝2.2Hz,1H),7.57(s,1H),6.89(d,J＝2.1Hz,1H),6.53(s,1H),5.75(s,2H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ165.43,161.05,156.71,152.14,148.89,146.65,144.81,135.20,132.03,129.76,128.83,124.97,116.08,112.12,107.33,100.36,62.43。
实施例16
化合物8p的制备
化合物2-化合物7的制备依据实施例1进行：
冰浴条件下，将0.22g(1mmol)化合物6，0.21g(1mmol)二环己基碳二亚胺(DCC),0.12g(1mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和0.30g(1.2mmol)2-碘苯甲酸溶于适量的二氯甲烷中，充分搅拌使其全溶，移至室温条件下继续反应，待原料全部消失后，过滤，母液依次用1M盐酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩，将残渣采用柱层析梯度洗脱，洗脱剂为体积比12∶1的石油醚∶乙酸乙酯，即得0.38g化合物8p，(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-碘)苯甲酸酯；
(7-氧代-7H-呋喃[3,2-g]苯并吡喃-5-)甲基-(2-碘)苯甲酸酯(化合物8p)的核磁数据：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(d,J＝8.0Hz,1H),7.92(d,J＝7.6Hz,1H),7.82(s,1H),7.72(d,J＝1.9Hz,1H),7.54(s,1H),7.50-7.42(m,2H),6.87(d,J＝2.0Hz,1H),6.62(s,1H),5.63(s,2H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ160.79,156.46,149.03,147.35,141.89,133.56,131.41,128.33,125.13,123.26,116.70,115.69,113.65,112.28,110.17,106.72,100.58,62.59。
实施例17
本发明所述的补骨脂素类化合物在制备治疗白癜风药物中的用途，将实施例1-16获得的化合物4、5、6、7、8a-8p对B16黑素瘤细胞的黑素含量测定：
(1)筛选模型：小鼠B16黑素瘤细胞；
(2)细胞来源：中科院细胞库提供；
(3)培养条件：10％胎牛血清、1％双抗的高糖DMEM培养基来培养细胞24h后加入不同浓度的药物和阳性对照，分别在48h和72h测定酪氨酸活性和黑素含量；
(4)测定方法：
蛋白定量用Bradford法测定：
完全溶解蛋白标准品(5mg/mlBSA)，取10μl稀释至100μl，使终浓度为0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9％NaCl或PBS稀释标准品；将稀释后标准品(0.5mg/mlBSA)按0，1，2，4，8，12，16，20μl分别加到96孔板中，加标准品稀释液将所有标准品补足到20μl；加适当体积样品到96孔板的样品孔中，加标准品稀释液补足到20μl；各孔加入200μl Bradford染色液，用加样枪轻轻吹打混匀(注意不要弄出气泡影响读数)室温放置3-5分钟；用酶标仪测定A595；根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度；
黑素的含量用碱消化法进行测定：
正处于对数生长期的B16黑素瘤细胞接种于6cm培养皿中、浓度为2×105个/ml，各孔加5ml细胞悬浮液；接种12h后、待细胞完全贴壁后用药，用药浓度分别为5、10、20和40μg/ml；在72h后收集细胞；在不破碎细胞的情况下加入200μl的1MNaOH/10％DMSO溶液，置80℃水浴中2h后在470nm处测定吸收值A。未用药组(阴性对照组)作为对照组与用药组进行对比见表1；
表1衍生物对细胞中黑素合成和三种细菌的抗菌活性结果
从表中可以看出：化合物4-7，化合物8a-8d和化合物8k-8o均可用于临床上制备治疗白癜风的药物。所获得的补骨脂素酯类衍生物均可用于临床上制备治疗白色念珠菌感染的药物，且化合物5和化合物7还可用于临床上制备治疗金黄色葡萄球菌感染的药物。