本发明涉及医药领域，具体涉及一类含有氰基喹啉的衍生物、其药学上可接受的盐、其合成方法及其在医药上的应用。
背景技术：
免疫检查点抑制剂(immunecheckpointinhibitors)和嵌合抗原受体t细胞(car-tcell)疗法在临床上的成功显示出肿瘤免疫疗法具有高效、安全的优势(schadendorfd.etal.j.clin.oncol.,2015,33:1889-1894；yangy.j.clin.invest.,2015,125:3335-3337)。然而对于该类生物药物而言，其在临床上应用仍存在一定缺陷，包括应答率低、不能采用口服疗法、价格昂贵(mullarda.nat.rev.drugdiscov.,2015,14:739；kreamerkm,etal.jadvpractoncol,2014,5:418-431)等。因此，研发用于免疫检查点治疗的小分子药物，对大分子生物药物的临床应用可以起到补充和潜在的协同作用。
色氨酸(trp)是人体内蛋白质合成的一种必需氨基酸，95％以上的trp通过犬尿氨酸途径(kynureninepathway,kp)代谢，最终被代谢为犬尿喹啉酸(kynurenicacid)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)和黄尿酸(xanthurenicacid)等活性代谢产物，从而对细胞生长产生一系列重要的生理作用(routyjp,routyb,grazianigm,etal.int.j.tryptophanres.,2016,9:67-77)。其中，吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine2,3-dioxygenase1,ido1)是肝脏外调控色氨酸分解代谢kp通路的第一限速酶(melloral,etal.natrevimmunol,2004,4:762-774)。ido1是一种包含亚铁血红素的单体蛋白，由403个氨基酸残基组成，包括两个折叠的α-螺旋结构域，大结构域包含催化口袋，底物可在催化口袋中与ido1发生疏水等作用(rohriguf,etal.j.med.chem.,2015,58:9421)。正常情况下ido1在体内呈低水平表达，当干扰素(ifn-α,、ifn-β和ifn-γ)、白介素(il-1和il-2)、肿瘤坏死因子(tnf)等多种细胞因子诱导ido1水平升高时，色氨酸将被大量代谢，从而抑制人体对寄生性、病毒性、细菌性、真菌性等病原体的免疫应答，人体将处于病态的免疫抑制状态(banzola,i.etal.front.immunol.,2018,9:1051)。ido1主要通过两个方面介导免疫抑制：一方面，ido1使局部trp耗竭，造成t细胞周期阻滞；另一方面，trp的分解能造成代谢产物(如犬尿氨酸，kyn)的过度积累，激活芳基烃受体(ahr)等，进一步激活调节t细胞(tregcell)进而抑制效应t细胞(munndh,etal.jexpmed,1999,189:1363-1372；mezrichjd,etal.jimmunol,2010,185:3190-3198)。
研究表明，ido1在许多肿瘤中高表达，另外，ido1又往往与预后不良相关联(okamotoa,etal.clincancerres,2005,11:6030-6039)。事实上，抑制ido1的活性对于肿瘤治疗有着显著的促进作用，目前ido1抑制剂在临床上与pd-1、pd-l1抑制剂联用以提高疗效(marin-acevedoja,etal.j.hematol.oncol.,2018,11:39)。
公开的选择性ido1抑制剂专利申请包括wo2010005958，wo2015173764，wo2016155545，wo2016073770和wo2018184392等。
ido1抑制剂作为药物在医药行业具有良好的应用前景，但是目前尚未找到很好的ido1抑制剂作为上市药物。为了达到更好的肿瘤治疗效果，我们希望开发新一代高效低毒的选择性ido1抑制剂，表现出优异的效果与作用，优良的药代吸收活性。
技术实现要素：
本发明旨在寻找结构新颖、活性高、副作用小以及具有良好药物代谢性质的抗肿瘤候选化合物。这些化合物通过单用或与其它抗肿瘤药物联用，从而达到提高现有抗肿瘤药物疗效并降低剂量和毒性的作用。
本发明公开了通式i的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐。
其中：
r1选自氢原子、氰基、氨基、硝基、卤素、c1～c4烷氧基、取代或未取代的c1～c5烷基；其中取代的c1～c5烷基中，取代基选自卤素、氨基、硝基、羟基或氰基中的一个或多个；
r2选自氢原子、氰基、氨基、硝基、卤素、c1～c4烷氧基、取代或未取代的c1～c5烷基、取代或未取代的芳基；其中取代的c1～c5烷基中，取代基选自卤素、氨基、硝基、羟基或氰基中的一个或多个；
n选自1、2、3、4。
在本发明的一个优选实施方案中，其中：
r1选自氢原子、氟原子、氯原子、溴原子、甲氧基、甲基；
r2选自氢原子、氟原子、氯原子、溴原子、苯基；
n代表1、2。
本发明所述的通式(i)的化合物的药学上可接受的盐，是指通式(i)的化合物与药学上可接受的酸形成的酸加成盐，所述酸包括：氯化氢、溴化氢、硫酸、碳酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或阿魏酸。
本发明优选的部分化合物如下表1：
表1优选化合物
本发明的另一目的在于提供通式(i)所示化合物的制备方法：
其中：r1，r2，n的定义同上所述。
由化合物ii制备化合物iv的过程，通过巯基酸iii与化合物ii中的氯原子经亲核取代反应得到；亲核取代反应所用缚酸剂为碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠或三乙胺，优选碳酸钾；所用溶剂为四氢呋喃、二氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜，优选二甲基亚砜。
由化合物iv制备化合物i的过程，通过取代苯胺v与羧基进行脱水缩合得到；所用缩合剂为二环己基碳二亚胺(dcc)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edci)、n,n'-二异丙基碳二亚胺(dic)，优选edci；催化剂或活化剂为4-二甲氨基吡啶(dmap)、1-羟基苯并三唑(hobt)，优选hobt；溶剂为二氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜，优选n,n-二甲基甲酰胺。
更具体的方法包括：
其中：r1，r2，n的定义同上所述。
由化合物vi制备化合物vii的过程，反应试剂为三氯氧磷、n,n-二甲基甲酰胺。
由化合物vii制备化合物ii的过程，反应试剂为氨水，氧化剂为碘或四醋酸铅或氧气，溶剂为四氢呋喃。
化合物ii制备化合物iv的过程，反应物为巯基酸iii，缚酸剂为碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠或三乙胺，溶剂为四氢呋喃、二氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜。
由化合物iv制备化合物i的过程，反应物为取代苯胺v，缩合剂为dcc、edci、dic，催化剂或活化剂为dmap、hobt，溶剂为二氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜。
所述通式i化合物的药学上可接受的盐可通过与等化学当量或过量酸(无机酸或有机酸)在合适的溶剂或溶剂组合物中反应制得。所述酸包括但不限于氯化氢、溴化氢、硫酸、碳酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或阿魏酸。所述溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、甲苯或四氢呋喃，或任意几种混合溶剂。
本发明提供了一种药物组合物，其包括药物有效量的活性组分和药学上可接受的辅料；所述活性组分包括通式i化合物和药学上可接受的盐中的一种或多种。所述药物组合物中，所述辅料包括药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。
根据治疗目的可将药物组合物制成各种类型的给药单位剂型，如片剂、丸剂、粉剂、液体、悬浮液、乳液、颗粒剂、颗粒剂、胶囊和针剂(溶液或悬浮液)等，优选片剂、胶囊、液体、悬浮液和针剂(溶液或悬浮液)。
本发明所述化合物在临床上的给药方式可采用口服、注射等方式。
一般地，本发明的化合物用于治疗时，人用剂量范围为1-1000mg/天。也可根据剂型的不同和疾病严重程度，使用剂量超出该范围。
本发明还提供通式i所示化合物在制备吲哚胺2,3-双加氧酶1抑制剂中的应用。
本发明还提供通式i所示化合物在用于治疗吲哚胺2,3-双加氧酶1介导的免疫抑制的相关疾病中的应用。
本发明所述的吲哚胺2,3-双加氧酶1介导的免疫抑制的相关疾病包括癌症、病毒感染、神经变性疾病、白内障、器官移植排斥、抑郁症或自身免疫性疾病。其中癌症优选肺癌、黑色素瘤、头颈癌、肾细胞癌、尿路上皮癌。病毒感染优选hiv感染。神经变性疾病优选阿尔兹海默病。
除非另外说明，在说明书和权利要求中使用的以下术语具有下面讨论的含义：
术语“烷基”表示1-20个碳原子的饱和的脂烃基，包括直链和支链基团(本申请书中提到的数字范围，例如“1-5”，是指该基团，此时为烷基，可以含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，直至包括5个碳原子)。烷基可以是取代的或未取代的。当是取代的烷基时，该取代基优选是一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个取代基。
术语“烷氧基”表示–o–(未取代的烷基)和–o–(未取代的环烷基)。代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘，优选为氟、氯、溴。
术语“氨基”表示–nh2基团。
术语“硝基”表示–no2基团。
术语“羟基”表示–oh基团。
术语“氰基”表示–cn基团。
术语“芳基”表示1至12个碳原子的全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子系统。芳基的非限制性实例有苯基、萘基和蒽基。芳基可以是取代的或未取代的。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
实施例1
步骤1：2-氯-3-喹啉甲醛的(vii-1)制备
将dmf(9.1g,125mmol,2.5equiv)加入反应瓶中，冰浴下搅拌10min，逐滴加入pocl3(30.4g,200mmol,4equiv)并控制反应液温度不超过5℃，滴加完毕后冰浴下继续搅拌直至反应液完全凝固，加入乙酰苯胺(6.8g,50mmol,1equiv)并室温下搅拌10min后缓慢升温至75℃，反应3h。tlc检测反应完全后减压蒸除过量pocl3，粘稠液倒入冰水中用nahco3调节ph值至5-6，抽滤得vi-1(6.8g,收率71％)。hrmsm/z[m+h]+calculatedforc10h6clno:192.0211,found:192.0213.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.39(s,1h,–cho),9.01(s,1h,–arh),8.30(d,j＝8.2hz,1h,–arh),8.07–7.97(m,2h,–arh),7.77(t,j＝7.5hz,1h,–arh)ppm。
步骤2：2-氯喹啉-3-甲腈(ii-1)的制备
将vii-1(3.8g,20mmol,1equiv)溶解于thf中，加入25％的氨水(6.8ml,100mmol,5equiv)和i2(6.0g,24mmol,1.2equiv)，25℃下反应3h。tlc检测反应完全后将反应液倒入饱和na2s2o3水溶液中，有大量固体析出，抽滤得v-2(2.4g,收率63％)。hrmsm/z[m+h]+calculatedforc10h5cln2:189.0214,found:189.0222.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝9.28(s,1h,–arh),8.16(d,j＝8.3hz,1h,–arh),8.10-8.02(m,2h,–arh),7.83(t,j＝7.3hz,1h,–arh)ppm。
实施例2
步骤1：3-((3-氰基喹啉-2-基)硫代)丙酸(ii-1)的制备
将硫代乙醇酸(1.1g,12mmol,1.2equiv)溶解于dmso中，室温下搅拌10min，缓慢分批加入k2co3(6.9g,50mmol,5equiv)继续室温下搅拌30min，逐滴滴入ii-1(1.9g,10mmol,1equiv)的dmso稀释液后缓慢升温至60℃，反应3h。tlc检测反应完全后将反应液加入等体积水中，用盐酸调节ph值至1-2，有大量油状物析出，用乙酸乙酯萃取水相3次，水洗有机相2次，减压蒸除乙酸乙酯得粗品，重结晶得iv-1(2.1g,收率86％)。hrmsm/z[m+h]+calculatedforc12h8n2o2s:245.0379,found:245.0391.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝12.88(s,1h,–cooh),9.01(s,1h,–arh),8.02(d,j＝8.1hz,1h,–arh),7.95–7.87(m,2h,–arh),7.66(t,j＝7.1hz,1h,–arh),4.20(s,2h,–ch2–)ppm。
步骤2：2-((3-氰基喹啉-2-基)硫代)-n-苯基乙酰胺(cpu-q1)的制备
将iv-1(0.24g,1mmol,1equiv)、edci(0.25g,1.3mmol,1.3equiv)和hobt(0.04g,0.3mmol,0.3equiv)溶解于dmf中，不超过10℃下反应30min。加入苯胺(0.10g,1.1mmol,1.1equiv)后反应液颜色加深，室温下反应过夜。tlc检测反应完全后将反应液倒入水中，抽滤，滤饼柱层析得cpu-q1(180mg,收率56％)。m.p.226–228℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc18h13n3os:320.0852,found:320.0850.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.45(s,1h,–nh–),8.99(s,1h,–arh),8.00(d,j＝8.2hz,1h,–arh),7.88(s,2h,–arh),7.62(d,j＝8.0hz,3h,–arh),7.31(t,j＝7.8hz,2h,–arh),7.05(t,j＝7.3hz,1h,–arh),4.33(s,2h,–ch2–)ppm.13cnmr(75mhz,dmso-d6):δ＝165.83,157.22,147.64,144.14,138.99,133.64,128.88,128.76,127.35,127.05,123.75,123.38,119.13,115.65,104.41,35.08ppm。
实施例3
2-(3-氰基喹啉-2-基)硫基)-n-(4-氟苯基)乙酰胺(cpu-q2)的制备
以4-氟苯胺(0.11g,1.1mmol,1.1equiv)替代苯胺外，与化合物cpu-q1相同的方法(同实施例2，步骤2)合成化合物cpu-q2(120mg,收率36％)。m.p.250–252℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc18h12fn3os:338.0758,found:338.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.51(s,1h,–nh–),9.01(s,1h,–arh),8.01(d,j＝9.0hz,1h,–arh),7.93-7.85(m,2h,–arh),7.66–7.61(m,3h,–arh),7.16(t,j＝9.0hz,2h,–arh),4.32(s,2h,–ch2–)ppm。
实施例4
2-((3-氰基-6-甲基喹啉-2-基)硫基)-n-(4-氟苯基)乙酰胺(cpu-q3)的制备
以4-甲基乙酰苯胺代替乙酰苯胺、4-氟苯胺代替苯胺外，采用cpu-q1相同的制备方法合成化合物cpu-q3(130mg，收率38％)。m.p.247–250℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc19h14fn3os:352.0914,found:352.0910.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.46(s,1h,–nh–),8.89(s,1h,–arh),7.77(d,j＝6.0hz,3h,–arh),7.63–7.59(m,2h,–arh),7.14(t,j＝9.0hz,2h,–arh),4.29(s,2h,–ch2–),2.51(s,3h,–ch3)ppm。
实施例5
2-((3-氰基-8-甲基喹啉-2-基)硫基)-n-(4-氟苯基)乙酰胺(cpu-q4)的制备
以2-甲基乙酰苯胺代替乙酰苯胺、4-氟苯胺代替苯胺外，采用cpu-q1相同的制备方法合成化合物cpu-q4(121mg，收率35％)。m.p.243–246℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc19h14fn3os:352.4069,found:352.4064.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.43(s,1h,–nh–),8.95(s,1h,–arh),7.82(d,j＝6.0hz,1h,–arh),7.71(d,j＝6.0hz,1h,–arh),7.62-7.48(m,3h,–arh),7.14(t,j＝9.0hz,2h,–arh),4.31(s,2h,–ch2–),2.56(s,3h,–ch3)ppm.
实施例6
2-((3-氰基-6-氟喹啉-2-基)硫基)-n-(4-氟苯基)乙酰胺(cpu-q5)的制备
以4-氟乙酰苯胺代替乙酰苯胺、4-氟苯胺代替苯胺外，采用cpu-q1相同的制备方法合成化合物cpu-q5(142mg，收率40％)。m.p.218–220℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc18h11f2n3os:356.0664,found:356.0662.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.57(s,1h,-nh-),9.09(s,1h,–arh),8.11(d,j＝6.0hz,1h,–arh),7.69–7.54(m,2h,–arh),7.38–7.26(m,2h,–arh),7.15(t,j＝9.0hz,2h,–arh),4.35(s,2h,–ch2–)ppm。
实施例7
2-((3-氰基-6-甲氧基喹啉-2-基)硫基)-n-(4-氟苯基)乙酰胺(cpu-q6)的制备
以4-甲氧基乙酰苯胺代替乙酰苯胺、4-氟苯胺代替苯胺外，采用cpu-q1相同的制备方法合成化合物cpu-q6(126mg，收率33％)。m.p.232–235℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc19h14fn3o2s:368.0864,found:368.0863.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.44(s,1h,–nh–),8.85(s,1h,–arh),7.79(d,j＝9.0hz,1h,–arh),7.63–7.53(m,3h,–arh),7.40(d,j＝3.0hz,1h,–arh),7.14(t,j＝9.0hz,2h,–arh),4.27(s,2h,–ch2–),3.88(s,3h,–ch3)ppm。
实施例8
n-(3-氯苯基)-2-((3-氰基喹啉-2-基)硫代)乙酰胺(cpu-q7)的制备
以3-氯苯胺(0.14g,1.1mmol,1.1equiv)替代苯胺外，与化合物cpu-q1相同的方法(同实施例2，步骤2)合成化合物cpu-q7(170mg,收率48％)。m.p.>250℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc18h12cln3os:354.0462,found:354.0463.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝9.67(s,1h,–nh–),9.20(s,1h,–arh),8.11(d,j＝9.0hz,2h,–arh),7.97(t,j＝2.1hz,1h,–arh),7.88(t,j＝7.7hz,1h,–arh),7.72(s,2h,–ch2–),7.69–7.64(m,2h,–arh),7.38(t,j＝8.1hz,1h,–arh),7.15(d,j＝7.9hz,1h,–arh)ppm.13cnmr(75mhz,dmso-d6):δ＝163.94,159.26,148.27,147.08,140.54,132.71,131.29,130.94,130.03,129.19,127.71,125.85,125.69,124.59,122.98,120.30,119.20,95.28ppm。
实施例9
n-(3-溴苯基)-2-((3-氰基喹啉-2-基)硫代)乙酰胺(cpu-q8)的制备
以3-溴苯胺(0.19g,1.1mmol,1.1equiv)替代苯胺外，与化合物cpu-q1相同的方法(同实施例2，步骤2)合成化合物cpu-q8(160mg,收率40％)。m.p.190–192℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc18h12brn3os:397.9957,found:397.9954.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.63(s,1h,–nh–),9.01(s,1h,–arh),8.03–7.83(m,4h,–arh),7.64(t,j＝7.4hz,1h,–arh),7.53(d,j＝7.7hz,1h,–arh),7.32-7.24(m,2h,–arh),4.33(s,2h,–ch2–)ppm.13cnmr(75mhz,dmso-d6):δ＝166.30,157.10,147.62,144.20,140.56,133.69,130.82,128.91,127.31,127.10,126.00,123.77,121.56,121.42,117.86,115.63,104.37,35.06ppm。
实施例10
n-([1,1′-联苯基]-4-基)-2-((3-氰基喹啉-2-基)硫代)乙酰胺(cpu-q9)的制备
以4-氨基联苯(0.19g,1.1mmol,1.1equiv)替代苯胺外，与化合物cpu-q1相同的方法(同实施例2，步骤2)合成化合物cpu-q9(180mg,收率46％)。m.p.>250℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc24h17n3os:396.1165,found:396.1163.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.60(s,1h,–nh–),9.03(s,1h,–arh),8.02(d,j＝8.1hz,1h,–arh),7.90(s,2h,–arh),7.74–7.63(m,7h,–arh),7.44(t,j＝7.6hz,2h,–arh),7.33(t,j＝7.3hz,1h,–arh),4.36(s,2h,–ch2–)ppm.13cnmr(75mhz,dmso-d6):δ＝165.91,157.23,147.65,144.19,139.59,138.47,135.03,133.69,128.91,128.86,127.36,127.08,126.98,126.21,123.76,119.46,115.67,104.39,35.14ppm。
实施例11
3-((3-氰基喹啉-2-基)硫代)-n-苯基丙酰胺(cpu-q10)的制备
以3-巯基丙酸代替硫代乙醇酸外，采用cpu-q1相同的制备方法合成化合物cpu-q10(180mg，收率54％)。m.p.226–228℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc19h15n3os:334.1009,found:334.1004.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.01(s,1h,–nh–),9.00(s,1h,–arh),8.03-7.90(m,3h,–arh),7.69-7.58(m,3h,–arh),7.30(t,j＝7.7hz,2h,–arh),7.04(t,j＝7.6hz,1h,–arh),3.65(t,j＝6.9hz,2h,–s–ch2–),2.90(t,j＝6.9hz,2h,–ch2–c＝o–)ppm.13cnmr(75mhz,dmso-d6):δ＝169.24,157.56,147.82,144.15,139.01,133.56,128.85,128.68,127.64,126.98,123.71,123.12,118.97,115.74,104.93,35.44,25.30ppm。
实施例12
3-((3-氰基喹啉-2-基)硫代)-n-(4-氟苯基)丙酰胺(cpu-q11)的制备
以3-巯基丙酸代替硫代乙醇酸、4-氟苯胺代替苯胺外，采用cpu-q1相同的制备方法合成化合物cpu-q11(210mg，收率60％)。m.p.235–237℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc19h14fn3os:352.0914,found:352.0912.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.06(s,1h,–nh–),8.97(s,1h,–arh),8.03-7.90(m,3h,–arh),7.68–7.58(m,3h,–arh),7.13(t,j＝8.7hz,2h,–arh),3.65(t,j＝6.8hz,2h,–s–ch2–),2.89(t,j＝6.8hz,2h,–ch2–c＝o–)ppm.13cnmr(75mhz,dmso-d6):δ＝169.14,157.88(d,ar-f,j＝238.3hz),157.53,147.82,144.10,135.39(d,j＝2.3hz),133.54,128.83,127.63,126.97,123.71,120.74(d,j＝7.8hz),115.72,115.54(d,j＝22.0hz),104.93,35.39,25.32ppm。
实施例13
n-(3-氯苯基)-3-((3-氰基喹啉-2-基)硫代)丙酰胺(cpu-q12)的制备
以3-巯基丙酸代替硫代乙醇酸、3-氯苯胺代替苯胺外，采用cpu-q1相同的制备方法合成化合物cpu-q12(200mg，收率54％)。m.p.200–202℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc19h14cln3os:368.0619,found:368.0615.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.22(s,1h,–nh–),8.98(s,1h,–arh),8.02–7.89(m,3h,–arh),7.83(s,1h,–arh),7.68–7.63(m,1h,–arh),7.43(d,j＝8.3hz,1h,–arh),7.33(t,j＝8.1hz,1h,–arh),7.10(d,j＝8.0hz,1h,–arh),3.66(t,j＝6.7hz,2h,–s–ch2–),2.92(t,j＝6.7hz,2h,–ch2–c＝o–)ppm.13cnmr(75mhz,dmso-d6):δ＝169.69,157.47,147.78,144.11,140.40,133.52,133.02,130.38,128.83,127.62,126.96,123.69,122.83,118.44,117.32,115.72,104.91,35.55,25.17ppm。
实施例14
n-(3-溴苯基)-3-((3-氰基喹啉-2-基)硫代)丙酰胺(cpu-q13)的制备
以3-巯基丙酸代替硫代乙醇酸、3-溴苯胺代替苯胺外，采用cpu-q1相同的制备方法合成化合物cpu-q13(200mg，收率49％)。m.p.216–218℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc19h14brn3os:412.0114,found:412.0111.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.20(s,1h,–nh–),8.99(s,1h,–arh),8.03–7.90(m,4h,–arh),7.66(t,j＝7.4hz,1h,–arh),7.47(d,j＝7.4hz,1h,–arh),7.29–7.24(m,2h,–arh),3.65(t,j＝6.6hz,2h,–s–ch2–),2.91(t,j＝6.7hz,2h,–ch2–c＝o–)ppm.13cnmr(75mhz,dmso-d6):δ＝169.68,157.47,147.79,144.14,140.54,133.54,130.70,128.84,127.62,126.98,125.74,123.71,121.51,121.30,117.70,115.72,104.92,35.54,25.17ppm。
实施例15
n-([1,1′-联苯基]-4-基)-3-((3-氰基喹啉-2-基)硫代)丙酰胺(cpu-q14)的制备
以3-巯基丙酸代替硫代乙醇酸、4-氨基联苯代替苯胺外，采用cpu-q1相同的制备方法合成化合物cpu-q14(200mg，收率49％)。m.p.>250℃.hrmsm/z[m+h]+calculatedforc25h19n3os:410.1322,found:410.1324.1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ＝10.11(s,1h,–nh–),8.98(s,1h,–arh),8.03–7.90(m,3h,–arh),7.71–7.63(m,7h,–arh),7.44(t,j＝7.4hz,2h,–arh),7.32(t,j＝7.4hz,1h,–arh),3.67(t,j＝6.8hz,2h,–s–ch2–),2.93(t,j＝6.7hz,2h,–ch2–c＝o–)ppm.13cnmr(75mhz,dmso-d6):δ＝169.32,157.56,147.82,144.15,139.64,138.49,134.77,133.56,128.85,127.65,126.97,126.88,126.18,123.71,119.40,119.34,115.75,104.93,35.51,25.31ppm。
以下是本发明部分化合物的药理学试验及结果：
一、本发明部分化合物对hido1的抑制活性
实验方法：
配制ph值为6.5的50mmol磷酸钾缓冲液，加入并达到抗坏血酸钠25mmol、亚甲基蓝10μm、过氧化氢酶100μg/ml、l-色氨酸100μm。将系列浓度稀释的化合物加96孔板中，每孔加入提取的ido1酶，保证每孔终体积为200μl，37℃孵育1h。取140μl上清液加入新的96孔板中，每孔加入10μl30％三氯乙酸水溶液或1nnaoh水溶液于60℃水解30min。水解完毕后于0℃下10000rpm离心10min。用三氯乙酸水解时，取100μl上清液与新96孔透明板中，加100μl2％(w/v)的对二甲氨基苯甲醛醋酸溶液，室温下混匀2min，在480nm下测每孔的吸光度。用naoh水解时取100μl上清液于白色96孔板中，在360nm激发光下测460nm的发射光强度。用l-犬尿氨酸为标准物制作两条标准曲线。配制系列浓度的标准物(200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56μmol)，(1)每个浓度下取100μl与等体积的2％(w/v)的对二甲氨基苯甲醛醋酸溶液混匀，在480nm下测吸光度。(2)每个浓度下用取100μl于96孔白板中，在360nm激发光下测460nm的发射光强度。非线性回归(graphpadprism)来分析数据生成ic50值。利用上述方法，对化合物的ido1抑制活性进行测定，其中ic50如下，并用目前处于ii期临床实验的ido1抑制剂nlg0919为对照。
实验结果如表2所示。
表2本发明部分化合物对hido1的抑制活性ic50
由表2可见，本发明部分化合物对hido1有良好抑制活性。
二、本发明部分化合物对hela细胞内ido1蛋白酶抑制活性的测定
实验方法：
用含有10％fbs的rpmi1640细胞培养液将hela细胞培养至对数期，用胰酶消化并制成浓度为5×104个/ml的细胞悬液，在保证每孔5000个细胞的情况下将细胞接种在透明96孔板中放于37℃细胞培养箱中培养24h。待细胞在96孔板中贴壁并生长出形态，弃去原培养基，将ifn-γ人干扰素(20ng/孔)和系列浓度稀释的化合物加入96孔板中(保证每孔终体积为200μl)放于细胞培养箱中培养48h。将原96孔板中140μl培养液上清液移至新的96孔板中，每孔加入10μl6.1n的三氯醋酸水溶液于60℃下水解30min。水解完毕后将96孔板放于离心机中，于0℃下以4000rpm离心20min。离心完毕后将100ml上清液移至新的96孔透明板中，每孔加入100μl2％(w/v)的对二甲氨基苯甲醛醋酸溶液，室温下混匀2min，在480nm下测每孔的吸光度。用l-犬尿氨酸为标准物制作标准曲线。配制系列浓度的标准物(200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56μm)，每个浓度下取100μl与等体积的2％(w/v)的对二甲氨基苯甲醛醋酸溶液混匀，在480nm下测吸光度。用非线性回归(graphpadprism)来分析数据生成ic50值。实验设置3个复孔。利用上述方法，对化合物的ido1抑制活性进行测定，其中ic50如下。用目前处于ii期临床实验的ido1抑制剂nlg0919作为对照。
实验结果如表3所示：
表3本发明部分化合物基于hela细胞的ido1抑制活性ic50
由表3可知，本发明部分化合物基于hela细胞的ido1抑制活性ic50明显优于目前处于ii期临床实验的ido1抑制剂nlg0919。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。