一种外源基因在南瓜果实中的瞬时表达方法与流程

文档序号:12412166阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种外源基因在南瓜果实中的瞬时表达方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)将外源基因插入植物表达载体中;

(2)将步骤(1)得到的表达载体转化到农杆菌感受态细胞中,得到含有植物表达载体的农杆菌悬液;

(3)选取发育正常的雌花,待开花2-5天后,挑选与其花相连的南瓜幼果,缓慢注射步骤(2)制备得到的农杆菌悬浮液,使菌液渗入果肉;

(4)瞬时转化后2-5天,即可观察外源基因在南瓜果实中的表达情况。

2.根据权利要求1所述的瞬时表达方法,其特征在于,所述植物表达载体包括:pBI121或pMOG800。

3.根据权利要求1所述的瞬时表达方法,其特征在于,所述外源基因为衣藻CRBKT基因。

4.根据权利要求1所述的瞬时表达方法,其特征在于,步骤(2)的具体操作为:将含有外源基因的植物表达载体添加到农杆菌感受态细胞悬液中,冰上放置25-35min,然后将细胞悬液在40-45℃水浴中热激50-70s,迅速移出冰上放置冷却。

5.根据权利要求1所述的瞬时表达方法,其特征在于,步骤(3)所述农杆菌悬浮液的浓度为OD600=0.3-0.5。

6.根据权利要求5所述的瞬时表达方法,其特征在于,所述农杆菌悬浮液的组成包括:MES、MgCl2及AS。

7.根据权利要求6所述的瞬时表达方法,其特征在于,所述农杆菌悬浮液的组成包括:10 mM MES、10mM MgCl2及200μM AS。

8.根据权利要求5-7任一项所述的瞬时表达方法,其特征在于,所述农杆菌悬浮液的注射量为80-100μL。

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