一类HDAC、CDK双靶点抑制剂及其制备方法与应用与流程

本发明属于药物化学领域，具体涉及一类hdac、cdk双靶点抑制剂及其制备方法与应用。

技术背景

组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases，hdacs)是维持染色体的基本组成单位核小体中组蛋白乙酰化平衡的关键酶之一，调节组蛋白n-端的赖氨酸残基的乙酰化和去乙酰化，与基因转录抑制密切相关，牵涉到促基因沉默的诸多过程。研究显示，hdacs能够抑制肿瘤细胞生长，诱导肿瘤细胞凋亡，与多种疾病如癌症、急性髓性白血病、病毒和感染等的发生与发展密切有关。

周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependentkinases，cdk)是一组通过对丝氨酸/苏氨酸蛋白的化学作用驱动细胞周期的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是细胞周期调控中的重要因子。cdk与周期蛋白cyclin协同作用，和cyclin结合形成异二聚体，不同的cyclin—cdk复合物，通过cdk活性，催化不同底物磷酸化，而实现对细胞周期不同时相的推进和转化作用。研究显示，肿瘤发生与cdk及其调控物的基因改变和失控紧密相关，表明cdk的抑制剂可用于抗癌治疗。

多靶点协同抑制肿瘤信号转导，提高效果的同时降低副作用，是肿瘤治疗和药物开发的新方向，因此，研究开发新型的hdac/cdk双靶点抑制剂，具有重要的应用前景和意义。

技术实现要素：

本发明的一个目的在于提供一类能够同时抑制hdac靶点和cdk靶点的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其通式如式i所示：

本发明的第二个目的在于提供制备本发明的通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药的方法。

本发明的第三个目的在于提供包含本发明的通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药和药学可接受的载体的组合物，以及包含本发明的通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药和另一种或多种抗肿瘤组合物。

本发明的第四个目的在于提供本发明的通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。

为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，

其中，

r1选自烷基、环烷基、杂环烷基、烷氧基和卤代烷基；

r2选自氮杂环烷基；

x选自-nh-(ch2)n-，所述n为0-4的整数；

y选自键、亚烷基、亚烯基、-nh-c(o)-(ch2)m-、-c(o)-nh-(ch2)m-、芳基和杂芳基，所述的亚烷基、亚烯基、-nh-c(o)-(ch2)m-、-c(o)-nh-(ch2)m-、芳基和杂芳基可以被一个或多个烷基、卤素、烷氧基、羟基、氨基、羧基、氰基和硝基取代，所述的m选自1-6的整数。

在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中r1选自c1-6烷基、c3-8环烷基、c3-8杂环烷基、c1-6烷氧基和卤代c1-6烷基；进一步优选地，r1选自c1-6烷基和c3-8环烷基；更进一步优选地，r1选自甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、环丁基、环戊基、环己基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、三氯甲基、三氟甲基；更进一步优选地，r1选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和环戊烷基。

在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中r2选自一氮杂环c3-8环烷基、二氮杂环c3-8环烷基、氮氧杂c3-8环烷基、氮硫杂c3-8环烷基，所述的一氮杂环c3-8环烷基、二氮杂环c3-8环烷基、氮氧杂c3-8环烷基、氮硫杂c3-8环烷基可以被一个或多个烷基、烷氧基、卤素取代；进一步优选地，r2选自一氮杂环c5-6环烷基、二氮杂环c5-6环烷基、氮氧杂c5-6环烷基、氮硫杂c5-6环烷基，所述的一氮杂环c5-6环烷基、二氮杂环c5-6环烷基、氮氧杂c5-6环烷基、氮硫杂c5-6环烷基可以被一个或多个c1-6烷基取代；更进一步优选地，r2选自哌啶基、4-甲基哌啶基、哌嗪基、n-甲基哌嗪基、吗啉基和四氢吡咯烷基，所述的哌啶基、4-甲基哌啶基、哌嗪基、n-甲基哌嗪基、吗啉基和四氢吡咯烷基通过氮原子与相连。

在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中x为-nh-(ch2)n-，所述n选自0和1。

在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中y选自键、-(ch2)q-、亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、-nh-c(o)-(ch2)m-、-c(o)-nh-(ch2)m-、苯基和杂芳基，所述的q、m选自1-6的整数，所述的-(ch2)q-、亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、-nh-c(o)-(ch2)m-、-c(o)-nh-(ch2)m-、苯基和杂芳基可以被一个或多个c1-6烷基、卤素、c1-6烷氧基、羟基、氨基、羧基、氰基和硝基取代；进一步优选地，y选自键、亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚乙烯基、-nh-c(o)-(ch2)m-、-c(o)-nh-(ch2)m-，所述的m选自1-6的整数，所述的亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚乙烯基、-nh-c(o)-(ch2)m-、-c(o)-nh-(ch2)m-可以被一个或多个c1-6烷基、卤素、c1-6烷氧基、羟基、氨基、羧基、氰基和硝基取代；更进一步优选地，y为亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚乙烯基。

在一些优选的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中y连接在结构中苯环的间位或对位。

在一些具体的实施方案中，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药，其中：

r1选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和环戊烷基；

r2选自哌啶基、4-甲基哌啶基、哌嗪基、n-甲基哌嗪基、吗啉基和四氢吡咯烷基，所述的哌啶基、4-甲基哌啶基、哌嗪基、n-甲基哌嗪基、吗啉基和四氢吡咯烷基通过氮原子与相连；

x为-nh-(ch2)n-，所述n选自0和1。

y为亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚乙烯基，y连接在结构中苯环的间位或对位。

本发明提供了以下具体化合物：

第二方面，本发明提供本发明的通式i的化合物的制备方法。通式i的化合物的制备方法包括如下步骤：

步骤a：式1的化合物烷烃化制得式2的化合物；

步骤b：式2的化合物经取代反应制得式3的化合物；

步骤c：式3的化合物经亲核取代反应制得式4的化合物；

步骤d：式4的化合物经亲核取代反应制得式5的化合物；

步骤e：式5的化合物与羟胺反应制得式i化合物；反应路线如下：

其中，r1、r2、x、y、具有通式i中含义，t选自碘或溴。

第三方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药。

在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明通式i的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药，还包含选自下列组成的一种或多种化合物：cdk抑制剂、idh抑制剂、酪氨酸蛋白酶抑制剂、egfr抑制剂、vegfr抑制剂、bcr-abl抑制剂、c-kit抑制剂、c-met抑制剂、raf抑制剂、mek抑制剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂、vegf抗体、egf抗体、hiv蛋白激酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂等等。

可以将本发明通式i的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。

第四方面，本发明提供本发明通式i的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药或本发明的药物组合物治疗和/或预防肿瘤的方法和在制备治疗和/或预防肿瘤药物中的应用，包括向肿瘤易发人群或肿瘤患者施用本发明的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药或者包含本发明的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药的药物组合物，以有效降低肿瘤发生率、延长肿瘤患者生命。

在一些实施方案中，本发明提供本发明的通式i的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药或本发明的药物组合物治疗具有抗药性的肿瘤的方法，包括向具有抗药性的肿瘤患者施用治疗有效量的本发明通式i的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药或者包含本发明的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药的药物组合物。在另一些实施方案中，本发明提供本发明的通式i的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药或本发明的药物组合物在制备治疗具有抗药性的肿瘤的药物中的应用。所述肿瘤包括但不限于实体瘤，优选为肺癌、头颈部肿瘤、结直肠癌、膀胱癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、口腔癌、肝癌、卵巢癌。

术语说明

本发明的“烷基”是指直链或支链的饱和烃基。合适的烷基为取代或未取代的c1-10烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、环丁基、正戊基、异戊基、环戊基、环己基、正己基等。

本发明的“环烷基”是指环状的饱和烃基。合适的环烷基可以为取代或未取代的具有3-10个碳原子的单环、二环或三环饱和烃基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基。

本发明的“烷氧基”是指-o-烷基。根据本发明，合适的烷氧基为c1-10烷氧基，如c1-8烷氧基，c1-7烷氧基，c1-6烷氧基，c1-5烷氧基，c1-4烷氧基，c1-3烷氧基，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、异丁氧基、仲丁氧基等。

本发明的“卤素”是指氟、氯、溴、碘。

本发明的“卤代烷基”是指至少被一个卤素取代的烷基。

本发明的“芳基”是指可以包含单环或多稠环例如二环或三环的芳香环的芳香系，其中至少稠合的环的一部分形成共轭的芳香系，其含有5至50个碳原子，优选约6至约14个碳原子。合适的芳基包括但不限于苯基、萘基、联苯基、蒽基、四氢萘基、芴基、茚满基、亚联苯基和苊基。

本发明的“杂芳基”是指芳族单环或多稠环如二环或三环的至少有一个碳原子被杂原子替代的芳香性基团，所述的杂原子为o、s、n。合适的杂芳基包括但不限于咪唑基、苯并咪唑基、咪唑并吡啶基、喹唑啉酮基、吡咯基、咪唑酮基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基等。

本发明的“亚烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链二价基团。

本发明的“亚烯基”是指含有2到6个碳原子和1到3个双键的直链或支链的二价基团。

本发明的“氮杂环烷基”是指至少含有1个氮原子的杂环烷基；本发明的“一氮杂环烷基”是指只含有1个氮原子的杂环烷基，例如四氢吡咯烷基、哌啶基；本发明的“氮氧杂环烷基”是指含有1个氮原子、1个氧原子的杂环烷基，如吗啉基；本发明的“氮硫杂环烷基”是指含有1个氮原子、1个硫原子的杂环烷基，如硫代吗啉基等。

本发明的“溶剂合物”在常规意义上是指溶质(如活性化合物、活性化合物的盐)和溶剂(如水)组合形成的复合物。溶剂是指本领域的技术人员所知的或容易确定的溶剂。如果是水，则溶剂合物通常被称作水合物，例如一水合物、二水合物、三水合物等。

本发明的“结晶”是指本发明所述的化合物形成的各种固体形态，包括晶型、无定形。

本发明的“异构体”是指分子中原子在空间上排列方式不同所产生的立体异构体，包括对映异构体和非对映异构体。

本发明的“前药”是指在生物体的生理条件下，由于与酶、胃酸等反应而转化成本发明的化合物的化合物，即通过酶的氧化、还原、水解等转化成本发明的化合物的化合物和/或通过胃酸等的水解反应等转化成本发明的化合物的化合物。

本发明的“药学可接受的盐”是指本发明的化合物与酸形成的药学上可接受的盐，所述的酸包括但不限于磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、醋酸、乳酸、硝酸等等。

本发明的“药物组合物”是指包含任何一种本文所述的化合物，包括异构体、前药、溶剂合物、药学上可接受的盐或其化学的保护形式，和一种或多种药学上可接受载体的混合物。

本发明的“药学上可接受的载体”是指对有机体不引起明显刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的载体，包含溶剂、稀释剂或其它赋形剂、分散剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。除非任何常规载体介质与本发明化合物不相容。可以作为药学上可接受的载体的一些实例包括，但不限于糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、以及纤维素和乙酸纤维素；麦芽、明胶等。

本发明的“赋形剂”指加入到药用组合物中以进一步促进给予化合物的惰性物质。赋形剂可以包括碳酸钙、磷酸钙、多种糖类和多种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油、聚乙二醇。

实施例1(e)-n-羟基-3-[3-[[(9-乙基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-基)氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6a)的制备

步骤1：2,6-二氯-9-异丙基-9h-嘌呤的制备

将2,6-二氯-9h-嘌呤(18.9g，0.1mol)和k2co3(27.6g，0.2mol)溶解于150mldmf中，随后在冰浴下加入碘乙烷(0.2mol)，在室温下搅拌10h。然后将混合物加入到400ml水中，过滤，收集沉淀，在真空下干燥得到类白色固体17.6g，收率82％。

步骤2：n-(3-溴苄基)-2-氯-9-乙基-9h-嘌呤-6-胺的制备

向2,6-二氯-9-异丙基-9h-嘌呤(5mmol)加入到dmf(10ml)中加入3-溴苄胺(5mmol)和k2co3(5mmol)。然后在90℃下将反应混合物搅拌4h。然后向反应液中加入水(50ml)，并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。用饱和氯化钠溶液洗涤合并的有机层，无水na2so4干燥，过滤真空浓缩得到黄色固体1.63g，收率86％。

步骤3：n-(3-溴苄基)-2-氯-9-乙基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-胺的制备

将n-(3-溴苄基)-2-氯-9-乙基-9h-嘌呤-6-胺(5mmol)与吗啉(8ml)的混合物在90℃搅拌3小时，然后将反应冷却到室温，加入50ml冷水，过滤收集沉淀，真空干燥得到黄色固体1.39g，收率65％。

步骤4：(e)-3-[3-[[[9-异丙基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酸甲酯的制备

将n-(3-溴苄基)-2-氯-9-乙基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-胺(5mmol)、丙烯酸甲酯(0.86g，10mmol)、pd(oac)2(0.12g)、三(邻甲苯基)膦(0.31g，1mmol)、5mlch3cn和10mldmf加入到50ml三颈瓶中。将所得溶液加热至90℃并在此温度下在氮气保护下搅拌6h。反应完成后，加入100ml水，用50ml乙酸乙酯萃取所得混合物两次。将合并的有机层依次用h2o(50ml)和盐水(50ml)洗涤，然后经无水na2so4干燥，过滤并在低压下浓缩。将残留物用硅胶柱层析，用石油醚和乙酸乙酯纯化，得到类白色固体1.17g，收率54％。

步骤5：(e)-n-羟基-3-[3-[[(9-乙基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-基)氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6a)的制备

在0℃下将氢氧化钾(5.6g，100mmol)加入到甲醇(14ml)中，缓慢低价盐酸羟胺(4.67g，67.2mmol)的甲醇(24ml)溶液。在该温度下将反应混合物搅拌反应1h。过滤去除沉淀，得到新鲜的羟胺溶液。在0℃将(e)-3-[3-[[[9-异丙基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酸甲酯(1mmol)加入到上述新制备的羟胺溶液(20ml)中，室温下搅拌反应2h。然后用饱和氯化铵调ph＝7～8左右。过滤，滤饼用水洗涤后在真空中干燥，得到淡黄色固体0.14g，收率32％。m.p.:205-207℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.79(s,1h),9.07(s,1h),8.10(s,1h),7.89(s,1h),7.57(s,1h),7.25-7.47(m,4h),6.43(d,j＝15.8hz,1h),4.42-4.78(m,3h),3.45-3.70(m,8h),1.46(d,j＝6.7hz,6h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.1,158.7,154.4,150.9,141.9,138.8,136.5,134.9,129.2,126.8,126.5,119.3,114.3,66.5,46.2,45.1,43.6,22.5.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc22h28n7o3:438.2248；found:438.2242.

实施例2(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-乙基-2-哌啶基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6b)的制备

以n-(3-溴苄基)-2-氯-9-乙基-9h-嘌呤-6-胺和哌啶为原料，操作同6a，经柱层析分离得到白色固体，收率33％。m.p.:217-219℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.76(s,1h),9.04(s,1h),7.97(s,1h),7.79(s,1h),7.55(s,1h),7.25-7.41(m,4h),6.42(d,j＝15.8hz,1h),4.50-4.62(m,2h),4.00(q,j＝7.2hz,2h),3.53-3.71(m,4h),1.45-1.65(m,2h),1.32-1.41(m,4h),1.18-1.37(t,j＝7.2hz,3h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.1,158.8,142.0,138.8,137.7,134.9,129.2,129.1,126.8,126.5,119.3,45.3,37.8,25.6,25.0,15.6.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc22h28n7o2:422.2299；found:422.2295.

实施例3(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-乙基-2-四氢吡咯基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6c)的制备

以n-(3-溴苄基)-2-氯-9-乙基-9h-嘌呤-6-胺和四氢吡咯为原料，操作同6a，经柱层析分离得到白色固体，收率36％。m.p.:209-211℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.77(s,1h),9.05(s,1h),7.91(s,1h),7.73(s,1h),7.57(s,1h),7.26-7.40(m,4h),6.43(d,j＝18hz,1h),4.60(s,2h),4.00(q,j＝7.2hz,2h),3.35-3.47(m,4h),1.85(t,j＝6.4hz,4h),1.34(t,j＝7.2hz,3h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.1,157.8,148.7,147.3,142.1,138.8,137.2,135.0,129.3,129.2,127.0,126.5,119.3,46.9,43.5,37.8,25.7,15.6.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc21h26n7o2:408.2142；found:408.2142.

实施例4(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-乙基-2-(4-甲基哌啶)-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6d)的制备

以n-(3-溴苄基)-2-氯-9-乙基-9h-嘌呤-6-胺和4-甲基哌啶为原料，操作同6a，经柱层析分离得到白色固体，收率33.2％。m.p.:199-201℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.76(s,1h),9.04(s,1h),7.97(s,1h),7.77(s,1h),7.55(s,1h),7.25-7.45(m,4h),6.42(d,j＝15.8hz,1h),4.45-4.73(m,4h),3.95-4.05(m,2h),2.72(t,j＝11.9hz,2h),1.58(d,j＝12.0hz,3h),1.35(t,j＝7.2hz,3h),0.85-0.95(m,5h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.2,158.8,154.4,151.4,142.0,138.9,137.7,135.0,129.2,129.1,126.8,126.4,119.3,113.5,44.7,43.5,37.8,33.9,31.3,22.4,15.6.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc23h30n7o2:436.2455；found:436.2451.

实施例5(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-异丙基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6e)的制备

以2,6-二氯-9h-嘌呤和2-碘丙烷为原料，操作同6a，经柱层析分离得到黄色固体，收率32％。m.p.:205-207℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.79(s,1h),9.07(s,1h),8.10(s,1h),7.89(s,1h),7.57(s,1h),7.25-7.47(m,4h),6.43(d,j＝15.8hz,1h),4.42-4.78(m,3h),3.45-3.70(m,8h),1.46(d,j＝6.7hz,6h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.1,158.7,154.4,150.9,141.9,138.8,136.5,134.9,129.2,126.8,126.5,119.3,114.3,66.5,46.2,45.1,43.6,22.5.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc22h28n7o3:438.2248；found:438.2242.

实施例6(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-环戊基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6f)的制备

以2,6-二氯-9h-嘌呤和碘代环戊烷为原料，操作同6a，经柱层析分离得到白色固体，收率40％。m.p.:205-207℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.79(s,1h),9.08(s,1h),8.11(s,1h),7.86(s,1h),7.56(s,1h),7.27-7.45(m,4h),6.42(d,j＝15.8hz,1h),4.48-4.79(m,3h),3.45-3.59(m,8h),1.99-2.21(m,2h),1.73-1.98(m,4h),1.38-1.73(m,2h).¹³cnmr(150mhz,cdcl3:dmso-d6＝1:1)(δ,ppm):168.2,163.4,159.1,155.9,146.3,143.7,141.6,139.7,133.7,131.7,130.9,123.7,119.1,71.3,60.1,49.9,48.4,37.0,28.9.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc24h30n7o3:464.2405；found:464.2400.

实施例7(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-丁基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6g)的制备

以2,6-二氯-9h-嘌呤和碘代丁烷为原料，操作同6a，经柱层析分离得到白色固体，收率35％。m.p.:209-211℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.79(s,1h),9.07(s,1h),8.11(s,1h),7.81(s,1h),7.57(s,1h),7.21-7.47(m,4h),6.42(d,j＝15.6hz,1h),4.59(s,2h),3.87-4.05(m,2h),3.00-3.74(m,8h),1.65-1.83(m,2h),1.08-1.40(m,2h),0.75-0.92(m,3h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.1,158.9,154.3,151.4,141.8,138.6,138.1,134.9,129.2,129.2,126.9,126.6,119.3,113.7,66.5,45.1,43.6,42.4,31.7,19.6,13.8.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc23h30n7o3:452.2405；found:452.2401.

实施例8(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-甲基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6h)的制备

以2,6-二氯-9h-嘌呤和碘甲烷为原料，操作同6a，经柱层析分离得到灰色固体，收率35％。m.p.:224-226℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.77(s,1h),9.05(s,1h),8.07(s,1h),7.76(s,1h),7.55(s,1h),7.25-7.48(m,4h),6.41(d,j＝15.4hz,1h),4.60(s,2h),3.38-3.69(m,11h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.1,159.0,154.4,151.7,141.9,139.1,138.8,134.9,129.2,129.1,126.8,126.6,119.3,113.8,66.5,45.1,43.5,29.3.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc20h24n7o3:410.1935；found:410.1932.

实施例9(e)-n-羟基-3-[4-[[[9-异丙基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6i)的制备

以n-(4-溴苄基)-2-氯-9-异丙基-9h-嘌呤-6-胺和吗啉为原料，操作同6a，经柱层析分离得到白色固体，收率28％。m.p.:194-196℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.75(s,1h),9.07(s,1h),8.12(s,1h),7.96(s,1h),7.49(d,j＝7.7hz,2h),7.25-7.45(m,3h),6.41(d,j＝15.8hz,1h),4.49-4.71(m,3h),3.45-3.70(m,8h),1.47(d,j＝6.6hz,6h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.2,158.8154.0,150.7,142.5,138.6,138.4,133.6,128.4,127.8,118.8,113.1,66.5,46.6,45.1,43.4,22.4.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc22h28n7o3:438.2248；found:438.2244.

实施例10(e)-n-羟基-3-[4-[[[9-异丙基-(4-甲基哌嗪基)-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6j)的制备

以n-(4-溴苄基)-2-氯-9-异丙基-9h-嘌呤-6-胺和4-甲基哌嗪为原料，操作同6a，经柱层析分离得到灰色固体，收率30％。m.p.:212-214℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.78(s,1h),9.03(s,1h),8.24(s,1h),7.94(s,1h),7.30-7.58(m,5h),6.43(d,j＝15.8hz,1h),4.52-4.75(m,3h),2.93-3.52(m,8h),2.72(s,3h),1.48(d,j＝6.7hz,6h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.3,157.8,150.7,148.4,138.6,136.9,133.6,128.4,127.8,125.4,118.9,52.4,48.3,42.6,41.9,22.5.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc23h31n8o2:451.2564；found:451.2560.

实施例11(e)-n-羟基-3-[4-[[[9-甲基-2-哌啶基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6k)的制备

以n-(4-溴苄基)-2-氯-9-甲基-9h-嘌呤-6-胺和哌啶为原料，操作同6a，经柱层析分离得到白色固体，收率35％。m.p.:236-238℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):δ10.73(s,1h),9.02(s,1h),7.96(s,1h),7.71(s,1h),7.48(d,j＝8.0hz,2h),7.41(d,j＝15.8hz,1h),7.37(d,j＝8.0hz,2h),6.40(d,j＝15.8hz,1h),4.59(s,2h),3.60-3.70(m4h),3.56(s,3h),1.50-1.65(m,2h),1.38-1.48(m,4h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.3,158.9,138.6,133.5,133.2,128.3,127.7,118.8,45.2,40.5,29.2,25.7,25.0.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc21h26n7o2:408.2142；found:408.2138.

实施例12(e)-n-羟基-3-[4-[[[9-异丙基-2-四氢吡咯基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6l)的制备

以n-(4-溴苄基)-2-氯-9-异丙基-9h-嘌呤-6-胺和四氢吡咯为原料，操作同6a，经柱层析分离得到黄色固体，收率37％。m.p.:228-231℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):7.88(s,1h),7.79(s,1h),7.36(d,j＝8.1hz,2h),7.31(d,j＝8.0hz,2h),6.96(d,j＝15.8hz,1h),6.34(d,j＝15.8hz,1h),4.47-4.65(m,3h),3.35-3.52(m,4h),1.86(t,j＝6.3hz,4h),1.46(d,j＝6.7hz,6h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):165.2,157.6,154.4,151.2,140.2,136.3,135.4,129.0,128.3,126.4,126.3,113.6,46.8,46.1,43.2,25.5,22.4.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc22h28n7o2:422.2299；found:422.2294.

实施例13(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-甲基-2-哌啶基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6m)的制备

以n-(3-溴苄基)-2-氯-9-甲基-9h-嘌呤-6-胺和哌啶为原料，操作同6a，经柱层析分离得到白色固体，收率36％。m.p.:214-216℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.78(s,1h),9.06(s,1h),7.96(s,1h),7.71(s,1h),7.52(s,1h),7.30-7.46(m,4h),6.42(d,j＝15.8hz,1h),4.59(s,2h),3.60-3.69(m,4h),3.56(s,3h),1.45-1.50(m,2h),1.35-1.50(m,4h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.2,158.9,152.0,142.0,138.9,138.7,129.2,129.1,126.7,126.5,119.3,49.0,45.3,29.2,25.7,25.1.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc21h26n7o2:408.2142；found:408.2137.

实施例14(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-乙基-2-(4-甲基哌嗪)-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6n)的制备

以n-(3-溴苄基)-2-氯-9-乙基-9h-嘌呤-6-胺和4-甲基哌嗪为原料，操作同6a，经柱层析分离得到白色固体，收率28％。m.p.:194-196℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.87(s,1h),9.12(s,1h),8.17(s,1h),7.86(s,1h),7.56(s,1h),7.25-7.46(m,4h),6.46(d,j＝15.8hz,1h),4.61(s,2h),4.03(q,j＝7.1hz,2h),3.75-3.95(m,4h),2.79-2.92(m,4h),2.54(s,3h),1.35(t,j＝7.1hz,3h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.1,158.3,154.5,151.1,141.8,138.8,138.4,135.0,129.2,129.1,126.9,126.4,119.4,114.1,53.2,43.9,43.5,42.7,38.0,15.6.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc22h29n8o2:437.2408；found:437.2404.

实施例15(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-异丙基-2-(4-甲基哌嗪)-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6o)的制备

以n-(3-溴苄基)-2-氯-9-异丙基-9h-嘌呤-6-胺和4-甲基哌嗪为原料，操作同6a，经柱层析分离得到黄色固体，收率29％。m.p.:214-216℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.82(s,1h),9.25(s,1h),8.05(s,1h),7.87(s,1h),7.56(s,1h),7.12-7.52(m,4h),6.44(d,j＝15.8hz,1h),4.50-4.62(m,3h),3.55-3.70(m,4h),2.24-2.28(m,4h),2.16(s,3h),1.46(d,j＝6.6hz,6h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.1,158.6,154.4,150.9,141.9,138.7,136.3,135.0,129.2,126.9,126.4,119.3,114.1,54.9,46.3,46.1,44.4,43.5,22.5.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc23h31n8o2:451.2564；found:451.2562.

实施例16(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-丁基-2-(4-甲基哌嗪)-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6p)的制备

以n-(3-溴苄基)-2-氯-9-丁基-9h-嘌呤-6-胺和4-甲基哌嗪为原料，操作同6a，经柱层析分离得到红色固体，收率29％。m.p.:>250℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.96(s,1h),9.10(s,1h),8.23(s,1h),7.86(s,1h),7.27-7.57(m,5h),6.51(d,j＝15.7hz,1h),4.61(s,2h),3.88-4.11(s,2h),3.30-3.65(m,8h),2.64(s,3h),1.65-1.81(m,2h),1.22-1.43(m,2h),0.89(t,j＝7.0hz,3h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.2,158.1,154.5,151.3,142.6,138.9,138.4,133.7,128.4,127.8,119.1,114.1,52.5,43.4,42.9,42.4,42.0,31.7,19.6,13.8.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc24h33n8o2:465.2721；found:465.2719.

实施例17(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-异丙基-2-哌啶基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6q)的制备

以n-(3-溴苄基)-2-氯-9-异丙基-9h-嘌呤-6-胺和哌啶为原料，操作同6a，经柱层析分离得到白色固体，收率28％。m.p.:223-225℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.80(s,1h),9.09(s,1h),8.00(s,1h),7.83(s,1h),7.56(s,1h),7.31-7.45(m,4h),6.44(d,j＝15.8hz,1h),4.45-4.72(m,3h),3.60-3.73(m,4h),1.48-1.62(m,2h),1.32-1.45(m,10h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.1,158.6,154.4,151.1,142.0,138.9,136.0,134.9,129.2,129.1,126.8,126.4,119.3,113.7,46.1,45.3,43.6,25.6,25.0,22.5.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc22h30n7o2:436.2455；found:436.2452.

实施例18(e)-n-羟基-3-[3-[[[9-异丙基-2-四氢吡咯基-9h-嘌呤-6-基]氨基]甲基]苯基]丙烯酰胺(6r)的制备

以n-(3-溴苄基)-2-氯-9-异丙基-9h-嘌呤-6-胺和四氢吡咯为原料，操作同6a，经柱层析分离得到黄色固体，收率33％。m.p.:203-205℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.78(s,1h),9.13(s,1h),7.94(s,1h),7.80(s,1h),7.58(s,1h),7.25-7.46(m,4h),6.43(d,j＝15.8hz,1h),4.45-4.77(m,3h),3.36-3.49(m,4h),1.78-1.93(m,4h),1.46(d,j＝6.7hz,6h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.1,157.6,154.4,151.2,142.1,138.7,135.5,134.9,129.3,129.1,127.0,126.5,119.3,113.6,46.9,46.1,43.5,25.5,22.4.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc22h28n7o2:422.2299；found:422.2297.

实施例19(e)-n-羟基-3-[4-[[9-异丙基-2-吗啉基-9h-嘌呤-6-基]氨基]苯基]丙烯酰胺(6s)的制备

以n-(4-溴苯基)-2-氯-9-异丙基-9h-嘌呤-6-胺和吗啉为原料，操作同6a，经柱层析分离得到白色固体，收率39％。m.p.:208-211℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.69(s,1h),9.83(s,1h),9.03(s,1h),8.08(s,1h),7.96(d,j＝8.1hz,2h),7.52(d,j＝8.1hz,2h),7.42(d,j＝15.7hz,1h),6.37(d,j＝15.7hz,1h),4.55-4.70(m,1h),3.58-3.79(m,8h),1.54(d,j＝6.8hz,6h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.6,158.6,151.8,141.8,138.7,137.8,128.8,128.3,120.6,117.0,115.0,66.5,46.5,45.3,22.5.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc21h26n7o3:424.2092；found:424.2085.

实施例20(e)-n-羟基-3-[4-[[9-甲基-2-哌啶基-9h-嘌呤-6-基]氨基]苯基]丙烯酰胺(6t)的制备

以n-(4-溴苯基)-2-氯-9-甲基-9h-嘌呤-6-胺和哌啶为原料，操作同6a，经柱层析分离得到灰色固体，收率34％。m.p.:227-230℃；¹hnmr(600mhz,dmso-d6)(δ,ppm):10.68(s,1h),9.73(s,1h),9.02(s,1h),7.96(d,j＝7.9hz,2h),7.89(s,1h),7.50(d,j＝7.9hz,2h),7.42(d,j＝15.6hz,1h),6.37(d,j＝15.7hz,1h),3.70-3.82(m,4h),3.63(s,3h),1.44-1.71(m,6h).¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)(δ,ppm):163.7,158.8,152.8,151.6,141.9,140.0,138.7,131.5,128.6,128.3,122.4,120.3,117.0,113.8,45.6,29.4,25.7,24.9.hrms(esi):m/z[m+h]⁺calcdforc20h24n7o2:394.1986；found:394.1979.

实验例1hdac1/cdk2酶抑制活性测试

在384孔反应板中，设阳性对照孔和阴性对照孔，其余每孔加入不同浓度的化合物及酶，离心后室温孵育15min，加入荧光底物和终止液，使用synergy连续读取荧光信号并使用synergy选取线性反应段得到斜率(slope)。进而计算百分比抑制率，计算公式如下：酶抑制率＝mean(最大)-样品信号/mean(最大)-空白乘以100％，以化合物浓度的log值作为x轴，对应的百分比抑制率为y轴，用分析软件graphpadprism5拟合量效曲线，从而得出各个化合物抑制酶活性的ic50值。cdk酶抑制活性方法与hdac酶抑制方法类似。实验结果见表1

表1

“-”未测试

本发明使用的阳性对照saha、panobinostat和roscovitine购自百灵威。

结果显示，本发明的部分化合物对hdac1和cdk2均有抑制活性。其中，6a对hdac1野生型激酶的抑制活性(ic50＝5.8nm)强于阳性对照saha，对cdk2突变型激酶的抑制活性(ic50＝56nm)强于阳性对照roscovitine(ic50＝192nm)，因而对两个靶点显示出较强的抑制活性。

实验例2细胞增殖抑制活性测试

实验设溶剂对照组及药物实验组，药物实验组每组设4个浓度，每个浓度下设3个平行孔。每个实验重复三次。在96孔板中，每孔加入细胞浓度为1×10⁵个/ml的细胞悬液100μl，即每孔含细胞3×10³个，接种时注意使细胞均匀分布在各孔中。为防止液体蒸发，96孔板周围一圈孔不接种细胞，加入pbs保湿。细胞贴壁后，药物实验组中每孔中加入浓度为0、4、8、12和16μg/ml的目标化合物100μl，使其终浓度分别0、2、4、6和8μg/ml。将96孔板置于37℃、5％co2孵箱内继续培养，于72h后终止培养。分别于药物处理细胞72h后，取出96孔板，每孔中加入cck-8溶液20μl，在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时后，在自动酶标仪上450nm处测定每孔吸光度值(a)。预实验时在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，选取吸光度范围比较适宜的一个时间点(2h)用于后续实验。

不同药物浓度对肿瘤细胞的生长抑制作用按下式计算：

以抑制率对药物浓度作直线回归分析，用直线方程求算ic50值。检测所得结果以均数±标准偏差表示，实验结果采用spss15.0软件进行统计分析，以p<0.05表示有显著性差异。其结果见表2

表2

表2结果显示，化合物6a，6e对人肝癌hepg2细胞、肺癌a549细胞以及乳腺癌cal-148具有较强的抑制活性，优于阳性对照roscovitine。