一株沙福芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物根际促生菌及其应用技术领域，具体设及一株促进烟草生长的具 有解憐和产IAA功能的沙福芽抱杆菌及其促生特性的应用。
【背景技术】
[0002] 烟草是茄科（Solanaceae)烟草属（Nicotiana) -年生草本植物。喜溫、喜光、耐 旱、怕溃、耐瘡、需钟较多。烟草叶、茎、花專和果都有多细胞的毛，其中腺毛细胞中含有叶绿 素，能综合含有树胶和树脂的渗出物，与烟草的香气有一定关系。烟草叶柄不明显或成翅状 柄，其圆锥花序顶生，花專筒状，花冠漏斗状，末端粉红色。葫果，种子黄褐色。烟草原产于南 美洲，因其叶片含烟碱（尼古下），采收后经过调制、分级和加工处理，可制卷烟、雪茄烟、旱 烟等，是烟草工业重要的原料。近年来我国烟田施肥出现很大的问题，具体表现为：（1)肥 料利用率不高，有资料表明我国烤烟肥料利用率较低，南方一些省份肥料利用率仅20%左 右。其原因是对肥料利用率的相关性技术缺乏深入研究，特别是对南方烟区肥料流失的控 制和北方烟区的营养吸收障碍等没有从根本上研究解决；(2)烟田±壤肥力不同程度出现 下降趋势，由于缺乏良好的培肥地力措施，加之轮作条件差，烟田常年连作，±壤主要营养 元素都不同程度出现下降趋势，同时±壤物理性状变劣；（3)营养不平衡，重氮轻憐缺钟； (4)对旱作烟草的施肥技术缺乏研究。
[0003] 研究发现植物根际±壤中含有一些可W促进植物生长的微生物，一般有固氮、解 憐、释钟、产生植物激素和分泌抗生素等能力或至少具有其中之一能力的细菌、蓝细菌等。 统称为植物根际促生菌（PGPR)，其促生作用机制主要有W下几大类：提供植物营养物质、 产生植物生长调节物质、植物根际生物修复剂和环境胁迫调节剂等。但筛选出具有多种功 能且高效的微生物菌株一直是本领域追寻的目标。
[0004] 目前情况来看烟草对憐的利用效率很低，±壤中现有的憐并不能满足烟草生长的 需要。±壤中含有大量有机物，可W利用口61^将±壤中的含憐的有机物分解，产生可W供 给烟草使用的憐。既为烟草补充了营养元素又避免了施用化学肥料的弊端，比如容易污染 环境，使±壤板结使烟草田的±质受到破坏，损耗±壤中的有机物，降低了±壤肥力等。而 且目前还未见同时具有高效解憐和产IAA功能的沙福芽抱杆菌及其促进烟草生长的应用 报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一株沙福芽抱杆菌及其促进烟草生长的应用，该菌株具有解 憐和产生长素IAA的作用。
[0006] 一株沙福芽抱杆菌度acillussafensis)JX9,该菌株保藏编号：CGMCCNo. 9617。 保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（CGMCC)，地址：北京市朝阳区 北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年8月28日。
[0007] 所述的沙福芽抱杆菌的培养条件，采用LB培养基：蛋白腺lOg，酵母浸膏5g，化C1 lOg，蒸馈水 1000ml，121°C灭菌 20min，培养溫度 37°C，pH7. 0。
[0008] 所述的沙福芽抱杆菌的应用，用于解憐和/或产生长素lAA，从而促进植物的生 长。所述的的植物包括烟草。
[0009] 本发明菌株培养后得到菌悬液作为液态菌剂使用，菌悬液的菌数浓度>l〇Sc化/ mL。菌剂的使用方法：缓苗后灌根，每株烟苗加菌剂ImL。
[0010] 本发明菌株在LB培养基（蛋白腺lOg，酵母浸膏5g，化CllOg，蒸馈1000ml，12rc 灭菌20min，溫度37°C，pH7.0。）上培养4化后菌落呈圆形，不透明，表面干燥无隆起，淡 黄色，边缘整齐。菌体呈球状，不产芽抱，革兰氏染色阴性。
[0011] 该菌株的生理生化特征为：甲基红试验阴性、V-P试验阴性、淀粉水解试验阴性、 硝酸盐还原试验阳性、吗I噪试验阳性、硫化氨试验阳性、巧樣酸盐利用试验阳性、葡萄糖发 酵试验阴性、薦糖发酵试验阴性、麦芽糖发酵试验阴性、乳糖发酵试验阳性、甘露醇发酵试 验阴性、葡萄糖碳源利用试验阳性、乳糖碳源利用试验阳性、甘露醇碳源利用试验阳性、薦 糖碳源利用试验阳性、麦芽糖碳源利用试验阳性、巧樣酸碳源利用试验阴性、2%化C1耐盐 试验阳性、5 %化C1耐盐试验阳性、7 %化C1耐盐试验阳性、10%化C1耐盐试验阴性、产氨 试验阳性。
[0012] 该菌株的最适培养条件为：LB培养基：蛋白腺lOg，酵母浸膏5g，化C1lOg，蒸馈水 1000ml，溫度 37 °C，pH7.0。
[0013] W上株菌可W用于制备微生物菌剂，用LB培养基培养得菌悬液（菌悬液的菌数浓 度C化> 108个/mL)，作为液态菌剂。
[0014] 菌剂的使用方法：缓苗后灌根，每株烟苗加ImL。
[0015] 经研究表明，对本发明菌株的功能测定结果如下：在蒙金娜固体培养基（葡萄糖 lOg，（畑4)25〇4 0. 5g，化C1 0. 3g，Μ拆〇4· 7&0 0. 3g，FeS〇40. 03g，MnS〇4 · &0 0. 03g;CaC〇3 5.Og，KCl0. 3g，Ca3(P〇4)225.Og，卵憐脂 0. 3g，琼脂 18 ~20g，抑值 7. 2 ~7. 4)上培养一 周后，测得第一天其菌落直径d为2mm，溶憐圈直径D为3mm，D/d为1. 5,第Ξ天其菌落直径 d为4. 5mm，溶憐圈直径D为9. 5mm，D/d为2. 1，第屯天其菌落直径d为4. 5mm，溶憐圈直径 D为13mm，D/d为2. 9 ;在无机憐液体培养基（葡萄糖10.Og，（畑4)25〇40. 5g，化C1 0. 3邑， KC1 0. 3g，Μ拆〇4· 7&0 0. 3g，FeS〇4· 7&0 0. 03g，MnS〇4 · 4&0 0. 03g，Ca3(P〇4)2 25.Og，水 lOOOmL，pH7. 0-7. 5。）培养4天后，用钢蓝比色法测定培养液中速效憐的含量变化，从而反 应细菌的解憐能力，测得JX9培养液中速效憐含量为48. 4mg/L。在含有k色氨酸（200mg/ L)的R2A液体培养基（酵母粉0. 5g，膜蛋白腺0. 5g，酪蛋白氨基酸0. 5g，葡萄糖0. 5g，可溶 性淀粉 0. 5g，K2HPO40. 3g，Μ拆〇4· 7&0 0. 05g，丙酬酸钢 0. 3g。）中，28°C，180R/min，摇床 培养4d后取50μL菌悬液滴于白色陶瓷板上，同时加50μLSa化owski比色液巧0血35% 肥1〇4+1血0. 5mol/L化CI3)白色陶瓷板于室溫避光放置30min后观察，颜色变红表示 能够分泌IAA，然后用分光光度法测定菌悬液的0D600值，然后将菌悬液lOOOOR/min离屯、 lOmin，取上清液加入等体积Sa化owski比色液，避光静置30min使其显色，测定其0D530 值，计算菌浓度0D600值为1时，IAA的浓度，测得JX9发酵液中IAA含量为95.6mg/血。盆 栽30天时叶片数、最大叶片表面积大于对照，但是没有达到显著差异，60天时株高、茎围、 最大叶片表面积、叶片数均高于对照，茎围在0. 05水平上接近达到显著水平，90天时株高、 最大叶表面积、叶片数要优于对照，只是未达到显著水平。在采收后对生物量的统计中可W 看出植株的根、茎、叶鲜重均优于对照，并且达到显著差异。同时总鲜重优于对照。植株的 根、茎、叶干重W及植株总干重均要优于对照，同时茎干重在0. 05水平上达到显著差异，与 对照相比，根干重增幅为56. 31 %，茎干重增幅为45. 22%，叶总干重增幅为1.86%，植株干 重增幅为16.88%，植株根系比对照发达，有利于养分的吸收。W上研究结果表明，JX9菌株 可W很好的促进烟草生长，在促进烟草生长方面具有潜在的应用价值。 阳016] 本发明沙福芽抱杆菌度acillussafensis)JX9。保藏单位：中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中屯、（CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期： 2014 年8月 28 日，保藏编号：CGMCCNo. 9617。
【附图说明】
[0017] 图1为60天和90天JX9处理与对照的烟株株高柱形图；
[0018] 图2为60天和90天JX9处理与对照的烟株茎围柱形图；
[0019] 图3为30天、60天和90天JX9处理与对照的烟株最大叶表面积柱形图；
[0020] 图4为30天、60天和90天JX9处理与对照的烟株叶片数柱形图；
[0021] 图5为JX9处理与对照的烟株鲜生物量柱形图；
[0022] 图6为JX9处理与对照的烟株干生物量柱形图；
[0023] 图7为JX9解憐效果图。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
[00巧]本发明的沙福芽抱杆菌度acillussafensis)JX9,保藏单位：中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中屯、（CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日 期：2014年8月28日，保藏编号：CGMCCNo. 9617。
[0026] (1)CGMCCNo. 9617 的筛选
[0027] 在牛肉膏蛋白腺液体培养基富集的过程：稀释平板培养法分离，称取湖南桑植官 地坪烟田新鲜±壤lOg，置于内含玻璃珠和90血无菌水的250血Ξ角瓶中，170r/min振荡 30min，然后按10 5、10 6、107梯度进行稀释，各取0.ImL涂布于賴杆培养基（新鲜的稻草賴 杆300g，琼脂25g，水lOOOmL12rC高压蒸汽灭菌25min。）平板和无机憐培养基（葡萄 糖 10.Og，（畑4)25〇40. 5g，NaCl0. 3g，KC1 0. 3g，Μ拆〇4· 7&0 0. 3g，FeS〇4· 7&0 0. 03邑， MnS〇4.4H2〇 0. 03g，0曰3任〇4)2 25.Og，水 1000血抑 7. 0-7. 5,琼脂 25g。）平板上，其中賴 杆培养基涂布两份，其中一份覆盖一层尽可能厚的水琼脂。每个梯