本发明涉及一种从动物表皮中提取胶原蛋白的方法，具体涉及一种从牛皮中提取胶原蛋白的方法。
背景技术：
：胶原蛋白是一种细胞外蛋白质，由3条肽链拧成螺旋形的纤维状蛋白质，胶原蛋白含有丰富的氨基酸，其中必需氨基酸占氨基酸总量的15.78％，蛋白质营养价值高，胶原蛋白制品已被广泛应用于食品、保健食品、化妆品、医药等领域，市场需求急剧增加，因此胶原蛋白的提取工艺越来越受到关注；牛皮中富含胶原蛋白，但是牛皮一般用作皮鞋，皮包，皮带等各类皮具，其中的胶原蛋白在皮具加工过程中被破坏掉，造成了资源的浪费，在胶原蛋白备受关注的当下，提取方法也是多种多样，但是由于提取方法的不合理，导致后期对胶原蛋白提纯率与纯度较低，严重影响其应用价值，也浪费了资源，因此如何在传统提取方法的基础上进行改进来达到提高胶原蛋白的提取率和纯度就显得尤为重要。技术实现要素：本发明为解决上述技术问题，提供了一种从牛皮中提取胶原蛋白的方法。具体是通过以下技术方案来实现的：一种从牛皮中提取胶原蛋白的方法，包括以下步骤：(1)牛皮预处理：将新鲜牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.15～0.2％的生理盐水将牛皮浸泡25～30min，用清水冲洗牛皮10～15min，将牛皮剪成碎块，加入脱脂剂，浸泡35～40min，过滤，加入滤渣质量的3～5倍的酒石酸浸泡20～25min，用清水冲洗至滤渣水溶液PH值为6～7，得牛皮滤渣。脱脂剂，是将脱脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸馏水按1∶1.7～2.2∶0.5～0.8∶5.5～6的质量比混合，在55～60℃下熬制45～55min，即可。(2)熬合：将步骤(1)处理后的牛皮滤渣，烘干至含水量为5.5～7％，加水，在100℃下搅拌55～65min后，冷却至40～50℃，采用水浴恒温加热，加入柠檬酸调节溶液PH值为4.5～5.5，恒温搅拌2～3h，抽滤。(3)精制：将步骤(2)中抽滤得滤液，加入滤液质量的60～70％的乙醇，在40～50℃下水浴浸提50～60min，减压蒸馏回收乙醇，得残留液，加入残留液4～5倍的二氯甲烷，恒温搅拌90～100min，减压蒸馏回收二氯甲烷，将水浴温度调至100～120℃，继续搅拌10～15min，即可。进一步，所述的脱脂酶，是磷酸酯酶、固醇酶、羧酸酯酶和枯草杆菌脂肪水解酶中的一种。综上所述，本发明的有益效果在于：工艺简单，操作容易，充分利用牛皮资源，避免传统方法用来生产皮具的单一做法，经过本发明方法明显提高胶原蛋白的收率，高达75.6％，本发明方法对胶原蛋白的收率不受原材料的限制。具体实施方式下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。实施例1一种从牛皮中提取胶原蛋白的方法，包括以下步骤：(1)牛皮预处理：将新鲜牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.15％的生理盐水将牛皮浸泡25min，用清水冲洗牛皮10min，将牛皮剪成碎块，加入脱脂剂，浸泡35min，过滤，加入滤渣质量的3倍的酒石酸浸泡20min，用清水冲洗至滤渣水溶液PH值为6，得牛皮滤渣。脱脂剂，是将脱脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸馏水按1∶1.7∶0.5∶5.5的质量比混合，在55℃下熬制45min，即可。(2)熬合：将步骤(1)处理后的牛皮滤渣，烘干至含水量为5.5％，加水，在100℃下搅拌55min后，冷却至40℃，采用水浴恒温加热，加入柠檬酸调节溶液PH值为4.5，恒温搅拌2h，抽滤。(3)精制：将步骤(2)中抽滤得滤液，加入滤液质量的60％的乙醇，在40℃下水浴浸提50min，减压蒸馏回收乙醇，得残留液，加入残留液4倍的二氯甲烷，恒温搅拌90min，减压蒸馏回收二氯甲烷，将水浴温度调至100℃，继续搅拌10min，即可。所述的脱脂酶，是磷酸酯酶。实施例2一种从牛皮中提取胶原蛋白的方法，包括以下步骤：(1)牛皮预处理：将新鲜牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.2％的生理盐水将牛皮浸泡30min，用清水冲洗牛皮15min，将牛皮剪成碎块，加入脱脂剂，浸泡40min，过滤，加入滤渣质量的5倍的酒石酸浸泡25min，用清水冲洗至滤渣水溶液PH值为7，得牛皮滤渣。脱脂剂，是将脱脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸馏水按1∶2.2∶0.8∶6的质量比混合，在60℃下熬制55min，即可。(2)熬合：将步骤(1)处理后的牛皮滤渣，烘干至含水量为7％，加水，在100℃下搅拌65min后，冷却至50℃，采用水浴恒温加热，加入柠檬酸调节溶液PH值为5.5，恒温搅拌3h，抽滤。(3)精制：将步骤(2)中抽滤得滤液，加入滤液质量的70％的乙醇，在50℃下水浴浸提60min，减压蒸馏回收乙醇，得残留液，加入残留液5倍的二氯甲烷，恒温搅拌100min，减压蒸馏回收二氯甲烷，将水浴温度调至120℃，继续搅拌15min，即可。所述的脱脂酶，是固醇酶。实施例3一种从牛皮中提取胶原蛋白的方法，包括以下步骤：(1)牛皮预处理：将新鲜牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.18％的生理盐水将牛皮浸泡28min，用清水冲洗牛皮13min，将牛皮剪成碎块，加入脱脂剂，浸泡38min，过滤，加入滤渣质量的4倍的酒石酸浸泡23min，用清水冲洗至滤渣水溶液PH值为6.5，得牛皮滤渣。脱脂剂，是将脱脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸馏水按1∶2∶0.7∶5.8的质量比混合，在58℃下熬制50min，即可。(2)熬合：将步骤(1)处理后的牛皮滤渣，烘干至含水量为6％，加水，在100℃下搅拌60min后，冷却至45℃，采用水浴恒温加热，加入柠檬酸调节溶液PH值为5，恒温搅拌2.5h，抽滤。(3)精制：将步骤(2)中抽滤得滤液，加入滤液质量的65％的乙醇，在45℃下水浴浸提55min，减压蒸馏回收乙醇，得残留液，加入残留液4.5倍的二氯甲烷，恒温搅拌95min，减压蒸馏回收二氯甲烷，将水浴温度调至110℃，继续搅拌13min，即可。所述的脱脂酶，是羧酸酯酶。实施例4一种从牛皮中提取胶原蛋白的方法，包括以下步骤：(1)牛皮预处理：将新鲜牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.2％的生理盐水将牛皮浸泡25min，用清水冲洗牛皮15min，将牛皮剪成碎块，加入脱脂剂，浸泡35min，过滤，加入滤渣质量的3倍的酒石酸浸泡25min，用清水冲洗至滤渣水溶液PH值为6，得牛皮滤渣。脱脂剂，是将脱脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸馏水按1∶2.2∶0.5∶5.5的质量比混合，在55℃下熬制55min，即可。(2)熬合：将步骤(1)处理后的牛皮滤渣，烘干至含水量为7％，加水，在100℃下搅拌55min后，冷却至50℃，采用水浴恒温加热，加入柠檬酸调节溶液PH值为5.5，恒温搅拌3h，抽滤。(3)精制：将步骤(2)中抽滤得滤液，加入滤液质量的60％的乙醇，在40℃下水浴浸提60min，减压蒸馏回收乙醇，得残留液，加入残留液4倍的二氯甲烷，恒温搅拌90min，减压蒸馏回收二氯甲烷，将水浴温度调至120℃，继续搅拌15min，即可。所述的脱脂酶，是枯草杆菌脂肪水解酶。实施例5一种从牛皮中提取胶原蛋白的方法，包括以下步骤：(1)牛皮预处理：将新鲜牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.2％的生理盐水将牛皮浸泡25min，用清水冲洗牛皮10min，将牛皮剪成碎块，加入脱脂剂，浸泡35min，过滤，加入滤渣质量的3倍的酒石酸浸泡25min，用清水冲洗至滤渣水溶液PH值为7，得牛皮滤渣。脱脂剂，是将脱脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸馏水按1∶2.2∶0.5∶6的质量比混合，在55℃下熬制45min，即可。(2)熬合：将步骤(1)处理后的牛皮滤渣，烘干至含水量为7％，加水，在100℃下搅拌55min后，冷却至40℃，采用水浴恒温加热，加入柠檬酸调节溶液PH值为5.5，恒温搅拌3h，抽滤。(3)精制：将步骤(2)中抽滤得滤液，加入滤液质量的70％的乙醇，在50℃下水浴浸提50min，减压蒸馏回收乙醇，得残留液，加入残留液5倍的二氯甲烷，恒温搅拌90min，减压蒸馏回收二氯甲烷，将水浴温度调至120℃，继续搅拌10min，即可。所述的脱脂酶，是羧酸酯酶。实施例6操作方法同实施例1，不同之处在于将新鲜牛皮更换为保存3个月的干牛皮。实施例7操作方法同实施例1，不同之处在于在步骤(1)中不添加脱脂剂。实施例8操作方法同实施例1，不同之处在于在步骤(3)的精制步骤取消。实验例对本发明的实施例1～8的胶原蛋白的收率进行统计，结果如表1所示：表1对比项胶原蛋白(％)实施例174.8实施例275.1实施例375.6实施例475.2实施例574.9实施例675.1实施例741.3实施例855.6说明：实施例1～5为本发明的胶原蛋白的收率，高达75.6％，实施例6不是新鲜的牛皮，收率和新鲜的牛皮的胶原蛋白的收率接近，说明本发明方法对胶原蛋白的收率不受原材料的限制，实施例7不添加脱脂剂，极大的减少了胶原蛋白的收率，实施例8没有精制的步骤，减少了胶原蛋白的收率。实施例6～8均以实施例1为对照，若以实施2～5作为对照进行比较，结论不变。当前第1页1 2 3