本发明属于微生物
技术领域：
，具体地说，涉及一种芽孢杆菌eab-2及其应用。
背景技术：
：植物寄生线虫是植物的主要病原物之一，是我国乃至世界农业生产上一类重要的土传病害。据faq的保守估计，全世界每年因线虫的危害所造成的经济损失约1000亿美元。我国每年仅大豆因线虫造成的损失就达1亿美元，各种蔬菜线虫的危害损失达30亿美元以上。目前，生产上急需防治线虫的作物面积至少在5000万亩。严重威胁我国农林业生产的线虫病害有各种作物的根结线虫(meloidogynespp.)病、马铃薯腐烂茎线虫(ditylenchusdestructor)病、胞囊线虫(heteroderaspp.)病、水稻干尖线虫(aphelenchoidesbesseyi)病和松材线虫(bursaphelenchusxylophilus)病等。目前主要使用化学农药对农林业线虫进行防治，但是带来了一系列的负面问题，如加强了对农林业线虫的抗药性，危害非靶标生物，农药环境残留等等。使用微生物源农药对有害生物进行防治，减少了对环境的破坏，同时还有效的防治了线虫。但绝大多数的微生物产生活性物质的量较少，对很多有害生物的防治效果不佳，不能被广泛的推广。因此需要进一步挖掘和开发对线虫防治效果好的的微生物。茎泽兰生命力强、生长迅速、繁殖率高又难以清除，一旦传入新的生境并定居下来，很快就会后来居上，排挤当地植物而形成大片单优群落，导致当地物种灭绝、耕地退化、经济作物严重减产和牧场退化，给入侵地的农业、生态、经济造成巨大的损失。有研究表明植物内生菌能帮助宿主植物生长发育，抵御不良环境等不利环境，但现阶段对紫茎泽兰内生菌的研究主要集中在内生真菌的研究，还没有对内生细菌开展研究。技术实现要素：针对以上技术问题，本发明的目的在于提供一种具有杀线虫功能和促植物生长的芽孢杆菌(bacillussp.)。为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：一种芽孢杆菌eab-2，该芽孢杆菌(bacillussp.)在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为cgmccno.14102，保藏中心地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为2017年05月05日。本发明公开了该菌株制备的发酵液对秀丽隐杆线虫和南方根结线虫有致死活性。本发明公开了该菌株制备的发酵液对植物生长有促进作用。芽孢杆菌eab-2菌株的分离纯化过程：紫茎泽兰采自云南农业大学化学楼附近，将紫茎泽兰整株采回，用清水洗净，将根、茎、叶分段放置，在超净工作台内采用表面灭菌法去除紫茎泽兰植株表面的杂菌污染，用30％过氧化氢清洗30s，75％酒精清洗2min，无菌水清洗三次；将灭菌后的紫茎泽兰根、茎、叶分别放入无菌的研钵中，在超净工作台里进行研磨，将研磨后的汁液取1ml放入盛有9ml无菌水的试管中，即为10-1稀释度的菌液，再从10-1稀释度的菌液中取1ml放入盛有9ml无菌水的试管中，即为10-2稀释度的菌液，以此类推制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7稀释度的菌液；将稀释菌液10-4、10-5、10-6、10-7分别涂布于平板上，每个梯度涂三皿，在皿低做上标记；倒置平皿于28℃培养箱中培养3-5天；在无菌条件下用挑针将na培养基上长出的单菌落挑取于lb培养基上划线培养，纯化3-4次可得纯化后的单菌落。本发明的有益效果：本发明提供的芽孢杆菌eab-2分离自紫茎泽兰，是其内生细菌，该菌株具有高效杀线虫的作用，其对紫茎泽兰有促生长作用，可为进一步对紫茎泽兰的入侵和扩散机制的探究作补充，而且其还具备促进植物生长的潜力。具体实施方式实施例1本发明提供的芽孢杆菌eab-2在杀线虫方面的应用：eab-2的一阶段扩繁培养：用标准lb固体培养基，调ph值4.3-6.3，倒平板待冷却后，接种eab-1菌株，在温度15℃-28℃培养1-3天，见有单菌落长出即可。eab-2的二阶段扩繁培养基：标准lb液体培养基，ph值4.3-6.3。挑取第一阶段扩繁后长出的单菌落，接入到100ml的lb液体培养基，28℃过夜摇床培养后，将菌悬液接入二阶段扩繁培养基，在温度15℃-28℃培养1-3天，每12小时进行一次搅拌，接种比例为：2l液体培养基接种400μl菌悬液的比例进行接种。eab-2的发酵液，将二阶段培养完成的培养液，8℃冷藏8小时，取出后冷冻高速离心(4℃，8000rpm，5min)分离菌体，将菌体和上清液分别做杀线虫活性筛选试验。200μl上清液或菌悬液中加入l1期线虫40-50头置于96孔板中，同时加入100μg/ml链霉素和100μg/ml氯霉素抑制细菌的生长。培养48h后观察线虫的活动能力，若没有移动能力的线虫视为死亡，并统计其死亡数量。大肠杆菌作为对照，每个菌株做8个生物学重复。表1芽孢杆菌bacillussp.40eab-2菌株发酵液的杀线虫活性由表1可知，紫茎泽兰内生菌芽孢杆菌eab-2的发酵液，对秀丽隐杆线虫和南方根结线虫均有很好的致死活性。随着发酵液浓度的升高，致死率也在升高。在菌液od600值为0.016时，开始表现杀虫活性，od600值为0.5时，对秀丽隐杆线虫致死率达到最高为100％，对南方根结线虫致死率也达到最高为98.99％。实施例2本发明提供的芽孢杆菌eab-2在促紫茎泽兰生长方面的应用：芽孢杆菌bacillussp.40eab-2菌株在lb液体培养中培养(28℃，230rpm过夜培养16h)，菌液od值为0.5-0.7，将20ml培养液浇灌紫茎泽兰幼苗，25d后测量其株高和鲜重，浇灌大肠杆菌的菌培液作为对照。表2芽孢杆菌bacillussp.40eab-2菌株对紫茎泽兰生长的影响处理株高(cm)鲜重(g)芽孢杆菌bacillussp.40eab-2菌株发酵液19.10±0.691.61±0.20大肠杆菌escherichiacoli发酵液11.90±0.490.93±0.02由表2可知，芽孢杆菌bacillussp.40eab-2菌株发酵液浇灌紫茎泽兰的株高和鲜重均显著高于对照(大肠杆菌escherichiacoli发酵液浇灌的紫茎泽兰)，芽孢杆菌bacillussp.40eab-2菌株能促进紫茎泽兰的生长。实施例3本发明提供的芽孢杆菌eab-2在促烤烟生长方面的应用：芽孢杆菌bacillussp.40eab-2菌株在lb液体培养中培养(28℃，230rpm过夜培养16h)，菌液od值为0.5-0.7，将20ml培养液浇灌云85烤烟幼苗，30d后测量其株高、茎围和最大叶面积，浇灌大肠杆菌的菌培液作为对照。表3芽孢杆菌bacillussp.40eab-2菌株对云85烤烟的影响处理株高(cm)茎围(cm)最大叶面积(cm2)芽孢杆菌bacillussp.40eab-2菌株发酵液29.62±3.683.19±0.61552.45±21.23大肠杆菌escherichiacoli发酵液27.60±3.272.95±0.69490.25±17.84由表3可知，芽孢杆菌bacillussp.40eab-2菌株发酵液浇灌云85烤烟的株高、茎围和最大叶面积均显著大于对照(大肠杆菌escherichiacoli发酵液浇灌的云85烤烟)，芽孢杆菌bacillussp.40eab-2菌株能促进云85烤烟的生长。实验分析将本申请公开的芽孢杆菌与从番茄中分离得到的芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌ar11菌株分别培养制备发酵液，将三种发酵液用做杀线虫(南方根结线虫、秀丽隐杆线虫，l1期)试验，发酵液od值相同(0.25)，试验结果如下：致死率本申请芽孢杆菌番茄分离芽孢杆菌枯草芽孢杆菌ar11菌南方根结线虫86.5％58.36％59.3％秀丽隐杆线虫88.3％80.0％76.5％本发明菌株的发酵液对南方根结线虫和秀丽隐杆线虫的防治效果明显高于现有菌株的效果，当菌发酵液od为0.25时，对秀丽隐杆线虫的致死率为88.30％，对南方根结线虫致死率为86.50％。最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。当前第1页12