本发明涉及分子生物学和医学领域，具体涉及指导高血压用药相关性SNP位点的检测组合物、试剂盒和检测方法。
背景技术：
：目前临床常用的抗高血压药物有5大类：利尿剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、β受体阻滞剂、钙离子拮抗剂。药物在体内代谢过程中涉及到多种药物代谢酶、转运体和受体，它们存在的基因多态性最终导致了患者以相同方式服用同种药物时，其治疗效果、产生的不良发展及其对药物的耐受性等方面存在明显的个体差异。目前，基于药物基因学组的高血压研究主要关注基因的多样性与药物降压疗效的关系，不同人种、年龄、性别以及饮食和生活环境造成的基因差异对药物降压疗效的影响等，较少关注基因突变对药物降压后远期影响。未来高血压药物基因学组研究应是多学科，包括分子生物学、临床医学、遗传学、数学、社会学等共同协作的系统研究工程，不但关注基因与生理、病理之间的关系，还要关注基因与环境、人文、社会之间的关系，为最终高血压等疾病预防和治疗提供依据。由于不同个体的遗传差异、人种、年龄、性别及饮食和生活环境等各种因素的相互作用，使不同个体和群体对于高血压的易感性和降压药物的反应在性别、种族和年龄方面也呈现出不同的效应。对于高血压的治疗应是防治并举。随着基因防治时代的来临，通过基因测试，对于不同的易感人群进行不同个体的早期预防，通过基因测试和综合因素的评估，为其提供适宜的个体化治疗，使其用药达到安全、有效、经济。技术实现要素：为克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种指导高血压用药的检测组合物，包括分别检测CYP2C9*3基因、CYP2D6基因、CYP3A5*3基因、ADRB1基因、AGTR1基因、ACE基因和NPPA基因多态性的试剂。更进一步地，检测的是CYP2C9*3基因的rs1057910位点、CYP2D6基因的rs1065852位点、CYP3A5*3基因的rs776746位点、ADRB1基因的rs1801253位点、AGTR1基因的rs5186位点、ACE基因的rs4646994位点和NPPA基因的rs5065位点的多态性。检测上述基因多态性的试剂可以根据不同的检测原理和方法选择不同的试剂作为检测组合物。其中一种类型的检测组合物的试剂包括基于上述基因多态性位点而设计的扩增引物和探针，探针是分别针对基因多态性位点设计的野生型和突变型的两条探针。将所述检测组合物应用于指导高血压用药的检测试剂盒，其中组合物包括检测CYP2C9*3基因多态性、CYP2D6基因、CYP3A5*3基因、ADRB1基因、AGTR1基因、ACE基因和NPPA基因多态性的试剂。本发明还提供了操作便捷的指导高血压用药的检测试剂盒，包括分别检测CYP2C9*3基因多态性、CYP2D6基因、CYP3A5*3基因、ADRB1基因、AGTR1基因、ACE基因和NPPA基因多态性的试剂。上述提到的扩增引物和探针，分别选自：扩增CYP2C9*3(rs1057910)的引物和探针序列：CYP2C9*3(rs1057910)上游引物：ATTTAATGTCACAGGTCACTGC(SEQNO1)CYP2C9*3(rs1057910)下游引物：CACATGCCCTACACAGAT(SEQNO2)探针1：AGATACATTGACCTT(SEQNO16)探针2：AGATACCTTGACCTT(SEQNO17)扩增CYP2D6(rs1065852)的引物和探针序列：CYP2D6(rs1065852)上游引物：TGCTCCTGGTGGACCTGA(SEQNO3)CYP2D6(rs1065852)下游引物：AGTCCACATGCAGCAGGT(SEQNO4)探针3：CGCTACTCACCAG(SEQNO18)探针4：CGCTACCCACCAG(SEQNO19)扩增CYP3A5*3(rs776746)的引物和探针序列：CYP3A5*3(rs776746)上游引物：AGCTTAACGAATGCTCTAC(SEQNO5)CYP3A5*3(rs776746)下游引物：AGCAAGAGTCTCACACAGG(SEQNO6)探针5：CTTTCAATATCTCTT(SEQNO20)探针6：CTTTCAGTATCTCTT(SEQNO21)扩增ADRB1(rs1801253)的引物和探针序列：ADRB1(rs1801253)上游引物：CCTTCAACCCCATCATCT(SEQNO7)ADRB1(rs1801253)下游引物：GGTCTCCGTGGGTCGCG(SEQNO8)探针7：TTCCAGGGACTGC(SEQNO22)探针8：TTCCAGCGACTGC(SEQNO23)扩增AGTR1(rs5186)的引物和探针序列：AGTR1(rs5186)上游引物：CATTCCTCTGCAGCACTTCACT(SEQNO9)AGTR1(rs5186)下游引物：CGGTTCAGTCCACATAATGCAT(SEQNO10)探针9：AATGAGCATTAGCTAC(SEQNO24)探针10：AATGAGCCTTAGCTAC(SEQNO25)扩增ACE(rs4646994)的引物和探针序列：ACE(rs4646994)上游引物：TTTCTCCCATTTCTCTAGACCT(SEQNO11)ACE(rs4646994)下游引物1：ATCCCGCCACTGCACT(SEQNO12)ACE(rs4646994)下游引物2：TCAGAGAATTTCAGAGCTG(SEQNO13)探针11：CGCTCTGTCGCCCAGGC(SEQNO26)探针12：CTATACAGTCACTTTTATGTGGTTT(SEQNO27)扩增NPPA(rs5065)的引物和探针序列：NPPA(rs5065)上游引物：CCAGCCCTGCTTGT(SEQNO14)NPPA(rs5065)下游引物：AGGATGGGCACACTCAT(SEQNO15)。探针13：TTATCTTCAGTACTG(SEQNO28)探针14：TTATCTTCGGTACTG(SEQNO29)。本发明还提供了一种指导高血压用药的检测方法，包括以下步骤：(a)提取样品中的基因组DNA；(b)扩增并检测CYP2C9*3基因rs1057910位点的多态性、CYP2D6基因rs1065852位点的多态性、CYP3A5*3基因rs776746位点的多态性、ADRB1基因rs1801253位点的多态性、AGTR1基因rs5186位点的多态性、ACE基因rs4646994位点的多态性、NPPA基因rs5065位点的多态性。本发明所述的高血压用药包括了利尿剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、β受体阻滞剂和钙离子拮抗剂。本发明的技术方案具有以下优点：本发明囊括了与五大类高血压药物相关的基因多态性位点的分析，通过7位点多态性的检测和分析，能有效指导主流抗高血压药物(五大类药物分别是利尿剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、β受体阻滞剂、钙离子拮抗剂)的临床使用，较市面上的同类产品，覆盖的类型更广。并且检测时采用特异性高的野生型探针和突变型探针的双探针设计，避免使用目前荧光定量PCR检测需要的内参引物和探针。这不但增强了检测的特异性，还减少操作误差和降低检测成本。采用Taqman探针后不仅极大提升检测特异性，还有效的将检测时间由原来的2.5-3小时缩短为1个小时左右，从而大大提高了检测结果的准确性和检测效率。附图说明图1ADRB1(rs1801253)野生型(GG)的一代测序结果。图2ADRB1(rs1801253)野生型(GG)的本发明实施例的分型结果。图3ADRB1(rs1801253)突变杂合子(GC)的一代测序结果。图4ADRB1(rs1801253)突变杂合子(GC)的本发明实施例的分型结果。图5ADRB1(rs1801253)突变纯合子(CC)的一代测序结果。图6ADRB1(rs1801253)突变纯合子(CC)的本发明实施例的分型结果。具体实施方式发明人通过分析临床上高血压病人常用药物的使用和代谢及药效的个体差异，筛选出与五大类抗高血压药物密切相关基因的7个多态性位点，并制备出检测该7个多态性位点的组合物和使用该组合物的检测试剂盒，并建立准确的检测方法用以对五大类抗高血压药物实现有效的用药指导。所述的五大类抗高血压药物是利尿剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、β受体阻滞剂、钙离子拮抗剂。所述的针对五大类抗高血压药物的7个多态性位点(具体RS号)，分别为CYP2C9*3(rs1057910)、CYP2D6(rs1065852)、CYP3A5*3(rs776746)、ADRB1(rs1801253)、AGTR1(rs5186)、ACE(rs4646994)和NPPA(rs5065)。所述7位点基因型的突变个体其高血压用药疗效和风险有别于普通人群。CYP2C9*3基因的rs1057910位点、CYP2D6基因的rs1065852位点、CYP3A5*3基因的rs776746位点、ADRB1基因的rs1801253位点、AGTR1基因的rs5186位点、ACE基因的rs4646994位点和NPPA基因的rs5065位点可以分别表述为CYP2C9*3(rs1057910)、CYP2D6(rs1065852)、CYP3A5*3(rs776746)、ADRB1(rs1801253)、AGTR1(rs5186)、ACE(rs4646994)和NPPA(rs5065)。实施例1利用荧光定量PCR检测体系的检测试剂盒检测试剂盒包括扩增引物、探针，以及进行荧光定量PCR检测的其他配套试剂。扩增引物和探针是针对CYP2C9*3(rs1057910)、CYP2D6(rs1065852)、CYP3A5*3(rs776746)、ADRB1(rs1801253)、AGTR1(rs5186)、ACE(rs4646994)和NPPA(rs5065)7个多态性位点设计。一、扩增引物的设计与合成基于CYP2C9*3基因中的rs1057910位点的区域、CYP2D6基因中的rs1065852位点的区域、CYP3A5*3基因中的rs776746位点的区域、ADRB1基因中的rs1801253位点的区域、AGTR1基因中的rs5186位点的区域、ACE基因的中rs4646994位点的区域、NPPA基因的中rs5065位点的区域，设计出扩增引物，其中，扩增CYP2C9*3(rs1057910)的引物序列：CYP2C9*3(rs1057910)上游引物：ATTTAATGTCACAGGTCACTGC(SEQNO1)CYP2C9*3(rs1057910)下游引物：CACATGCCCTACACAGAT(SEQNO2)扩增CYP2D6(rs1065852)的引物序列：CYP2D6(rs1065852)上游引物：TGCTCCTGGTGGACCTGA(SEQNO3)CYP2D6(rs1065852)下游引物：AGTCCACATGCAGCAGGT(SEQNO4)扩增CYP3A5*3(rs776746)的引物序列：CYP3A5*3(rs776746)上游引物：AGCTTAACGAATGCTCTAC(SEQNO5)CYP3A5*3(rs776746)下游引物：AGCAAGAGTCTCACACAGG(SEQNO6)扩增ADRB1(rs1801253)的引物序列：ADRB1(rs1801253)上游引物：CCTTCAACCCCATCATCT(SEQNO7)ADRB1(rs1801253)下游引物：GGTCTCCGTGGGTCGCG(SEQNO8)扩增AGTR1(rs5186)的引物序列：AGTR1(rs5186)上游引物：CATTCCTCTGCAGCACTTCACT(SEQNO9)AGTR1(rs5186)下游引物：CGGTTCAGTCCACATAATGCAT(SEQNO10)扩增ACE(rs4646994)的引物序列：ACE(rs4646994)上游引物：TTTCTCCCATTTCTCTAGACCT(SEQNO11)ACE(rs4646994)下游引物1：ATCCCGCCACTGCACT(SEQNO12)ACE(rs4646994)下游引物2：TCAGAGAATTTCAGAGCTG(SEQNO13)扩增NPPA(rs5065)的引物序列：NPPA(rs5065)上游引物：CCAGCCCTGCTTGT(SEQNO14)NPPA(rs5065)下游引物：AGGATGGGCACACTCAT(SEQNO15)由于ACE(rs4646994)的多态性为非单点突变，而是插入/缺失突变，为了保证扩增的有效性，本发明设计了一个上游引物和两个下游引物。实验表明利用SEQNO.11至13的引物和SEQNO.26至27探针能检测出所有ACE(rs4646994)的多态性，扩增效率高，有很好的特异性和准确性。相比于电泳法检测ACE基因，本发明能在缩短一半的时间内可以实现ACE基因的检测，即降低污染风险，又提高效率。二、探针的设计与合成基于CYP2C9*3(rs1057910)、CYP2D6(rs1065852)、CYP3A5*3(rs776746)、ADRB1(rs1801253)、AGTR1(rs5186)、ACE(rs4646994)和NPPA(rs5065)位点基因多态性的特点，设计出用于荧光定量PCR分析的高特异性探针，并且所述探针是分别针对基因多态性位点设计的野生型和突变型的两条探针。其中，检测CYP2C9*3(rs1057910)多态性的探针序列包括：探针1：AGATACATTGACCTT(SEQNO16)探针2：AGATACCTTGACCTT(SEQNO17)检测CYP2D6(rs1065852)多态性的探针序列包括：探针3：CGCTACTCACCAG(SEQNO18)探针4：CGCTACCCACCAG(SEQNO19)检测CYP3A5*3(rs776746)多态性的探针序列包括：探针5：CTTTCAATATCTCTT(SEQNO20)探针6：CTTTCAGTATCTCTT(SEQNO21)检测ADRB1(rs1801253)多态性的探针序列包括：探针7：TTCCAGGGACTGC(SEQNO22)探针8：TTCCAGCGACTGC(SEQNO23)检测AGTR1(rs5186)多态性的探针序列包括：探针9：AATGAGCATTAGCTAC(SEQNO24)探针10：AATGAGCCTTAGCTAC(SEQNO25)检测ACE(rs4646994)多态性的探针序列包括：探针11：CGCTCTGTCGCCCAGGC(SEQNO26)探针12：CTATACAGTCACTTTTATGTGGTTT(SEQNO27)检测NPPA(rs5065)多态性的探针序列包括：探针13：TTATCTTCAGTACTG(SEQNO28)探针14：TTATCTTCGGTACTG(SEQNO29)。在一个实施例中，所述探针为TaqMan探针，每条探针的5’端为荧光报告基团，3’端为淬灭基团。其中荧光报告基团可选自FAM、TET、VIC、JOE、HEX、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、TAMRA、ROX、TexasRed、LCRED640和LCRED705等；淬灭基团可选自MGB、BHQ0、BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl、Eclipse和NFQ等。三、PCR扩增反应试剂PCR扩增反应试剂包括上述扩增引物和探针，还包括PCR扩增反应体系所需要的其他配套试剂。所述其他配套试剂包括PCRBuffer、Mg2+、dNTP、Taq酶。在更优的方案中，其他配套试剂还包括DMSO和ROX。关于ROX的选择，根据实验使用的荧光定量PCR仪器以及实验的需要而定，并非所有的仪器或实验都需要加入ROX。ROX的选择是为了校正背景信号，因此，但凡具有其他背景信号校正功能或试剂，或者实验设计无需校正背景信号的情况，均可不使用ROX进行背景信号校正。在一个具体的PCR扩增反应实施例，使用表1所述的试剂和用量进行荧光定量PCR检测：表1：组分用量10×buffer(Mg2+)2μlMgCl2(25mM)0-5μldNTP(10mM)0.2-1μlrTaq酶(5U/ul)0.1-0.5μl上游引物(10uM)0.2-1μl下游引物(10uM)0.2-1μl探针1或3或5或7或9或11或13(10uM)0.2-1μl探针2或4或6或8或10或12或14(10uM)0.2-1μlDMSO0-2μlROX0.05-1μlTemplate1μl基因组DNAddH2O加样至20ul在一个优选的实施例中，所述MgCl2(25mM)用量为3μl，所述dNTP(10mM)用量为0.5μl，所述rTaq酶(5U/ul)用量为0.1μl，所述上游引物(10uM)用量为0.5μl，所述下游引物(10uM)用量为0.5μl，所述探针1或3或5或7或9或11或13(10uM)用量为0.5μl，所述探针2或4或6或8或10或12或14(10uM)(10uM)用量为0.5μl，所述DMSO用量为0.5μl，所述ROX用量为0.1μl。在荧光定量PCR检测体系中，指导高血压用药的检测组合物中的试剂包括所述引物和探针，用于检测CYP2C9*3基因、CYP2D6基因、CYP3A5*3基因、ADRB1基因、AGTR1基因、ACE基因和NPPA基因多态性。更进一步的，还可以包括PCR扩增反应体系所需要的其他配套试剂。实施例2荧光定量PCR检测方法检测所述7个多态性位点的荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：(a)提取样品中的基因组DNA；(b)扩增并检测CYP2C9*3基因中包含rs1057910位点的区域的基因多态性、CYP2D6基因中包含rs1065852位点的区域的基因多态性、CYP3A5*3基因中包含rs776746位点的区域的基因多态性、ADRB1基因中包含rs1801253位点的区域的基因多态性、AGTR1基因中包含rs5186位点的区域的基因多态性、ACE基因中包含rs4646994位点的区域的基因多态性、NPPA基因中包含rs5065位点的区域的基因多态性。基因组DNA的提取方法包括：传统的酚氯仿抽提、商品化的硅胶膜提取试剂盒、商品化的磁珠法提取试剂盒。所提取的基因组DNA只要满足以下条件即可：OD260/280为1.7～2.0；5ng/μl≤DNA浓度≤100ng/μl。其中，荧光定量PCR扩增反应条件如表2：表2实施例1和实施例2中采用无需内参基因检测的双探针检测体系，不包含内参基因检测的引物和探针。减少实验过程中的操作，避免过多的操作引起实验误差；同时，无需内参的体系还降低了实验成本。在另外的实施方案中，实施1所述的扩增引物、探针也适用于包含内参基因的检测体系。实施例3采用荧光定量PCR方法分析临床样本收集150例临床唾液样本和150例临床血液样本，利用商品化的磁珠法提取试剂盒进行基因组DNA的提取，然后利用实施例1和实施例2的方法进行7个基因的分型检测。同时，利用一代测序法对提取的DNA进行基因分型检测，并将本方法的基因分型结果与一代测序的基因分型结果进行对比。其中，CYP2C9*3(rs1057910)的对比测试结果如表3；CYP2D6(rs1065852)的对比测试结果如表4；CYP3A5*3(rs776746)的对比测试结果如表5；ADRB1(rs1801253)的对比测试结果如表6；AGTR1(rs5186)的对比测试结果如表7；ACE(rs4646994)的对比测试结果如表8；NPPA(rs5065)的对比测试结果如表9。表3：CYP2C9*3(rs1057910)的对比测试结果表4：CYP2D6(rs1065852)的对比测试结果表5：CYP3A5*3(rs776746)的对比测试结果表6：ADRB1(rs1801253)的对比测试结果表7：AGTR1(rs5186)的对比测试结果表8：ACE(rs4646994)的对比测试结果(I表示插入，D表示缺失)表9：NPPA(rs5065)的对比测试结果如图1至6是利用本发明所述方法测定ADRB1(rs1801253)基因的分型结果和一代测序的结果，通过两种方法的检测图谱对比分析，其结果完全一致。其中ADRB1(rs1801253)基因野生型(GG)的对比结果如图1和图2所示；ADRB1(rs1801253)基因突变杂合子(GC)的对比结果如图3和图4所示；ADRB1(rs1801253)基因突变纯合子(CC)的结果如图5和图6所示。同样的利用本发明所述方法测定CYP2C9*3(rs1057910)、CYP2D6(rs1065852)、CYP3A5*3(rs776746)、AGTR1(rs5186)、ACE(rs4646994)和NPPA(rs5065)基因的分型检测图谱与一代测序的检测图谱对比，结果也是完全一致的。对于荧光定量PCR分型实验而言，一般会采用内参基因来表明反应体系的正常性，从而确保分型结果是可信的。即：只有内参基因扩增正常的前提下，PCR分型结果才是有效的。因此，内参基因的使用是一般PCR分型必不可少的设计。本发明采用双探针体系的设计，不但能够在一个反应管中完成全部分型测试，同时还免去了内参基因的使用，利用检测基因本身即可判断PCR分型结果是否有效。判断的方法为：当只出现野生型的荧光信号时，表明样本为野生型。当只出现突变型的荧光信号时，表明样本为纯合突变型。当同时出现野生型和突变型信号时，表明样本为杂合突变型。当没有任何荧光信号出现时，则表明该次检测失败。因此，本方法不但可以减少实验操作，还降低实验成本。实施例4荧光定量PCR双探针体系的特异性双探针体系成功的关键在于探针的特异性。本发明通过对大量目的基因序列进行比对，选择包括rs区域同时具有较高保守性的区域进行引物设计，然后选择特异性碱基去分别设计针对野生型和突变型的TaqMan探针，分别标记荧光基团，例如野生型的标记FAM荧光基团和突变型的标记VIC荧光基团。本发明所设计的探针，其具有极高的特异性，不但能够在双探针体系中起到很好的分型作用，同时还可以将Ct值控制在33以内。目前商品化的产品中，对于荧光定量PCR分型的试剂，不但使用操作复杂且成本昂贵的单探针体系，同时其Ct值一般也只能控制在35以内。因此，本发明的双探针体系相比于现有的检测体系，具有很好的特异性，能够实现高效分型。实施例5荧光定量PCR检测体系的高灵敏度PCR检测体系的灵敏度，主要表征该体系对于扩增起始模板量的要求，灵敏度越高，表明该PCR体系在较低的模板(本发明中指基因组DNA)就可以获得扩增信号。一般而言，商品化的产品中，其对于基因组DNA的起始量要求控制在10ng及以上，而本发明则可以将基因组DNA的起始量降低至5ng。利用实施例1和2的方法对模板量为5ng基因组DNA进行检测，同时作为对照，以一代测序法对同一样本的基因组DNA进行检测，对比实验表明，当基因组DNA的模板量为5ng时，其检测结果与一代测序结果一致。因此本发明所述引物、探针和检测方法对于一些微量样本(如血清/血浆DNA)中的检测是非常有利。实施例6高血压五大类药物的精准用药指导对高血压精准用药指导进行分析后发现，目前的商品化产品中，主要通过五个位点来对三大类药物的用药进行指导，这三大类药物包括血管紧张素II受体阻断药(如氯沙坦、伊贝沙坦等)、β1肾上腺素受体阻滞剂(如美托洛尔、卡维地洛等)、血管紧张素转换酶抑制剂(如内那普利、福辛普利等)。然而，在国家卫计委颁布的《高血压用药指南》中明确指出，除了上述三大类抗高血压药物外，还有两大类抗高血压药物为主流药物，分别是利尿剂和钙离子拮抗剂。通过多方面的研究和分析，本发明创造性地设计出通过7位点(包括CYP2C9*3(rs1057910)、CYP2D6(rs1065852)、CYP3A5*3(rs776746)、ADRB1(rs1801253)、AGTR1(rs5186)、ACE(rs4646994)和NPPA(rs5065))的检测和分析，可指导高血压五大类主流药物的精准用药。这不但能够全面覆盖高血压的五大类主流药物，同时还能对高血压联合用药起到指导作用。本发明的7位点指导五大类高血压药物的具体情况如表10至表14：(1)利尿剂表10NPPA(rs5065)表型预期疗效预期不良反应TT利尿剂药物敏感度活性属正常水平+TC利尿剂药物敏感度活性水平略高++CC利尿剂药物敏感度活性水平较高++++(2)血管紧张素抑制剂转化酶表11(3)血管紧张素II受体阻断药表12(4)β1肾上腺素受体阻滞剂表13(5)钙离子拮抗剂表14实施例7高血压五大类药物精准用药的其他检测方法通过实验分析，分别针对荧光定量PCR非双探针体系、一代测序法、焦磷酸测序、PCR-HRM、arms-PCR、限制性片段长度多态性方、原位杂交(ISH)、基因芯片或高通量测序等方法分别制备出指导高血压用药的检测组合物，组合物中的试剂包括对应方法所需要的试剂。这些试剂用于分析CYP2C9*3基因、CYP2D6基因、CYP3A5*3基因、ADRB1基因、AGTR1基因、ACE基因和NPPA基因多态性，获得的检测结果能为高血压的用药指导提供参考信息。序列表<110>杭州百迈生物股份有限公司<120>检测ACE基因多态性的引物、探针及应用、试剂盒和检测方法<130>2018001<160>29<170>SIPOSequenceListing1.0<210>1<211>22<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>1atttaatgtcacaggtcactgc22<210>2<211>18<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>2cacatgccctacacagat18<210>3<211>18<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>3tgctcctggtggacctga18<210>4<211>18<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>4agtccacatgcagcaggt18<210>5<211>19<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>5agcttaacgaatgctctac19<210>6<211>19<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>6agcaagagtctcacacagg19<210>7<211>18<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>7ccttcaaccccatcatct18<210>8<211>17<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>8ggtctccgtgggtcgcg17<210>9<211>22<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>9cattcctctgcagcacttcact22<210>10<211>22<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>10cggttcagtccacataatgcat22<210>11<211>22<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>11tttctcccatttctctagacct22<210>12<211>16<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>12atcccgccactgcact16<210>13<211>19<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>13tcagagaatttcagagctg19<210>14<211>14<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>14ccagccctgcttgt14<210>15<211>17<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>15aggatgggcacactcat17<210>16<211>15<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>16agatacattgacctt15<210>17<211>15<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>17agataccttgacctt15<210>18<211>13<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>18cgctactcaccag13<210>19<211>13<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>19cgctacccaccag13<210>20<211>15<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>20ctttcaatatctctt15<210>21<211>15<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>21ctttcagtatctctt15<210>22<211>13<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>22ttccagggactgc13<210>23<211>13<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>23ttccagcgactgc13<210>24<211>16<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>24aatgagcattagctac16<210>25<211>16<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>25aatgagccttagctac16<210>26<211>17<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>26cgctctgtcgcccaggc17<210>27<211>25<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>27ctatacagtcacttttatgtggttt25<210>28<211>15<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>28ttatcttcagtactg15<210>29<211>15<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>29ttatcttcggtactg15当前第1页1 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