一种银杏黄酮类化合物的制作方法

本发明涉及天然药物化学领域，具体涉及一种银杏黄酮类化合物。
背景技术：
：银杏叶提取物(GinkoBilobaExtract,GBE)是以银杏GinkgobilobaL.的叶为原料，采用适当的溶剂，提取的有效成分富集的一类产品，为浅黄棕色可流动性粉末，有本品固有的香气，味苦，具有活血、化瘀、通络的功效。目前国际通用的银杏叶提取物质量标准，即标准银杏提取物(银杏总黄酮≥24％，萜内酯≥6％，银杏酸≤10ppm)，由上世纪七十年代德国率先制定。银杏叶提取物除具有显著的拮抗PAF受体外，还可以在抗炎、抗过敏、扩张血管、保护心脑血管、改善外周血液循环、降低血清胆固醇及辅助抗癌等方面发挥药效，广泛应用于心脑血管、神经等系统疾病的防治和保健。技术实现要素：本发明涉及一种银杏黄酮类化合物，7-对香豆酰基山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖-2″-β-D-葡萄糖苷(化合物1)，其结构式为式一：以标准银杏叶提取物EGB50为原料，经水或有机溶剂或它们的混合溶剂提取。制备步骤如下：⑴将银杏叶提取物用溶剂溶解，过大孔树脂柱分离，不同梯度的乙醇水溶液洗脱，收集40％-70％乙醇水之间的流分，浓缩、干燥，得提取物⑴；⑵将提取物⑴用溶剂溶解，过硅胶柱分离，二氯甲烷-甲醇不同比例洗脱，收集40∶1～20∶1之间的流分，浓缩、干燥，得黄酮类成分⑵；⑶将黄酮类成分⑵用溶剂溶解，过反相层析柱分离，以不同梯度的甲醇-水溶液洗脱，收集40∶1～20∶1之间的流分，通过TLC、HPLC、HPLCQ-TOFMS分析，综合文献数据库检索，H-NMR、C-NMR、HMBC谱鉴定其结构为：7-对香豆酰基山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖-2″-β-D-葡萄糖苷，纯度97.08％。一种银杏黄酮类化合物，所述的化合物能用于制备抗心肌缺血、抗凝、抗缺氧和增强短期记忆力、清除自由基、延缓衰老的组合物。一种银杏黄酮类化合物，所述药物通过添加药学上可接受的载体制备成各种剂型。一种银杏黄酮类化合物，所述剂型为片剂、锭剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、口服液、悬浮液、乳剂、注射剂、栓剂或贴剂。本发明的银杏黄酮类成分，具备与其他银杏黄酮类似抗氧化功效，具较好的抗心肌缺血、抗凝、抗缺氧和增强短期记忆力、清除自由基、延缓衰老等药理作用。其化学结构稳定，溶解性好，可与医学上接受的药物辅料组成药物组合及其制剂。附图说明：图1：本发明所得化合物HPLC图2：NMR-H谱图3：NMR-C谱图4：HMBC谱图5：本发明所得化合物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用实施例1：本发明所得化合物的HPLC本发明所得化合物的HPLC条件如下：A.仪器：安捷伦1260HPLCB.HPLC的检测条件：紫外360nm条件下检测C.HPLC流动相：A相：0.1％甲酸-水B相：乙腈D.时间程序：E.流速：1ml/min本发明所得化合物的HPLC如图1。实施例2：本发明所得化合物的HPLCQ-TOFMSA：HPLC的检测条件：紫外360nm条件下检测B：HPLC流动相：A相：0.1％甲酸-水B相：乙腈C：时间程序：时间(min)A相/％B相/％0901010.00901020.00851525.00811930.00604035.00406040.00109045.00StandbyD：质谱条件：色谱柱为AgilentZorbaxSB-C18(4.6×250mm,5μm)，流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脱：0～10min，10～10％B；10～20min，10～15B％；20～25min，15～19B％；25～30min，19～40％B；30～35min，40～60B％；35～40min，60～90B％流速，1.0mL/min；柱温，25℃；进样量，1.0μL；裂解电压120V；质量扫描范围为m/z100～1000，碰撞电压为15～30eV。本发明所得总黄酮HPLCQ-TOFMS：如图2实施例3NMR-H谱、NMR-C谱、HMBC谱NMR-H谱，见图2：1H-NMRDMSO-d6300KAV-300NMR-C谱，见图3：C13-NMRDMSO-d6300KAV-300HMBC谱，见图4。实施方式3：取标准银杏叶提取物10克，大孔树脂吸附，分别以不同梯度的乙醇水溶液洗脱，收集40％-70％之间的流分，浓缩、干燥，得提取物⑴；⑵将提取物⑴用溶剂溶解，过硅胶柱分离，二氯甲烷-甲醇不同比例洗脱，收集40∶1～20∶1之间的流分，浓缩、干燥，得黄酮类成分⑵；⑶将黄酮类成分⑵用甲醇溶解，过反相层析柱分离，以不同梯度的甲醇-水溶液洗脱，收集40∶1～20∶1之间的流分，通过HPLC、HPLCQ-TOFMS分析，综合文献数据库检索，H-NMR、C-NMR、HMBC谱鉴定其结构为式一。HPLCQ-TOFMS负离子模式检测，分子量739.1886，出峰时间43min/50min。反相硅胶纯化至97％纯度，核磁确认结构。实施例4实验材料：黄嘌呤氧化酶(Sigma，USA)，酶标仪(Thermofisher，美国)，黄嘌呤(上海博蕴试剂公司)，其他试剂购自上海沪试。实验方法：制备含有不含样品的磷酸盐缓冲溶液(75mM，pH7.4)的空白溶液。将含有100μL试验溶液(终浓度为0,15.6,31.25,62.5,125,250,500μM)和50μL0.08u/mL酶溶液的反应混合物加入96孔板中，避光室温孵育30分钟。加入50μL的0.48mM黄嘌呤起始反应，在290nm处用酶标仪，每隔15秒测量吸光度一次，测定0-300s内吸光度值。所有样品各4个重复，通过GraphPadPrismversion6.02软件计算统计分析和IC50值。黄嘌呤氧化酶抑制率根据下列公式计算：抑制率＝[dA/dt(BLANK)-dA/dt(TEST)]/dA/dt(BLANK)*100实验结果：表1NMRspectraldataofcompound14(DMSO-d6,500MHz)当前第1页1 2 3