本发明涉及免疫疗法的领域。特定言之，本发明涉及通过调节细胞上的cd11b表现以调控免疫反应的方法及抗体。
背景技术：
普遍咸信表现免疫原性抗原的癌细胞可诱发抗肿瘤形成的有效免疫反应。另外，肿瘤微环境富含可触发tlr传讯以活化抗肿瘤反应的组分(standifordtj,keshamounivg(2012)breakingthetolerancefortumor:targetingnegativeregulatorsoftlrsignaling.oncoimmunology1:340-345)。意谓，在疾病的初始阶段，癌细胞可有机会经免疫系统识别及排斥，所述免疫系统对发展中的肿瘤发挥宿主保护及肿瘤建模作用两者。然而，癌细胞亦具有许多负调节机制以逃避免疫监视，诸如mhc分子的下调或抗原处理及呈现机械；增加抑制细胞介素的分泌；及表现抑制分子以诱发对癌细胞的免疫耐受性。因此，通常认为癌症病患具有较差的免疫力。因此，仍需要开发用于逆转与免疫抑制相关的癌症的药剂或疗法。
整合素αm(cd11b、cr3a及itgam)是形成表现于许多免疫细胞(包括单核细胞、颗粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞、自然杀手细胞及骨髓衍生的抑制细胞)的表面上的异二聚整合素αmβ2分子的蛋白质次单元。整合素αmβ2通过通过其杂乱配体库调节细胞黏附、迁移、趋化作用及吞噬作用介导炎症。近期研究已指示通过调控tlr4反应用于炎症的关键作用(hanc、jinj、xus、liuh、lin等人，(2010)integrincd11bnegativelyregulatestlr-triggeredinflammatoryresponsesbyactivatingsykandpromotingdegradationofmyd88andtrifviacbl-b.natimmunol11:734-742)。血管的腔侧内的各种内源性整合素αmβ2配体(诸如血纤维蛋白原)可触发tlr4传讯。与β2整合素偶合的itam的高结合性连接瞬时诱发tlr活化，但通过靶向myd88及trif以进行cbl-b介导的蛋白水解降解以迅速抑制tlr传讯。因此，整合素αmβ2可充当选择性抑制tlr传讯通道的组分以阻断tlr家族的效应的负调节剂(wangl、gordonra、huynhl、sux、parkminkh等人，(2010)indirectinhibitionoftoll-likereceptorandtypeiinterferonresponsesbyitam-coupledreceptorsandintegrins.immunity32:518-530)。
pd-l1是共抑制蛋白中的一者，其以变化的浓度表现于许多类型的免疫细胞上且组成性地表现于单核细胞、巨噬细胞及树突状细胞、t细胞、b细胞、上皮细胞及血管内皮细胞上。一经正诱发(诸如ifn-γ及有丝分裂刺激)，则pd-l1将经进一步上调。pd-l1结合至其受体pd-1(其发现于经活化的t细胞上)，通过于经活化的t细胞中诱发共抑制讯息(其促进t细胞凋亡及无反应性)以产生强效免疫抑制(buttemj、keirme、phamduytb、sharpeah、freemangj(2007)programmeddeath-1ligand1interactsspecificallywiththeb7-1costimulatorymoleculetoinhibittcellresponses.immunity27:111-122；franciscolm、salinasvh、brownke、vangurivk、freemangj等人，(2009)pd-l1regulatesthedevelopment,maintenance,andfunctionofinducedregulatorytcells.jexpmed206:3015-3029)。pd-l1/pd-1相互作用的完整性对避免过度免疫反应亦是重要的。pd-l1与pd-1之间的相互作用的缺陷可导致免疫反应的失控传播，从而导致诸如以下的病症：自体免疫疾病、超敏反应、移植排斥及移植物抗宿主疾病。
us8,008,449提供经分离的特异性结合至pd-1的单株抗体(特定言之人类单株抗体)。us8,354,509涉及阻断人类程序化死亡受体1(hpd-1)与其配体(hpd-l1或hpd-l2)的结合的抗体。us8,900,587揭示阻断hpd-1与hpd-l1或hpd-l2的结合的抗体及通过pd-1路径增加(或减少下调)免疫细胞的活性的方法。us9,067,999及us9,073,994提供经由利用由pd-1、pd-l1或pd-l2诱发的免疫抑制讯息的抑制所引起的免疫增强作从而用于癌症或感染治疗的组合物及使用其等的疗法。然而，上文专利中提及的抗体对疗法具有低反应率。us20140099254a1提供诱发针对癌症或感染性疾病的免疫反应的方法，其包括向患有癌症或感染性疾病的个体投与选自由以下组成的群的两种或更多种药剂的组合：(i)白细胞复位向双特异性抗体，其包括adam17、cd2、cd3、cd4、cd5、cd6、cd8、cd11a、cd11b、cd14、cd16、cd16b、cd25、cd28、cd30、cd32a、cd40、cd40l、cd44、cd45、cd56、cd57、cd64、cd69、cd74、cd89、cd90、cd137、cd177、ceacam6、ceacam8、hla-drα链、kir及slc44a2；(ii)干扰素；(iii)查核点抑制剂抗体，其包括ctla4、pd1、pd-l1、lag3、b7-h3、b7-h4.kir及tim3；及(iv)抗体-药物结合物(adc)。然而，此参考仅组合许多已知免疫相关成分，然而其对所述等成分间的相互影响毫无提示。
技术实现要素：
本发明意外发现pd-l1的表现可通过使cd11b调节剂结合至免疫细胞及/或其他细胞上的cd11b来抑制。cd11b调节剂结合至cd11b将减少lps致敏单核细胞上的pd-l1表现。在lps诱发的免疫抑制单核细胞或来自患有败血性休克的病患的单核细胞中，当细胞受lps激发时，cd11b调节剂结合至cd11b亦减少pd-l1表现。
本发明提供用于抑制免疫细胞中pd-l1表现的方法，其包括使所述免疫细胞与结合至所述细胞上cd11b的cd11b调节剂接触，从而调节这些免疫细胞的pd-l1表现。
本发明提供用于免疫细胞中逆转免疫抑制或免疫衰竭或诱发预存免疫力的方法，其包括使所述免疫细胞与结合至所述细胞上cd11b的cd11b调节剂接触。
本发明提供用于判定对cd11b调节剂具有反应性的个体的方法，所述方法包括侦测生物样品或个体中的pd-l1是否被抑制，方式为通过使所述生物样品或所述个体中的免疫细胞与cd11b调节剂接触并侦测所述cd11b调节剂对免疫细胞上pd-l1的抑制，其中所述pd-l1抑制指示所述个体对cd11b调节剂具有反应性。
在一些实施例中，本文描述的cd11b调节剂是抑制cd11b表现的rnai剂、抗cd11b抗体或调控cd11b的小分子化合物。
在一个实施例中，所述免疫细胞是t细胞或单核细胞或颗粒细胞或巨噬细胞或骨髓衍生的抑制细胞或自然杀手细胞。在一个实施例中，所述cd11b结合增加ifn-γ、il-12或cd8t细胞。在另一实施例中，cd11b调节剂结合至细胞上的cd11b治疗及/或预防与免疫抑制相关的疾病。在另一实施例中，所述与免疫抑制或免疫衰竭相关的疾病是急性及/或慢性感染中的免疫细胞t细胞衰竭、败血症、癌症中的免疫缺陷或老化中的免疫衰老。
在一个实施例中，预防及/或治疗癌症的方法包括投与额外的活性剂或疗法。在一些实施例中，所述额外的活性剂是免疫查核点疗法、放射疗法或化学疗法。
本发明亦提供抗cd11b抗体或其抗原结合部分，其包含以下中的至少一者：由nywin(seqidno:1)或gfsltsnsis(seqidno:2)的氨基酸残基或具有与seqidno:1或2具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的重链互补决定区1(h-cdr1)；由niypsdtyinhnqkfkd(seqidno:3)或aiwsgggtdynsdlks(seqidno:4)的氨基酸残基或具有与seqidno:3或4具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的重链cdr2(h-cdr2)；及由sayanyfdy(seqidno:5)或rggypyyfdy(seqidno:6)的氨基酸残基或具有与seqidno:5或6具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的重链cdr3(h-cdr3)；且包含以下中的至少一者：由rasqnigtsih(seqidno:7)或kssqsllysenqenyla(seqidno:8)的氨基酸残基或具有与seqidno:7或8具有85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的轻链cdr1(l-cdr1)；由yasesis(seqidno:9)或wastrqs(seqidno:10)的氨基酸残基或具有与seqidno:9或10中的任一者具有85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的轻链cdr2(l-cdr2)；及由qqsdswptlt(seqidno:11)或qqyydtplt(seqidno:12)的氨基酸残基或具有与seqidno:11或12中的任一者具有85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的轻链cdr3(l-cdr3)；使得所述经分离的抗体或其抗原结合部分结合至cd11b。
在一些实施例中，本文描述的cdr包含一或更多种嵌入、取代及/或删除。
在另一实施例中，本发明提供抗cd11b抗体或其抗原结合部分，其包含(i)重链可变区，其包括包含seqidno:1的h-cdr1、包含seqidno:3的h-cdr2及包含seqidno:5的h-cdr3的重链可变区，及(ii)轻链可变区，其包括包含seqidno:7的l-cdr1、包含seqidno:9的l-cdr2及包含seqidno:11的l-cdr3；或(iii)重链可变区，其包括包含seqidno:2的h-cdr1、包含seqidno:4的h-cdr2及包含seqidno:6的h-cdr3的重链可变区，及(iv)轻链可变区，其包括包含seqidno:8的l-cdr1、包含seqidno:10的l-cdr2及包含seqidno:12的l-cdr3。在另一实施例中，h-cdr1具有由seqidno:1或2组成的氨基酸序列；h-cdr2具有由seqidno:3或4组成的氨基酸序列；h-cdr3具有由seqidno:5或6组成的氨基酸序列；l-cdr1具有由seqidno:7或8组成的氨基酸序列；l-cdr2具有由seqidno:9或10组成的氨基酸序列及l-cdr3具有由seqidno:11或12组成的氨基酸序列。
另外，本发明提供人类化抗cd11b抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)包含由seqidno:13组成的氨基酸序列的重链可变区，及(ii)包含由seqidno:23组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(c)包含由seqidno:14组成的氨基酸序列的重链可变区，及(ii)包含由seqidno:24组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(e)包含由seqidno:15组成的氨基酸序列的重链可变区，及(f)包含由seqidno:25组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(g)包含由seqidno:16组成的氨基酸序列的重链可变区，及(h)包含由seqidno:26组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(i)包含由seqidno:17组成的氨基酸序列的重链可变区，及(j)包含由seqidno:27组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(k)包含由seqidno:18组成的氨基酸序列的重链可变区，及(l)包含由seqidno:28组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(m)包含由seqidno:19组成的氨基酸序列的重链可变区，及(n)包含由seqidno:29组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(o)包含由seqidno:20组成的氨基酸序列的重链可变区，及(p)包含由seqidno:30组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(q)包含由seqidno:21组成的氨基酸序列的重链可变区，及(r)包含由seqidno:31组成的氨基酸序列的轻链可变区；或
(s)包含由seqidno:22组成的氨基酸序列的重链可变区，及(t)包含由seqidno:32组成的氨基酸序列的轻链可变区。
本发明亦提供包含抗cd11b抗体或其抗原结合部分的组合物。本发明亦提供包括向个体投与本发明的人类化抗cd11b抗体的方法。此等方法包括用于抑制免疫细胞中pd-l1表现；免疫细胞中逆转免疫抑制或免疫衰竭或诱发预存免疫力；测定个体中的pd-l1；及治疗或预防急性及/或慢性感染、败血症、癌症中的免疫缺陷或老化中的免疫衰老的方法。本发明的抗cd11b抗体可用于上文提及之方法中。
图式简单说明
图1显示cd11b与抗cd11b抗体的结合改变pd-l1的表面表现。人类单核细胞经lps(100ng/ml)在同型对照igg或抗cd11b抗体(icrf44)的存在下刺激18hr。获得这些细胞并使用流动式细胞测量术分析hla-dr、pd-l1、cd80及cd86分子。表面分子表现呈现为mfi。值呈现为来自3组独立实验的平均值±sem。
图2a及b分别显示结合cd11b对细胞黏附血纤维蛋白原及减少pd-l1表现的效应。图2a显示ml-c19-a对k562/cd11b细胞黏附血纤维蛋白原的效应。25000个k562/cd11b细胞在10μmml-c19-a或dmso的存在下在37℃下黏附于涂覆血纤维蛋白原(20μg/ml)的孔的底部，保持20min。结果通过基于荧光素酶的celltiter-glo(promegaco.)定量。各条柱表示来自代表性实验的一式三份测定的平均值±sem。图2b显示以cd11b拮抗剂结合cd11b会减少单核细胞上的pd-l1表现。人类单核细胞经lps(100ng/ml)在dmso对照或10μm的ml-c19-a的存在下刺激18hr。获得这些细胞并使用流动式细胞测量术分析pd-l1分子。表面分子表现呈现为mfi。值呈现为来自10组独立实验的平均值±sem。
图3显示抗cd11b抗体单一疗法对b16f10肿瘤的生长的效应。对c57bl/6小鼠在第0天皮下注射2x105个b16f10细胞。在第7天，对小鼠(n＝5只/组)腹腔内(ip)注射对照igg(5mg/kg)或大鼠抗小鼠cd11b抗体。每三至四天重复注射。在第18天，处死小鼠。量测肿瘤体积且结果呈现为平均值±sem。
图4显示抗cd11b抗体治疗后的肿瘤浸润性白细胞中的mdsc及cd8t细胞群体。对c57bl/6小鼠在第0天皮下注射2x105个b16f10细胞。在第7天，对小鼠(n＝5只/组)腹腔内注射对照igg(5mg/kg)或大鼠抗小鼠cd11b抗体。每三至四天重复注射。在第18天，处死小鼠。用胶原蛋白酶消化肿瘤及通过流动式细胞测量术分析肿瘤浸润性白细胞。
图5显示抗cd11b治疗后的血液中的wbc及iaie+/cd8t细胞上的pd-l1表现。在第0天，经由尾静脉向各小鼠内注射2x105个b16f10细胞。在第1天，对小鼠(n＝3只/组)腹腔内注射对照igg(5mg/kg)或抗小鼠cd11b抗体(5mg/kg)。每三至四天重复注射。在第15天，处死小鼠。获得wbc细胞并使用流动式细胞测量术分析pd-l1分子及iaie+/cd8t细胞。
图6显示带肿瘤的小鼠中的ifn-γ、il-12及tnf-α的产生通过使用抗cd11b抗体的治疗逆转。在第0天经由尾静脉向各小鼠内注射2x105个b16f10细胞。在第1天，对小鼠(n＝3只/组)腹腔内注射对照igg(5mg/kg)或大鼠抗小鼠cd11b抗体(5mg/kg)。每三至四天重复注射。在第9天，处死小鼠。血浆细胞介素通过bdcba小鼠炎症套组定量。
图7显示抗cd11b抗体单一疗法对llc1肿瘤的生长的效应。对c57bl/6小鼠在第0天皮下注射1x106个llc1细胞。在第7天，对小鼠(n＝5只/组)腹腔内注射对照igg(5mg/kg)或大鼠抗小鼠cd11b抗体。每三至四天重复注射。量测肿瘤体积且结果呈现为平均值±sem。
图8显示抗cd11b抗体单一疗法在llc1肿瘤模型中对存活率的效应。对c57bl/6小鼠在第0天皮下注射1x106个llc1细胞。在第7天，对小鼠(n＝5只/组)腹腔内注射对照igg(5mg/kg)或大鼠抗小鼠cd11b抗体。每三至四天重复注射。针对抗cd11b抗体对各组中经治疗的小鼠的长期存活率的效应来分析小鼠。
图9显示抗cd11b抗体及抗pd1组合疗法对llc1肺转移模型的效应。在第0天经由尾静脉向各小鼠内注射1x106个llc1细胞。在第1天，对小鼠(n＝3只/组)腹腔内注射对照igg(10mg/kg)、抗小鼠cd11b抗体(10mg/kg)、抗pd1抗体(10mg/kg)或抗cd11b(10mg/kg)+抗pd1(10mg/kg)。每三至四天重复注射。在第15天，处死小鼠且接种的肿瘤数量计数为在显微镜下存在于肺中的结节的总数量。
图10显示在肺转移模型中抗cd11b抗体及抗pd1组合疗法对存活率的影响。在第0天经由尾静脉向各小鼠内注射1x106个llc1细胞。在第1天，对小鼠(n＝4-5只/组)腹腔内注射对照igg(10mg/kg)、抗小鼠cd11b抗体(10mg/kg)、抗pd1抗体(10mg/kg)或抗cd11b(10mg/kg)+抗pd1(10mg/kg)。每三至四天重复注射。针对组合疗法对各组中经治疗的小鼠的长期存活率的效应来分析小鼠。
图11显示抗cd11b抗体及紫杉醇组合疗法对b16f10肿瘤的生长的效应。对c57bl/6小鼠在第0天皮下注射2x105个b16f10细胞。在第7天，对小鼠(n＝5只/组)腹腔内注射对照igg(5mg/kg)、抗小鼠cd11b抗体(5mg/kg)、紫杉醇(10mg/kg)+对照igg(5mg/kg)或紫杉醇(10mg/kg)+抗cd11b抗体(5mg/kg)。每三至四天重复注射。量测肿瘤体积且结果呈现为平均值±sem。
图12显示在b16f10模型中抗cd11b抗体及紫杉醇组合疗法对存活率的效应。对c57bl/6小鼠在第0天皮下注射2x105个b16f10细胞。在第7天，对小鼠(n＝5只/组)腹腔内注射对照igg(5mg/kg)、抗小鼠cd11b抗体(5mg/kg)、紫杉醇(10mg/kg)+对照igg(5mg/kg)或紫杉醇(10mg/kg)+抗cd11b(5mg/kg)。每三至四天重复注射。针对组合疗法对各组中经治疗的小鼠的长期存活率的效应来分析小鼠。
图13显示以抗cd11b抗体结合cd11b会减少经1μg/mllps激发的lps诱发的免疫抑制单核细胞中的pd-l1表现。(a)人类单核细胞是分离自健康志愿者且经100ng/mllps预处理2天以诱发免疫抑制。(b)lps诱发的免疫抑制单核细胞在10μg/mligg1或抗cd11b抗体(icrf44)的存在下经1μg/mllps激发18hr。清洗经处理的细胞并通过流动式细胞测量术分析。表面pd-l1表现呈现为mfi。
图14显示当经1μg/mllps激发时，以抗cd11b抗体结合cd11b减少来自患有败血性休克的病患的人类单核细胞中的pd-l1表现。人类单核细胞是分离自患有败血性休克的病患且在10μg/mligg1或抗cd11b抗体的存在下经1μg/mllps激发18hr。清洗经处理的细胞并通过流动式细胞测量术分析。表面pd-l1表现呈现为mfi。
图15显示人类化cd11b抗体的轻链可变区的氨基酸序列。cdr以加下划线的字母显示。
图16显示人类化cd11b抗体的重链可变区的氨基酸序列。cdr以加下划线的字母显示。
图17显示人类化抗cd11b抗体的结合活性。将k562细胞或经人类cd11b转染的细胞(k562/cd11b)用10μg/ml人类化抗cd11b抗体培养30min。经结合的ab通过结合fitc的小鼠抗人类igg侦测。这些细胞通过流动式细胞测量术分析。虚线表示结合k562细胞的抗体。实线表示结合至k562/cd11b细胞的抗体。
图18显示以抗cd11b抗体结合cd11b减少lps致敏人类单核细胞中的pd-l1表现。致敏单核细胞在同型对照igg、抗cd11b抗体(icrf44)或人类化抗cd11b抗体的存在下培养18hr。收获这些细胞并使用流动式细胞测量术分析单核细胞上的pd-l1表现。
具体实施方式
在描述本发明的组合物、方法及分离方法论前，应了解此发明不受其等的限制，因为此等组合物、方法及条件可变化。亦应了解本文使用的术语仅出于描述特定的实施例的目的，且无意具有限制性。
本发明意外发现pd-l1的表现可通过使调节剂结合至免疫细胞及/或其他细胞上的cd11b来抑制，从而治疗及/或预防与免疫抑制相关的疾病，诸如慢性感染、败血症、癌症中的免疫缺陷及老化中的免疫衰老。
定义
除非另有定义，否则本文使用的所有技术及科学术语具有本发明所属领域中的一般技术者通常所了解的相同含义。与彼等文本描述者类似或等效的任何方法及材料可用于本发明的实务或测试中，因为将了解修饰及变化包含于本发明的精神及范围内。
除非另有说明，否则“一”或“一个”意谓一或多个。
如本文使用，如下缩写氨基酸残基：丙胺酸(ala；a)、天冬酰胺酸(asn；n)、天冬胺酸(asp；d)、精胺酸(arg；r)、半胱胺酸(cys；c)、麸胺酸(glu；e)、麸酰胺酸(gln；q)、甘胺酸(gly；g)、组胺酸(his；h)、异白胺酸(ile；i)、白胺酸(leu；l)、离胺酸(lys；k)、甲硫胺酸(met；m)、苯丙胺酸(phe；f)、脯胺酸(pro；p)、丝胺酸(ser；s)、苏胺酸(thr；t)、色胺酸(trp；w)、酪胺酸(tyr；y)及缬胺酸(val；v)。
如本文使用，术语“cd11b”是指整合素αm(itgam)，其是异二聚整合素αmβ2的次单元。整合素αmβ2的第二次单元是常见整合素β2次单元(称为cd18)。整合素αmβ2亦称为巨噬细胞-1抗原(mac-1)或互补受体3(cr3)，其是表现于白细胞的表面上，这些白细胞包括单核细胞、颗粒细胞、巨噬细胞及自然杀手细胞。
如本文使用，术语“pd-l1”是指程序化死亡配体1(pd-l1)，其是分化簇274(cd274)或b7同源物1(b7-h1)。pd-l1是40kda1型跨膜蛋白，其在特定事件(诸如怀孕、自体免疫疾病、癌症、败血症及其他感染性疾病(诸如结核分枝杆菌(mycobacteriumtuberculosis)、巨细胞病毒(cytomegalovirus)及肝炎))期间对抑制免疫系统起主要作用。
如本文使用，术语“单核细胞”，亦称为单核白细胞，其属于涉及一线防御机制的白血球的一种类型且公认可分化为树突状细胞或巨噬细胞前驱物。单核细胞通常在血液系统中移动。响应于外部刺激讯息时，单核细胞分泌许多免疫调节细胞介素，移动至组织中的感染部位并分化为巨噬细胞。
如本文使用，术语“调控”包括相较于对照组通常处于统计学显着量或生理学显着量的“增加”或“刺激”及“降低”或“减少”。
如本文使用，术语“个体”意谓针对治疗或疗法所选择的人类或非人类动物。
如本文使用，“一致性”是指两个或更多个多肽或蛋白质序列间的关系(如通过比较这些序列判定)。在此项技术中，“一致性”亦是指多肽或蛋白质间的序列相关程度(如通过此等序列串之间的匹配判定)。“一致性”通过已知的生物信息方法可容易地计算。两个聚核苷酸或两个多肽序列的“一致性百分率”是通过使用gap计算机程序(gcgwisconsinpackage的一部分，10.3版(accelrys,sandiego,calif.))使用其预设参数比较这些序列而测定。
如本文使用，术语“肽”、“多肽”及“蛋白质”各是指包含通过肽键彼此相连的两个或更多个氨基酸残基的分子。此等术语包含(例如)天然及人造蛋白质、蛋白质序列的蛋白质片段及多肽类似物(诸如突变体、变体及融合蛋白)及转译后(或以其他方式共价或非共价)修饰的蛋白质。肽、多肽或蛋白质可为单体或聚合的。
如本文使用，术语“亲和力”是指在分子(例如，抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总强度。除非另有指示，否则如本文使用，“结合亲和力”是指反映结合对(例如，抗体与抗原)的成员间的1:1相互作用的固有结合亲和力。分子x对其配偶体y的亲和力可通常通过解离常数(kd)表示。亲和力可通过此项技术中已知的常用方法量测，这些方法包括彼等本文描述者。下文描述用于量测结合亲和力的特定阐述性及例示性实施例。
如本文使用，术语“抗体”是以最广义使用且特定涵盖单株抗体(包括全长单株抗体)、多株抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、单价抗体、多价抗体及抗体片段，只要其等显示所需的生物活性即可(例如，fab及/或单臂抗体)。
如本文使用，术语“抗体片段”是指除完整抗体外的分子，其包含完整抗体的一部分，其结合所述完整抗体所结合的抗原。抗体片段的实例包括(但不限于)fv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2；双功能抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如，scfv)；及自抗体片段形成的多特异性抗体。
如本文使用，术语抗体的“抗原结合片段”是指抗体的保留特异性结合至抗原的能力的一或多个部分。已显示抗体的抗原结合功能可通过全长抗体的片段进行。包含于术语抗体的“抗原结合片段”内的结合片段的实例包括(i)fab片段，由vl、vh、cl及ch1域组成的单价片段；(ii)f(ab')2片段，包含通过二硫键在铰链区连接的两个fab片段的二价片段；(iii)由vh及ch1域组成的fd片段；(iv)由抗体的单臂的vl及vh域组成的fv片段；(v)由vh域组成的dab片段；及(vi)经分离的互补决定区(cdr)。此等抗体片段是使用习知程序获得，诸如蛋白水解片段化程序，如描述于j.goding，antibodies:principlesandpractice，第98至118页(n.y.academicpress1983)中。这些片段以与完整抗体相同的方式针对效用进行筛选。
如本文使用，术语“互补决定区”(cdr)是指抗体内的其中此等蛋白质互补抗原的形状的区域。本文使用首字母缩略词cdr意谓“互补决定区”。
抗体的“可变区”是指抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区(单独或组合)。重链及轻链的可变区各由四个通过三个cdr(亦称为高度可变区)连接的框架区(fr)组成。各链中的cdr是与有助于形成抗体的抗原结合部位的来自其他链的cdr通过fr靠近地固定在一起。可用以识别cdr的边界的例示性公约包括(例如)kabat定义及chothia定义。所述kabat定义是基于序列变异性(参见kabat等人，1992,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版，publichealthservice,nih,washingtond.c.)，所述chothia定义是基于结构环区的位置(chothia等人，1989,nature342:877-883)。cdr识别的其他方法包括“imgt定义”(lefranc,m.-p.等人，1999,nucleicacidsres.27:209-212)及“abm定义”，其是kabat与chothia间的折中且是使用oxfordmolecular'sabm抗体建模软件衍生，或cdr的“接触定义”基于所观察到的抗原接触，阐述于maccallum等人，1996,j.mol.biol.262:732-745中。如本文使用，cdr可是指通过kabat编号系统定义的cdr。
如本文使用，术语“人类化抗体”或“人类化抗体片段”是一种特定类型的嵌合抗体，其包括免疫球蛋白氨基酸序列变体或其片段，其可结合至预定抗原，且其包含一或多个大体上具有人类免疫球蛋白的氨基酸序列的框架(fr)及一或多个大体上具有非人类免疫球蛋白的氨基酸序列的互补决定区(cdr)。通常称为“输入”序列的此非人类氨基酸序列通常取自“输入”抗体域，特别是可变域。一般而言，人类化抗体包括非人类抗体的至少所述cdrs或高度可变区(hvls)嵌入人类重链或轻链可变域的frs间。
如本文使用，“人类抗体”是具有氨基酸序列对应于人类或人类细胞产生或利用人类抗体库或其他人类抗体编码序列自非人类来源衍生的抗体的氨基酸序列的抗体。人类抗体的此定义特定排除包含非人类抗原结合残基的人类化抗体。
如本文使用，术语“嵌合抗体”是指含有来自一种抗体的一或多个区域及来自一或多种其他抗体的一或多个区域的抗体。
如本文使用，术语“重链”包括全长重链及其具有足够可变区序列以赋予对抗原决定基的特异性的片段。全长重链包括可变区域(vh)及三个恒定区域(ch1、ch2及ch3)。所述vh域是位于所述多肽的胺基端，及所述ch3域是位于羧基端。
如本文使用，术语“轻链”包括全长轻链及其具有足够可变区序列以赋予对抗原决定基的特异性的片段。全长轻链包括可变区域(vl)及恒定区域(cl)。类似于重链，轻链的可变区域是位于多肽的胺基端。
如本文使用，术语“医药上可接受的载剂”是指医药调配物中的除活性成分外的对个体无毒性的成分。医药上可接受的载剂包括(但不限于)缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
如本文使用，术语“个体”是指脊椎动物，较佳是哺乳动物，更佳是人类。哺乳动物包括(但不限于)人类、农场动物、竞技类动物及宠物。
如本文使用，术语“有效量”是指足以产生有利或所需的临床结果的量。有效量可以一或更多次投与进行投与。出于此发明的目的，有效量是足以诊断、减轻、缓解、稳定、逆转、减缓或延迟疾病状态的发展的量。
如本文使用，术语“治疗(treatment、treating、treat及类似用语)”通常是指获得所需的药理及/或生理效应。所述效应就完全或部分预防疾病或其症状而言可为预防性的及/或就部分或完全稳定或治愈疾病及/或归因于所述疾病的不利影响而言是治疗性的。如本文使用的“治疗”涵盖哺乳动物(特定言之，人类)的疾病的任何治疗，且包括：(a)预防可能易患所述疾病或症状但未诊断为已患有其的个体中出现所述疾病或病症；(b)抑制所述疾病症状，即，阻止其发展；或(c)缓解所述疾病症状，即，引起所述疾病或症状的消退。
如本文使用的术语“预防”是指阻止病患或个体中出现疾病状态或病症的预防性(preventative)或预防性(prophylactic)措施。预防亦可包括减少病患或个体中出现疾病状态或病症的可能性及阻碍或阻止所述疾病状态或病症的发作。
在提供值范围的情况下，应了解介于所述范围的上限值及下限值之间的各介入值(至下限值的单位的十分之一，除非内文明确规定)及所述规定范围中的任何其他规定值或介入值包含于本发明内。此等较小范围的上限值及下限值可独立地包括于这些较小范围中，且亦包含于本发明内，受制于所述规定范围中的任何经特定排除的临限值。在规定范围包括这些临限值中的一者或两者的情况下，排除彼等经包括的临限值中的一者或者两者外的范围亦包括于本发明中。
影响pd-l1表现的cd-11b调节剂的结合
本发明意外发现通过使用与表现于免疫细胞的表面上的cd11b分子反应的cd11b调节剂的治疗逆转与败血症、慢性感染及癌症中涉及的免疫抑制状态相关的症状。
在一个态样中，本发明提供用于抑制免疫细胞中pd-l1表现的方法，其包括使所述免疫细胞与结合所述细胞上cd11b的cd11b调节剂接触，从而抑制所述免疫细胞的pd-l1表现。或者，本发明提供cd11b调节剂在制造用于抑制免疫细胞中pd-l1表现的制剂中的用途。本发明亦提供用于抑制免疫细胞中pd-l1表现的cd11b调节剂。
在另一态样中，本发明提供用于免疫细胞中逆转免疫抑制或免疫衰竭或诱发预存免疫力的方法，其包括使这些免疫细胞与结合这些细胞上cd11b的cd11b调节剂接触。或者，本发明提供cd11b调节剂在制造用于免疫细胞中逆转免疫抑制或免疫衰竭或诱发预存免疫力的制剂中的用途。本发明亦提供用于免疫细胞中逆转免疫抑制或免疫衰竭或诱发预存免疫力的cd11b调节剂。
在另一态样中，本发明提供用于判定对cd11b调节剂具有反应性的个体的方法，所述方法包括侦测生物样品或个体中的pd-l1是否被抑制，方式为通过使所述生物样品或所述个体中的免疫细胞与cd11b调节剂接触并侦测所述cd11b调节剂对免疫细胞上pd-l1的抑制，其中所述pd-l1抑制指示所述个体对所述cd11b调节剂具有反应性。
在一个实施例中，本文描述的cd11b调节剂是抑制cd11b表现的rnai剂、抗cd11b抗体或调控cd11b的小分子化合物。
在一些实施例中，抑制cd11b表现的rnai剂是抑制cd11b表现的微小rna(mirna)或短小干扰rna(sirna)。在一些实施例中，所述抗cd11b抗体是单株、嵌合、人类化、人类或双特异性抗cd11b抗体。
在一些实施例中，调控cd11b的小分子化合物的实例包括(但不限于)描述于us8,268,816、us20120035154、wo002007039616、wo002006111371、wo002007054128、wo00199901258、jimmunol2010,184，第3917至26页及cancerdiscov,2012,2，第1091至99页中的化合物。较佳地，所述化合物是选自由下列各物组成的群：
在一个实施例中，所述免疫细胞是单核细胞、颗粒细胞、巨噬细胞、骨髓衍生的抑制细胞或自然杀手细胞或t细胞。
在一个实施例中，cd11b结合增加ifn-γ、il-12或cd8t细胞。在另一实施例中，cd11b调节剂结合至细胞上的cd11b治疗及/或预防与免疫抑制相关的疾病。
在另一实施例中，与免疫抑制或免疫衰竭相关的疾病是急性及/或慢性感染中的t细胞衰竭、败血症、癌症中的免疫缺陷或老化中的免疫衰老。因此，本发明提供用于治疗或预防个体的急性及/或慢性感染、败血症、癌症中的免疫缺陷或老化中的免疫衰老的方法，其包括向个体投与有效量的cd11b调节剂。
在一个实施例中，本文描述的癌症是对免疫疗法具有反应性的癌症。对免疫疗法具有反应性的癌症的实例包括(但不限于)黑色素瘤、肺癌、肺鳞状细胞癌、头颈癌、乳癌、卵巢癌、子宫癌、前列腺癌、胃癌、子宫颈癌、食道癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、肝癌、结肠癌、骨癌、胰脏癌、皮肤癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、阴门癌、霍奇金氏病(hodgkin’sdisease)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-hodgkin’slymphoma)、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病(包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病、慢性淋巴球性白血病)、儿童的实体肿瘤、淋巴球性淋巴瘤、肾盂癌、中枢神经系统(cns)的赘瘤、原发性cns淋巴瘤、肿瘤血管生成、髓轴肿瘤、脑干神经胶瘤、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤(kaposi’ssarcoma)、表皮样癌、鳞状细胞癌及t细胞淋巴瘤。
在一个实施例中，所述癌症是转移癌、难治性癌症(refractorycancer)、复发性癌症(relapsedcancer)或晚期癌症(advancedcancer)。
在一个实施例中，预防及/或治疗癌症的方法包括投与额外的活性剂或疗法。在一些实施例中，所述额外的活性剂是免疫查核点疗法、放射疗法或化学疗法。
在一个实施例中，所述cd11b调节剂及所述免疫查核点疗法、放射疗法或化学疗法是同时、循序或分别投与。在另一实施例中，所述免疫查核点疗法包括投与免疫查核点蛋白。较佳地，所述免疫查核点蛋白是抗pd-1配体或抗ctla-4抗体或抗pd-l1抗体，或其抗原结合片段或其任何组合。抗pd-1配体的实例包括(但不限于)抗pd-1抗体(诸如纳武单抗(nivolumab)及派姆单抗(pembrolizumab))及抗ctla-4抗体(诸如易普利姆玛单抗(ipilimumab))。
在另一实施例中，所述化学疗法包括投与化学治疗剂。所述化学治疗剂的实例包括(但不限于)烷化剂、抗代谢物、抗微管剂、拓朴异构酶抑制剂或细胞毒性抗生素。较佳地，所述化学治疗剂是顺铂、5-fu、紫杉醇、多西他赛(docetaxel)、长春瑞滨(vinorelbine)、长春地辛(vindesine)、长春氟宁(vinflunine)、吉西他滨(gemcitabine)、胺甲喋呤(methotrexate)、吉非替尼(gefitinib)、拉帕替尼(lapatinib)或埃罗替尼(erlotinib)。
本文描述的cd11b调节剂及其他药剂可调配成调配物或组合物。本发明的调配物或医药组合物可以许多方法投与，其取决于需要局部治疗抑或全身治疗且取决于待治疗的区域。投与可为经口或非经肠。
在某些实施例中，如本文描述的化合物及组合物是非经肠投与。非经肠投与包括静脉内、动脉内、皮下、腹腔内或肌内注射或输注。
在某些实施例中，用于非经肠投与的调配物或组合物可包括无菌水溶液，其等亦可含有缓冲剂、稀释剂及其他合适的添加剂诸如(但不限于)渗透增强剂、载剂化合物及其他医药上可接受的载剂或赋形剂。
在某些实施例中，用于经口投与的调配物或组合物可包括(但不限于)医药载剂、赋形剂、粉剂或颗粒、微粒、纳米颗粒、溶于水或非水性介质中的悬浮液或溶液、胶囊、凝胶胶囊、药囊、锭剂或迷你型锭剂。可能需要增稠剂、调味剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或黏合剂。
给药是取决于待治疗的疾病状态的严重性及反应性，且疗程持续数天至数月，或直至实现治愈或达成疾病状态的减少。给药亦取决于药物效力及代谢。
免疫细胞中的pd-l1表现的水平可充当用于逆转免疫抑制及免疫衰竭及诱发预存免疫力的新颖治疗目标。
本发明的抗cd11b抗体
本文提供新颖抗cd11b抗体及其等于治疗及/或预防与免疫抑制及免疫衰竭相关的疾病(诸如癌症免疫疗法、慢性感染中的t细胞衰竭、败血症、癌症中的免疫缺陷及老化中的免疫衰老)中的使用方法。
在一个态样中，本发明提供抗cd11b抗体或其抗原结合部分，其包含以下中的至少一者：由nywin(seqidno:1)或gfsltsnsis(seqidno:2)的氨基酸残基或具有与seqidno:1或2具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的重链互补决定区1(h-cdr1)；由niypsdtyinhnqkfkd(seqidno:3)或aiwsgggtdynsdlks(seqidno:4)的氨基酸残基或具有与seqidno:3或4具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的重链cdr2(h-cdr2)；及由sayanyfdy(seqidno:5)或rggypyyfdy(seqidno:6)的氨基酸残基或具有与seqidno:5或6具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的重链cdr3(h-cdr3)；且包含以下中的至少一者：由rasqnigtsih(seqidno:7)或kssqsllysenqenyla(seqidno:8)的氨基酸残基或具有与seqidno:7或8具有85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的轻链cdr1(l-cdr1)；由yasesis(seqidno:9)或wastrqs(seqidno:10)的氨基酸残基或具有与seqidno:9或10中的任一者具有85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的轻链cdr2(l-cdr2)；及由qqsdswptlt(seqidno:11)或qqyydtplt(seqidno:12)的这些氨基酸残基或具有与seqidno:11或12中的任一者具有85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的变体组成的轻链cdr3(l-cdr3)；使得所述经分离的抗体或其抗原结合部分结合至cd11b。
在一些实施例中，本文描述的cdr包含一或更多种嵌入、取代及/或删除。
在另一实施例中，本发明提供抗cd11b抗体或其抗原结合部分，其包含(i)重链可变区，其包括包含seqidno:1的h-cdr1、包含seqidno:3的h-cdr2及包含seqidno:5的h-cdr3的重链可变区，及(ii)轻链可变区，其包括包含seqidno:7的l-cdr1、包含seqidno:9的l-cdr2及包含seqidno:11的l-cdr3；或(iii)重链可变区，其包括包含seqidno:2的h-cdr1、包含seqidno:4的h-cdr2及包含seqidno:6的h-cdr3的重链可变区，及(iv)轻链可变区，其包括包含seqidno:8的l-cdr1、包含seqidno:10的l-cdr2及包含seqidno:12的l-cdr3。在另一实施例中，h-cdr1具有由seqidno:1或2组成的氨基酸序列；h-cdr2具有由seqidno:3或4组成的氨基酸序列；h-cdr3具有由seqidno:5或6组成的氨基酸序列；l-cdr1具有由seqidno:7或8组成的氨基酸序列；l-cdr2具有由seqidno:9或10组成的氨基酸序列及l-cdr3具有由seqidno:11或12组成的氨基酸序列。
在一个态样中，本发明提供重链可变区或其抗原结合部分，其包含具有由seqidno:1或2组成的氨基酸序列的h-cdr1、具有由seqidno:3或4组成的氨基酸序列的h-cdr2及具有由seqidno:5或6组成的氨基酸序列的h-cdr3的重链可变区。
在一个态样中，本发明提供轻链可变区或其抗原结合部分，其包含具有由seqidno:7或8组成的氨基酸序列的l-cdr1，具有由seqidno:9或10组成的氨基酸序列的l-cdr2，及具有由seqidno:11或12组成的氨基酸序列的l-cdr3。
在一个实施例中，本发明提供人类化抗cd11b抗体或其抗原结合部分，其包含(i)包含与seqidno:13至22的氨基酸序列中的任一者具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的重链可变区，及(ii)包含与seqidno:23至32的氨基酸序列中的任一者具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的氨基酸序列的轻链可变区。
在另一实施例中，本发明提供人类化抗cd11b抗体或其抗原结合部分，其包括包含由seqidno:13至22组成的氨基酸序列的重链可变区，及包含由seqidno:23至32组成的氨基酸序列的轻链可变区。
较佳地，本发明提供人类化抗cd11b抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)包含由seqidno:13组成的氨基酸序列的重链可变区，及包含由seqidno:23组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(b)包含由seqidno:14组成的氨基酸序列的重链可变区，及包含由seqidno:24组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(c)包含由seqidno:15组成的氨基酸序列的重链可变区，及包含由seqidno:25组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(d)包含由seqidno:16组成的氨基酸序列的重链可变区，及包含由seqidno:26组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(e)包含由seqidno:17组成的氨基酸序列的重链可变区，及包含由seqidno:27组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(f)包含由seqidno:18组成的氨基酸序列的重链可变区，及包含由seqidno:28组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(g)包含由seqidno:19组成的氨基酸序列的重链可变区，及包含由seqidno:29组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(h)包含由seqidno:20组成的氨基酸序列的重链可变区，及包含由seqidno:30组成的氨基酸序列的轻链可变区；
(i)包含由seqidno:21组成的氨基酸序列的重链可变区，及包含由seqidno:31组成的氨基酸序列的轻链可变区；或
(j)包含由seqidno:22组成的氨基酸序列的重链可变区，及包含由seqidno:32组成的氨基酸序列的轻链可变区。
seqidno:13至32的氨基酸序列如下所列：
本发明的人类化抗cd11b抗体的重链可变区：(seqidno:13至22)
vh1
qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftnywinwvrqapgqglewmgniypsdtyinhnqkfkdrvtmtrdtststvymelsslrsedtavyycarsayanyfdywgqgtlvtvss(seqidno:13)
vh2
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfsnywinwvrqapgqglewmgniypsdtyinhnqkfkdrvtitadkststaymelsslrsedtavyycatsayanyfdywgqgtlvtvss(seqidno:14)
vh3
qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftnywinwvrqatgqglewmgniypsdtyinhnqkfkdrvtmtrntsistaymelsslrsedtavyycarsayanyfdywgqgtlvtvss(seqidno:15)
vh4
qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftnywinwvrqapgqrlewmgniypsdtyinhnqkfkdrvtitrdtsastaymelsslrsedtavyycarsayanyfdywgqgtlvtvss(seqidno:16)
vh5
qvqlvqsgaevkkpgatvkisckvsgytftnywinwvqqapgkglewmgniypsdtyinhnqkfkdrvtitadtstdtaymelsslrsedtavyycarsayanyfdywgqgtlvtvsr(seqidno:17)
hc1
qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsgfsltsnsiswirqppgkglewigaiwsgggtdynsdlksrvtisvdtsknqfslklssvtaadtavyycarggypyyfdywgqgtlvtvss(seqidno:18)
hc2
qvqlqesgpglvkpsgtlsltcavygfsltsnsiswirqppgkglewigaiwsgggtdynsdlksrvtisvdtsknqfslklssvtaadtavyycarggypyyfdywgqgtmvtvss(seqidno:19)
hc3
qvqlqqwgagllkpsetlsltcavygfsltsnsiswirqppgkglewigaiwsgggtdynsdlksrvtisvdtsknqfslklssvtaadtavyycarggypyyfdywgqgtlvtvss(seqidno:20)
hc4
evqlvesggglvqpggslrlscaasgfsltsnsiswvrqapgkglewvsaiwsgggtdynsdlksrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarggypyyfdywgqgtlvtvss(seqidno:21)
hc5
evqlvetgggliqpggslrlscaasgfsltsnsiswvrqapgkglewvsaiwsgggtdynsdlksrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarggypyyfdywgqgtlvtvss(seqidno:22)
本发明的人类化抗cd11b抗体的轻链可变区：(seqidno:23至32)
vl1
eivltqspdfqsvtpkekvtitcrasqnigtsihwyqqkpdqspkllikyasesisgvpsrfsgsgsgtdftltinsleaedaatyycqqsdswptltfgqgtkveik(seqidno:23)
vl2
eivmtqspatlsvspgeratlscrasqnigtsihwyqqkpgqaprlliyyasesisgiparfsgsgsgteftltisslqsedfavyycqqsdswptltfgqgtkleik(seqidno:24)
vl3
diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqnigtsihwyqqkpgkapklliyyasesisgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqsdswptltfgggtkveik(seqidno:25)
vl4
eivltqspatlslspgeratlscrasqnigtsihwyqqkpgqaprlliyyasesisgiparfsgsgsgtdftltisslepedfavyycqqsdswptltfgggtkveik(seqidno:26)
vl5
eivltqspgtlslspgeratlscrasqnigtsihwyqqkpgqaprlliyyasesisgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqsdswptltfgqgtkleik(seqidno:27)
lc1
divmtqspdslavslgeratinckssqsllysenqenylawyqqkpgqppklliywastrqsgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqyydtpltfgqgtkveik(seqidno:28)
lc2
divmtqsplslpvtpgepasisckssqsllysenqenylawylqkpgqspqlliywastrqsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycqqyydtpltfgggtkveik(seqidno:29)
lc3
divmtqsplslsvtpgqpasisckssqsllysenqenylawylqkpgqspqlliywastrqsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycqqyydtpltfgqgtkveik(seqidno:30)
lc4
dvvmtqsplslpvtlgqpasisckssqsllysenqenylawfqqrpgqsprrliywastrqsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycqqyydtpltfgqgtkleik(seqidno:31)
lc5
divmtqtplsspvtlgqpasisckssqsllysenqenylawlqqrpgqpprlliywastrqsgvpdrfsgsgagtdftlkisrveaedvgvyycqqyydtpltfgqgtkleik(seqidno:32)
此项技术中熟知用于制备实际上针对任何靶抗原的单株抗体的技术。参见，例如，kohler及milstein，nature256:495(1975)，及coligan等人(编)，currentprotocolsinimmunology，第1卷，第2.5.1至2.6.7页(johnwiley&sons1991)。单株抗体可通过以下步骤来获得：向小鼠或鸡注射包含抗原的组合物，移除脾以获得b淋巴细胞，融合b淋巴细胞与骨髓瘤细胞以产生融合瘤，选殖这些融合瘤，筛选针对所述抗原产生抗体的阳性纯系，培养这些针对所述抗原产生抗体的纯系，及自这些融合瘤培养物中分离这些抗体。
各种技术(诸如嵌合或人类化抗体的产生)可涉及抗体选殖及构筑的程序。用于受关注的抗体的抗原结合可变轻链及可变重链序列可通过各种分子选殖程序获得。嵌合抗体是其中人类抗体的可变区已经被(例如)小鼠抗体的可变区(包括小鼠抗体的互补决定区(cdr))置换的重组蛋白。嵌合抗体当向个体投与时显示减小的免疫原性及增加的稳定性。此项技术中熟知用于构筑嵌合抗体的方法。嵌合多株抗体可通过将来自小鼠免疫球蛋白的重及轻可变链的小鼠cdr转移至人类抗体的相应可变域内来人类化。所述嵌合多株抗体中的小鼠框架区(fr)亦经人类fr序列置换。
例如，编码特异性结合cd11b的人类化抗体的vl及/或vh的核酸可通过活体外方法(诸如聚合酶链反应(pcr)、连接酶链反应(lcr)、基于转录的扩增系统(tas)等)加以选殖或扩增。例如，编码所述蛋白质的聚核苷酸可通过cdna的聚合酶链反应使用基于所述分子的dna序列的引物来分离。熟习此项技术者熟知各种选殖及活体外扩增方法论。聚核苷酸亦可通过用选自所需的聚核苷酸的序列的探针在严苛的杂合条件下筛选基因体或cdna库而分离。
这些聚核苷酸包括重组dna，其并入载体内；并入自主复制质粒或病毒内或并入原核生物或真核生物的基因体dna内，或其作为独立于其他序列的个别分子(例如，cdna)存在。本发明的核苷酸可为核醣核苷酸、脱氧核醣核苷酸或任何一种核苷酸的经修饰的形式。所述术语包括dna的单股及双股形式。
编码特异性结合cd11b的人类化抗体的vl及/或vh的dna序列可通过dna转移至合适的宿主细胞内而在活体外表现。所述细胞可为原核细胞或真核细胞。所述术语亦包括目标宿主细胞的任何子代。应了解所有子代可能不同于亲代细胞，因为在复制期间可能发生突变。此项技术中已知稳定转移的方法，其意谓外源dna连续保持于宿主中。
编码特异性结合cd11b的人类化抗体的vl及/或vh的聚核苷酸序列可操作地连接至表现控制序列。可操作地连接至编码序列的表现控制序列是经接合使得所述编码序列的表现在与这些表现控制序列兼容的条件下达成。这些表现控制序列包括(但不限于)适当的启动子、强化子、转录终止子、在编码蛋白质的基因前的起始密码子(例如atg)、用于内含子的剪接讯息(维持所述基因的正确阅读框架以允许mrna的适当转译)，及终止密码子。
编码特异性结合cd11b的人类化抗体的vl及/或vh的聚核苷酸序列可嵌入表现载体内。所述表现载体的实例包括(但不限于)质粒、病毒，或其他可经操作以容许序列的嵌入或并入且可表现于原核生物或真核生物中的媒介体。宿主可包括微生物、酵母、昆虫及哺乳类生物。此项技术中熟知于原核生物中表现具有真核或病毒序列的dna序列的方法。此项技术中已知可于宿主中表现及复制的生物功能病毒及质粒dna载体。以重组dna转形宿主细胞可通过熟习此项技术者熟知的习知技术进行。
经重组表现的多肽的分离及纯化可通过习知方式(包括制备型层析法及免疫分离)进行。
人类化可通常遵循此项技术中已知的习知方法进行，通过以啮齿动物cdr或cdr序列代替人类抗体的相应序列。因此，此等“人类化”抗体是其中大体上小于已经来自非人类物种的相应序列取代的完整人类可变域的抗体。实际上，人类化抗体通常是其中一些cdr残基及(可能)一些fr残基经来自非人类(例如)啮齿动物抗体的类似位置的残基取代的人类抗体。
选择待用于制造人类化抗体中的人类可变域(轻及重两者)对减小抗原性是非常重要的。啮齿动物抗体的可变域的序列针对整个已知人类可变域序列库进行筛选。然后最接近啮齿动物的序列的人类序列被公认为是用于人类化抗体的人类框架(fr)。另一方法使用衍生自轻链或重链的特定子群的所有人类抗体的一致性序列的特定框架。相同框架可用于数种不同的人类化抗体。
抗体结合部分包括(例如)fab、fab'、f(ab)2、f(ab')2、fv、scfv及类似物。此等片段使用此项技术中熟知的方法产生自完整抗体，例如通过使用酶(诸如木瓜酶(以产生fab片段)或胃蛋白酶(以产生f(ab')2片段))的蛋白水解裂解。
可对编码本文描述的多肽的核酸作出修饰而不降低其生物活性。可作出一些修饰以促进靶分子选殖、表现或并入融合蛋白中。此等修饰是熟习此项技术者熟知且包括(例如)终止密码子，添加至胺基端处以提供起始、位置的甲硫胺酸，放置于任一末端上以产生便于定位的限制位置的额外的氨基酸或在纯化步骤中有帮助的额外氨基酸。除重组方法外，本发明的抗体亦可使用此项技术中熟知的标准肽合成以完整或部分构筑。
在另一态样中，本发明提供包含本发明的抗cd11b抗体的组合物。在一些实施例中，此等组合物可投与给个体。在一些实施例中，本发明的抗cd11b抗体可提供于包含一或更多种其他组分(包括(但不限于)医药上可接受的载剂、佐剂、润湿剂或乳化剂、ph缓冲剂、防腐剂及/或任何其他适用于组合物的预期用途的组分)的组合物中。此等组合物可采取溶液、悬浮液、乳液及类似物的形式。术语“医药上可接受的载剂”包括各种稀释剂、赋形剂及/或媒介体。医药上可接受的载剂包括(但不限于)已知对递送至人类及/或其他动物个体是安全的载剂，及/或由联邦或州政府的监管机构批准的载剂，及/或列于美国药典中及/或其他公认的药典中的载剂，及/或接受来自一或多个公认的监管机构的特定或个别批准以用于人类及/或其他动物中的载剂。此等医药上可接受的载剂包括(但不限于)水、水溶液(诸如生理盐水溶液、缓冲剂及类似物)、有机溶剂(诸如某些醇及油，其等包括彼等石油、动物、蔬菜或合成起源的油(诸如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油))及类似物。
在一个实施例中，本发明的人类化抗cd11b抗体可提供于包含一或更多种“化学治疗剂”(其等是用于治疗癌症的化学化合物，亦称为抗肿瘤药物)的组合物中。抗肿瘤药物通常根据化学结构及药物起源的差异而归类为烷化剂、抗新陈代谢药物、抗肿瘤抗生素、蒽环类抗生素、抗肿瘤草药及激素。取决于周期或相特异性，抗肿瘤的化学治疗药物可归类为(1)细胞周期非特异性药剂(ccnsa)，诸如烷化剂、抗肿瘤抗生素及铂配位错合物等，及(2)细胞周期特异性药剂(ccsa)，诸如抗代谢药物、长春花生物碱等。
在一些实施例中，本发明的组合物包含“有效量”的本发明的抗cd11b抗体。“有效量”是达成所需目标结果所需要的量。有效达成所需目标结果的本发明的人类化抗cd11b抗体的量将取决于各种因素，其等包括(但不限于)预期个体的物种(例如，是否是人类抑或是一些其他动物物种)、预期个体的年龄及/或性别、经计划的投与途径、经计划的给药方案、任何进行中的疾病或病症的严重性及类似因素。有效量(其可为有效量的范围)可通过标准技术测定而无需任何过度的实验，例如，使用在预期个体物种或任何合适的动物模型物种中的活体外分析及/或活体内分析。合适的分析包括(但不限于)彼等涉及来自剂量-反应曲线的外推法及/或衍生自活体外及/或活体内模型系统的其他数据者。在一些实施例中，所述有效量可根据医学或兽医从业者基于特定情况的判断而判定。
在一个实施例中，人类化抗cd11b抗体的有效量在自每次投与时介于约0.01mg/kg至约40mg/kg体重的范围内；较佳地，介于约0.01mg/kg至约30mg/kg、约0.01mg/kg至约20mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约1mg/kg至约40mg/kg、约1mg/kg至约30mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约2mg/kg至约40mg/kg、约2mg/kg至约30mg/kg、约2mg/kg至约20mg/kg、约2mg/kg至约10mg/kg、约5mg/kg至约40mg/kg、约5mg/kg至约30mg/kg、约5mg/kg至约20mg/kg或约5mg/kg至约10mg/kg或约1mg/kg至约5mg/kg的范围内。
在一些实施例中，本发明提供方法，这些方法包括向个体投与本发明的人类化抗cd11b抗体。此等方法包括用于抑制免疫细胞中pd-l1表现、免疫细胞中逆转免疫抑制或免疫衰竭或诱发预存免疫力、侦测个体中的pd-l1及治疗或预防急性及/或慢性感染、败血症、癌症中的免疫缺陷或老化中的免疫衰老的方法。本发明的抗cd11b抗体可用于上文提及的方法中。
本文描述的癌症是对免疫疗法具有反应性的癌症且这些癌症的实例是如本文描述。预防及/或治疗癌症的方法包含投与额外的活性剂或疗法。这些额外的活性剂、其等实施例及投与是如本文描述。
可投与(例如，在治疗的方法的过程中)本发明的抗cd11b抗体或包含所述抗cd11b抗体的组合物的个体包括任何及所有动物物种。在一些实施例中，这些个体是哺乳类物种。哺乳类个体包括(但不限于)人类、非人类灵长类动物、啮齿动物、兔及雪貂。
此项技术中已知各种递送系统且可使用任何合适的递送系统以向个体投与本发明的组合物。此等递送系统包括(但不限于)皮内、肌内、腹腔内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜上及经口递送系统。本发明的组合物可通过任何便捷的途径投与，例如通过输注或快速浓注，通过通过上皮或黏膜皮肤内衬(例如，口腔黏膜、直肠黏膜及肠黏膜等)吸收且可连同其他生物活性剂一起投与。投与可为全身投与或局部投与。
在一些此类实施例中，单一剂量的投与较佳。然而，在其他实施例中，额外的剂量可通过达成所需效应的相同或不同的途径投与。在一些实施例中，给药方案可包含单一投与。在其他实施例中，给药方案可包含多次投与。
实例
下文描述用于下列实例中的材料及方法：
材料及方法
人类细胞分离及细胞培养
来自健康志愿者的白血球浓缩物是获得自台湾血液服务基金会(台北，台湾)。获得用于参与研究的书面知情同意书，其经马偕纪念医院人体试验委员会(institutionalreviewboardofthemackaymemorialhospital)批准。人类单核细胞如先前描述经分离。简而言之，周边血液单核细胞(pbmc)使用ficoll-paqueplus(gehealthcare)梯度离心分离法进行分离。这些单核细胞通过使用cd14macs微珠(miltenyibiotec)进行cd14选择来进一步纯化。使用流动式细胞测量术分析证实的单核细胞纯度约90％。
动物及肿瘤细胞系。
c57bl/6小鼠(6至8周龄)购买自实验动物中心(台北，台湾)。所有动物实验均在无特定病原的条件下且根据经马偕纪念医院动物护理及使用委员会(台北，台湾)批准的指导方针进行。在治疗开始时及在治疗期间每天量测各小鼠的体重。b16f10是鼠科黑色素瘤细胞及llc1是鼠科lewis氏肺癌。所有细胞均是衍生自c57bl/6小鼠。细胞在37℃下于5％co2湿润气氛中维持于杜贝卡氏改良伊格培养基(dmem)、10％热灭活胎小牛血清、2mml-麸酰胺酸、青霉素(100u/ml)及链霉素(100μg/ml)中。
抗体及试剂
针对人类单核细胞研究
来自大肠杆菌(o111:b4)的lps是获得自sigma。对人类cd11b具有特异性的鼠科结合抗体(icrf44)及用于对照抗体的小鼠igg1均购买自biolegend。
针对鼠科癌症模型
对鼠科cd11b(m1/70)具有特异性的大鼠结合抗体、大鼠对照igg2b抗体(ltf-2)、亚美尼亚仓鼠抗鼠科pd1(j43)及亚美尼亚仓鼠对照igg均购买自bioxcell。紫杉醇获得自马偕纪念医院的化学疗法药物。
癌症治疗的方案
皮下肿瘤模型
对c57bl/6小鼠皮下接种2×105个b16f10细胞或1x106个llc1细胞。在肿瘤接种后7天，开始治疗。用不同抗体及化学药物每周两次腹腔内(ip)治疗带肿瘤小鼠。监测小鼠并每周两次针对可触知的肿瘤的形成进行评分且若肿瘤超过3000mm3的预定尺寸则处死这些小鼠。肿瘤体积用卡尺量测并用下式计算：a×b2×0.54，其中a是最大直径及b是最小直径。
肺转移模型
在第0天经由尾静脉向各小鼠注射2x105个b16f10细胞或llc1细胞。在第1天，小鼠腹腔内注射各种抗体。每三至四天重复注射。在第15天，处死小鼠且将肿瘤接种的量计算为在显微镜下存在于肺中的结节的总数量。在其他实验中，针对组合疗法对各组中经治疗的小鼠的长期存活率的效应分析小鼠。
流动式细胞测量分析
针对人类单核细胞研究
单核细胞是经抗cd11b(icrf44)或适当的同型对照抗体预先培养1小时。随后向这些细胞中添加100ng/mllps并培养整夜。为分析lps致敏单核细胞的表面表现型，将这些细胞在冰上于黑暗中用下列稀释于含有1％bsa的磷酸盐缓冲盐水(pbs)中的mab培养30分钟：pd-l1-fitc、cd80-pe、cd86-pe、hla-dr-pe及cd14-percp(bdbiosciences)。单核细胞、多形核白细胞(pmn)及淋巴细胞基于其等fsc/ssc性质进行闸控。使用facscalibur侦测荧光，且使用fcsexpress，第3版(denovo软件)进行数据分析。
针对鼠科癌症研究
为获得肿瘤浸润性白细胞，通过胶原蛋白酶iv(sigma)消化肿瘤组织。单一细胞悬浮液用下列抗体染色：cd45-pe、ly-6g-fitc、ly-6c-apc及cd8b.2-fitc。肿瘤浸润性白细胞是经闸控自cd45+群体。使用facscalibur侦测荧光，且使用fcsexpress，第3版(denovo软件)进行数据分析。
为分离来自各实验的白血球(wbc)，全血细胞通过rbc裂解缓冲液裂解。单一细胞悬浮液用下列抗体染色：pd-l1-apc、iaie-apc及cd8b.2-fitc(biolegend)。单核细胞、多形核白细胞(pmn)及淋巴细胞是基于其等fsc/ssc性质。使用facscalibur侦测荧光，且使用fcsexpress，第3版(denovo软件)进行数据分析。
细胞介素定量
培养物上清液中的人类il-6、il-10、il-12及tnf-α通过商业酶联免疫吸附法(elisa；r&d系统)根据制造商使用说明进行侦测。血浆中的鼠科il-12、ifn-γ及tnf-α通过bdcba小鼠炎症套组定量。
实例1：结合cd11b将减少lps致敏单核细胞上的pd-l1表现
在此实例中，吾人研究整合素αmβ2(mac-1)的阻断是否可在功能上增加tlr反应。如图1中所示，cd11b结合剂(诸如抗cd11b抗体(icrf44))的投与可减少单核细胞上的lps诱发的pd-l1表现。相比下，抗cd11b抗体治疗不改变lps致敏单核细胞上的hla-dr、cd80及cd86表现水平。以ml-c19-a(cd11b拮抗剂的小分子)(图2a)结合cd11b亦证实lps致敏单核细胞中的抑制pd-l1表现(图2b)。此等结果一起表明cd11b在lps致敏单核细胞上的pd-l1表现的诱发中起关键作用。
实例2：cd11b结合于抗肿瘤免疫力中的效应
为检测cd11b结合于抗肿瘤免疫力中的效应，将抗小鼠cd11b(m1/70)抗体作为b16f10鼠科肿瘤模型中的单一疗法进行测试。对c57bl/6小鼠在第0天皮下注射b16f10细胞。在第7天，对小鼠腹腔内(ip)注射对照igg(5mg/kg)或抗小鼠cd11b抗体(5mg/kg)。每三至四天重复注射。通过针对各组监测肿瘤体积及长期存活率而测定效用。如图3中所示，以抗小鼠cd11b抗体结合cd11b强效抑制b16f10肿瘤的皮下生长(在第18天，对照igg相比于抗cd11b＝1054±385.4mm3相比于502.7±268.2mm3)。吾人检测免疫细胞群体于肿瘤中的比例。在肿瘤接种后的第18天，以抗cd11b抗体结合cd11b减少肿瘤浸润性骨髓衍生的抑制细胞(mdsc)的局部聚集，mdsc抑制t细胞且导致经肿瘤浸润的cd8t细胞的增加(图4)。同时，以抗cd11b抗体结合cd11b将免疫抑制肿瘤微环境转变成免疫刺激状态，其有利地有助于抗肿瘤效应。吾人进一步检测免疫细胞群体在抗cd11b抗体治疗后于周边中的比例。在肿瘤注射后的第15天，抗cd11b治疗导致cd11b阳性白血球中的pd-l1表现减少，同时iaie阳性cd8t细胞(经活化的t细胞)于cd8t细胞中的百分率增加(图5)。ifn-γ、il-12及tnf-α的血浆浓度反映各种炎性或恶性疾病中的免疫刺激状态。吾人量测经抗cd11b抗体治疗的带肿瘤的小鼠中的血浆ifn-γ、il-12及tnf-α浓度。相较于对照igg治疗，经抗cd11b抗体治疗的小鼠显示高血浆ifn-γ、il-12及tnf-α水平(图6)。
cd11b结合亦证实不同的同基因llc1肿瘤模型中的效用。使用5mg/kg抗cd11b抗体的治疗强效抑制llc1肿瘤的肿瘤生长(图7)并延长动物存活(图8)(中值存活天数对照igg：31天；抗cd11b：42天)。
实例3：cd11b结合及免疫查核点疗法于抗肿瘤免疫力中的协同效应
经组合的治疗证实不同的同基因llc1肺转移模型中的效用。使用抗cd11b(10mg/kg)+抗pd-1(10mg/kg)抗体的治疗强效减少llc1肿瘤的肿瘤结节(图9)(在第15天，对照igg相比于抗cd11b相比于抗pd-1相比于抗cd11b+抗pd-1＝200±13相比于167相比于164±11相比于131±2)并延长动物存活(图10)(中值存活天数对照igg：24天；抗cd11b：24天；抗pd-1：22天；抗cd11b+抗pd-1：26天)。
实例4：cd11b结合及化学疗法于抗肿瘤免疫力中的协同效应
cd11b结合亦增强化学疗法。在此实例中，在第0天植入b16f10细胞。在第7天，对小鼠腹腔内注射对照igg(5mg/kg)、抗小鼠cd11b抗体(5mg/kg)、紫杉醇(10mg/kg)+对照igg(5mg/kg)或紫杉醇(10mg/kg)+抗cd11b(5mg/kg)。每三至四天重复注射。如图11中所示，使用紫杉醇加抗cd11b抗体的组合的治疗有效控制肿瘤生长。组合治疗的有效性亦证实于长期存活率中(图12)(中值存活天数对照igg：25天；抗cd11b：32天；紫杉醇+对照igg：25天；紫杉醇+抗cd11b：32天)。
实例5：在来自患有败血性休克的病患的lps诱发的免疫抑制单核细胞或单核细胞中，以抗cd11b抗体结合cd11b在细胞经lps挑战时亦减少pd-l1表现。
败血症(一种由严重感染引起的全身性炎性反应症候群)仍是全球健康护理问题及威胁生命的疾病。越发明显的是，败血症启动随时间变化的双相免疫反应。在败血症的初始阶段期间，全身性高度炎性免疫反应可全身产生炎性细胞介素(包括介白素(il)-1、il-6及肿瘤坏死因子(tnf)-α)，其可引起血液动力学不稳定性、多器官功能障碍、凝血异常及休克。随高度炎性免疫反应而来者是几乎同时产生抗炎性细胞介素(包括il-10及肿瘤生长因子(tgf)-β)；免疫系统迅速进入免疫高度活性状态(称为免疫麻痹)，其表现为无法根除原发性感染及后期医院内感染的发展。于患有败血症的病患中观察到的免疫麻痹的指示项包括淋巴细胞异常、单核细胞去活化伴减弱的人类白细胞抗原-dr(hla-dr)表面表现、及在活体外刺激下的低tnf-α产生。单核细胞hla-dr表现的持续减少指示患有败血症的病患的医院内感染及死亡的高风险。最近，观察到患有败血性休克的病患的单核细胞中的高程序死亡配体-1(pd-l1)表现且其与继发性医院内感染及死亡率的高发生相关(guignantc、lepapea、huangx、kheroufh、denisl等人，(2011)programmeddeath-1levelscorrelatewithincreasedmortality,nosocomialinfectionandimmunedysfunctionsinsepticshockpatients.critcare15:r99)。因此，单核细胞中的pd-l1表现的水平可充当免疫麻痹的新颖标志。
已报告单核细胞对lps历时2天的先前曝露将使其等变为免疫抑制单核细胞(wolkk，dockewd，vonbaehrv，volkhd及sabatr.(2000)impairedantigenpresentationbyhumanmonocytesduringendotoxintolerance.blood96:218)。临床上，此等细胞与免疫麻痹及死亡率相关。吾人建立可复制的lps诱发的免疫抑制单核细胞，其中人类单核细胞经100ng/mllps预先培养2天。相较于新鲜的经分离的人类单核细胞，lps诱发的免疫抑制单核细胞在细胞表面上表现更高的pd-l1水平(图13a)。为检测cd11b调节剂在lps诱发的免疫抑制单核细胞中的效应，使细胞在igg1或抗cd11b抗体(icrf44)的存在下曝露于1μg/mllps，历时18hr。如图13b中所示，以抗cd11b抗体(icrf44)结合cd11b在细胞经lps激发时减少lps诱发的免疫抑制单核细胞中的pd-l1表现。此外，抗cd11b抗体(icrf44)治疗亦一经活体外lps刺激即减少来自患有败血性休克的病患的单核细胞中的pd-l1表现(图14)。
实例6：结合人类cd11b的人类化抗体
针对人类抗体数据库搜索鼠科抗人类cd11b抗体的可变域序列。选择10组对鼠科抗人类cd11b具有高同源性的人类框架序列作为用于轻链及重链两者的人类接受者。同时，分析n-醣化基序。因此应避免候选人类可变区中的潜在醣化位置。10个轻链的人类化可变域表示为vl1、vl2、vl3、vl4、vl5、lc1、lc2、lc3、lc4及lc5(图15)，而10个重链的人类化可变域表示为vh1、vh2、vh3、vh4、vh5、hc1、hc2、hc3、hc4及hc5(图16)。此等轻链及重链肽序列可提供以高亲和力结合至人类抗cd11b的人类化抗体或抗原结合部分。
实例7：人类化cd11b抗体的功能活性
人类化抗cd11b抗体的特异性通过流动式细胞测量术使用表现cd11b的k562细胞测定。如图17中所示，此实例中的所有人类化抗cd11b抗体可结合至经cd11b转染的k562细胞。相反，此等抗体不结合至k562细胞。综合而言，此等结果证实人类化抗cd11b抗体可特异性结合至cd11b抗原决定基。
为检测人类化抗cd11b抗体的功能活性，抗体是用于量测抗体抑制单核细胞的表面上的pd-l1表现的能力的lps致敏单核细胞中。如图18中所示，通过lps上调pd-l1可通过人类化抗cd11b抗体显着减少。
总而言之，吾人描述一系列针对人类αm域的人类化抗cd11b抗体。人类化抗cd11b抗体的结合可减少lps致敏单核细胞上的pd-l1表现。
序列表
<110>吕衍达
<120>调控免疫反应的方法及抗体
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