技术总结
本发明为一种用于恶臭假单胞菌NBRC 14164的基因敲除方法，首先构建基因敲除质粒，查找拟敲除基因序列，设计基因敲除引物与敲除后验证引物，扩增产物经酶切、连接，质粒即构建成功；然后按照热激转化法制备接合转化的辅助菌株大肠杆菌感受态细胞，全程严格无菌操作，再将基因敲除质粒热激转化进入大肠杆菌感受态细胞；最后利用接合转化法导入质粒至P.putida中，接合转化利用两次同源重组将基因敲除，第一次同源重组质粒从E.coli进入P.putida中并整合到染色体上，第二次同源重组质粒与敲除引物扩增的基因从染色体上脱离，即基因敲除成功。
技术研发人员：贾晓强;刘畅
受保护的技术使用者：天津大学
文档号码：201610983580
技术研发日：2016.11.09
技术公布日：2017.03.08