本发明涉及富微五指毛桃小分子多糖的生产方法，具体涉及三酶一酵富微五指毛桃小分子多糖的生产方法，依次利用唾液淀粉酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解，最后利用乳酸菌发酵，整个过程仿生酶解，得到富微五指毛桃小分子多糖。
背景技术：
五指毛桃主要成分为多糖、甾类化合物、酚类化合物、氨基酸、香豆素类及黄酮类等。具有保护胃黏膜、提高免疫力水平、护肝保肝、镇痛抗炎、抑制肿瘤细胞的生长、抗氧化和抗菌等作用。
近年来五指毛桃的多糖作用得到医学界的广泛重视，高提取率提取小分子的五指毛桃多糖具有十分广阔的应用前景。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供三酶一酵富微五指毛桃小分子多糖的生产方法，依次利用唾液淀粉酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解，最后利用乳酸菌发酵，整个过程仿生酶解，得到的富微五指毛桃小分子多糖活性高，安全度高。在五指毛桃种植过程中施以富含ca、fe、mg和mn等微量元素的富微溶液，提高五指毛桃的微量元素含量，从而提高其功效。
本发明提供的三酶一酵富微五指毛桃小分子多糖的生产方法，包括以下步骤：
1)将富微五指毛桃干燥，粉碎，过筛后，加水，调节ph至7-7.5，加入唾液淀粉酶，于36-37.5℃保温条件下进行酶解反应；
2)然后调节ph至1.5-2.0，加入胃蛋白酶，于36-40℃保温条件下进行酶解反应；
3)然后调节ph至7.5-8.0，加入木瓜蛋白酶，于35-40℃保温条件下进行酶解反应；
4)向步骤3)制得的体系中加入乳酸菌，保温发酵后，离心，分离后滤液减压浓缩，然后浓缩液经过超临界co2萃取；
5)萃取液经过超滤后，减压浓缩，干燥，即得富微五指毛桃小分子多糖。
步骤1)中富微五指毛桃的种植方法为：
在五指毛桃的种植过程中，每15-30天向根部喷施em富微溶液。每次每棵五指毛桃em富微溶液的喷施量是0.5-1.5l。
所述em富微溶液的制备方法为：
将钙盐、镁盐、铁盐和锰盐与em原液稀释液混合，搅拌混匀后在20-28℃温度下发酵10-18天得em富微溶液，巴氏灭菌后备用。其中钙盐、镁盐、铁盐和锰盐与em原液稀释液的质量比为18-25:1.5-2.5:1:10-17:10-20。em原液稀释液是指将em原液稀释5-10倍。
步骤1)中五指毛桃粉碎后过60-100目筛。
步骤1)中加水量为五指毛桃质量的5-10倍。
步骤1)中唾液淀粉酶的加入量是富微五指毛桃质量的0.5-3％。
步骤1)中所述酶解反应进行2-4h；
步骤2)中胃蛋白酶的加入量是富微五指毛桃质量的0.4-4％。
步骤2)中所述酶解反应进行2-5h；
步骤3)中木瓜蛋白酶的加入量是富微五指毛桃质量的0.5-5％。
步骤3)中所述酶解反应进行1.5-5h；
步骤4)中乳酸菌的加入量为富微五指毛桃质量的0.5-2.5％。
步骤4)中发酵条件为30-37℃条件下，ph5-6条件下发酵15-30h。
步骤4)中所述离心是指在8000-10000r/min条件下离心10-20min。
步骤4)中所述超临界co2萃取条件为：压力为20-40mpa，萃取温度是35-50℃，静态萃取时间1-2h；动态萃取温度为35-50℃，萃取时间为2-6h；萃取压力为20-40mpa；i级分离釜压力6-10mpa，ⅱ级分离釜压力5-8mpa。
步骤5)中所述超滤是指用截留相对分子质量为3kd的中空纤维膜进行超滤。
本发明中在五指毛桃培养基培养时加入富微溶液，而且富微溶液中钙元素、镁元素、铁元素和锰元素的含量配比根据五指毛桃本身含有的微量元素、生长习性及对微量元素的富集能力研究探索获得，加入的微量元素相互促进，相互补充，提高五指毛桃对加入的各微量元素的吸收，提高五指毛桃微量元素含量，有利于提高药效。
在本发明提供的三酶一酵制备富微五指毛桃小分子多糖的过程中，先经过唾液淀粉酶酶解，先分解淀粉等，以免影响胃蛋白酶及木瓜蛋白酶对富微五指毛桃中多糖等的酶解，而且，先利用唾液淀粉酶酶解为小分子物质后，促进后续酶解效率，提高得糖率。然后控制胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的酶解温度、ph环境及酶解时间等，提高酶解效率。经过3次酶解后进行乳酸菌发酵，进一步分解为小分子多糖，使制备的富微五指毛桃小分子多糖分子量更小，溶解度更高，更容易被人以吸收。然后经过分离，超临界co2萃取，超滤，得到的产品小分子多糖获得率高，小分子多糖含量高。
与现有技术相比，本发明采用仿生酶解的方法，依次利用唾液淀粉酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解，最后利用乳酸菌发酵。经过三次酶解和一次发酵，使富微五指毛桃酶解完全，得到的富微五指毛桃小分子多糖分子更小，产量更多，更有利于人体吸收，发挥其作用。
具体实施方式
实施例1
种植富微五指毛桃：
在五指毛桃的种植过程中，每20天向根部喷施em富微溶液。每次每棵em富微溶液的喷施量是0.5-0.8l。
所述em富微溶液的制备方法为：
将钙盐cacl2、镁盐mgcl2、铁盐fecl3和锰盐mnso4与em原液稀释液混合，搅拌混匀后在25℃温度下发酵18天得em富微溶液，巴氏灭菌后备用。其中钙盐、镁盐、铁盐和锰盐与em原液稀释液的质量比为20:2:1:12:15。em原液稀释液是指将em原液稀释7倍。
三酶一酵富微五指毛桃小分子多糖的生产方法，包括以下步骤：
1)将上述种植得到的富微五指毛桃干燥，粉碎，过100目筛，加5倍量的水混匀，调节ph至7，加入富微五指毛桃质量0.6％的唾液淀粉酶，于37.5℃保温条件下进行酶解反应2h；
2)然后调节ph至1.5，加入富微五指毛桃质量0.8％的胃蛋白酶，于37℃保温条件下进行酶解反应3.5h；
3)然后调节ph至8.0，加入富微五指毛桃质量1％的木瓜蛋白酶，于38℃保温条件下进行酶解反应5h；
4)向步骤3)制得的体系中加入富微五指毛桃质量0.8％的乳酸菌，35℃发酵30h发酵后，在10000r/min条件下离心10min，分离后滤液减压浓缩，然后浓缩液经过超临界co2萃取，萃取条件为：压力为30mpa，萃取温度是40℃，静态萃取时间2h；动态萃取温度为40℃，萃取时间为5h；萃取压力为30mpa；i级分离釜压力10mpa，ⅱ级分离釜压力7mpa。
5)萃取液用截留相对分子质量为3kd的中空纤维膜进行超滤，减压浓缩，干燥，即得富微五指毛桃小分子多糖。
检测制备的富微五指毛桃小分子多糖分子量更小，更容易被吸收，提取率比现有的单一酶解高18.5％。
实施例2
种植富微五指毛桃：
在五指毛桃的种植过程中，每25天向根部喷施em富微溶液。每次每棵em富微溶液的喷施量是0.8-1l。
所述em富微溶液的制备方法为：
将钙盐cacl2、镁盐mgcl2、铁盐fecl3和锰盐mnso4与em原液稀释液混合，搅拌混匀后在28℃温度下发酵13天得em富微溶液，巴氏灭菌后备用。其中钙盐、镁盐、铁盐和锰盐与em原液稀释液的质量比为25:1.5:1:14:20。em原液稀释液是指将em原液稀释5倍。
三酶一酵富微五指毛桃小分子多糖的生产方法，包括以下步骤：
1)将上述种植得到的富微五指毛桃干燥，粉碎，过80目筛，加8倍量的水混匀，调节ph至7，加入富微五指毛桃质量1％的唾液淀粉酶，于37.5℃保温条件下进行酶解反应3h；
2)然后调节ph至2，加入富微五指毛桃质量2％的胃蛋白酶，于37℃保温条件下进行酶解反应4h；
3)然后调节ph至7.5，加入富微五指毛桃质量3％的木瓜蛋白酶，于37.5℃保温条件下进行酶解反应5h；
4)向步骤3)制得的体系中加入富微五指毛桃质量1.5％的乳酸菌，35℃发酵30h发酵后，在10000r/min条件下离心20min，分离后滤液减压浓缩，然后浓缩液经过超临界co2萃取，萃取条件为：压力为40mpa，萃取温度是45℃，静态萃取时间2h；动态萃取温度为45℃，萃取时间为6h；萃取压力为20mpa；i级分离釜压力10mpa，ⅱ级分离釜压力6mpa。
5)萃取液用截留相对分子质量为3kd的中空纤维膜进行超滤，减压浓缩，干燥，即得富微五指毛桃小分子多糖。
检测制备的富微五指毛桃小分子多糖分子量更小，更容易被吸收，提取率比现有的单一酶解高20.4％。