抗病毒药物及其药物组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种抗病毒药物及其药物组合物，具体涉及抗人类免疫缺乏病毒 (HIV)的药物及其药物组合物，特别是涉及一种可作为逆转录病毒蛋白酶抑制剂的药物，该 逆转录病毒蛋白酶抑制剂具有式I所示的化学结构。
【背景技术】
[0002] 人类免疫缺乏病毒（HIV)是一种导致AIDS及其相关病变的病原性反转录病毒。 由于HIV的发现，对抗AIDS的抗病毒化学疗法的发展已成为积极研究重点。有关AIDS 的分子目标的研究参见Mitsua等人的文献（Science, 1990,pp. 1533-154)。HIV蛋白酶 (HIVPR)及天门冬胺酰基蛋白酶首先被克拉玛（Kramer)等人（Science231，1580(1986)) 认为是AIDS疗法的可能目标。从此以后，即广泛地确认HIVPR抑制剂在治疗AIDS时作 为有效制剂的潜在用途，有关HIVPR的医疗用途参见托马希里（Tomaselli)等人的文献 (〇1址。&，(^81，1991年5月，口口.6-27)及1?.胡弗〇11^〇等人的文献〇.]^(1.〇16111.34， 2341-2327(1991))。在传统模拟天门冬胺酰基蛋白酶的过渡状态中，羟基乙烯、二羟基乙 烯、羟基乙胺和次膦酸电子等排物（Bostere)似乎和HIVPR具有最大亲合力。许多HIVPR 的抑制剂已在不同细胞系统中，在毫微摩尔范围的浓度呈现抗病毒活性，且已说明在专利 文献中。
[0003] HIV蛋白酶在病毒复制过程中的主要作用是将gag和gag-pol基因产物裂解成病 毒成熟所需要的结构蛋白（基质、壳、核壳）和酶类（蛋白酶、整合酶、逆转录酶），从而进一 步完善病毒结构。蛋白酶抑制剂（PI)就是阻止前体蛋白质裂解，导致无感染病毒颗粒的堆 积。
[0004] 药效构象研究表明，这类化合物的作用机制是主要以氢健的方式分别与蛋白酶的 Asp25,Cly27和Asp29残基相互作用，与蛋白酶活性基团中的氨基酸残基形成体相互作用， 从而达到抑制蛋白酶活性的目的，进而阻遏了艾滋病病毒的复制，达到抗病毒作用。蛋白酶 抑制剂可进入包括外周血在内的多种组织器官而发挥抗病毒作用，因而疗效深入而持久。
[0005] 目前，已在临床广泛应用的HIV蛋白酶抑制剂有：沙奎那韦（saquinavir)、茚地那 韦（indinavir)、利托那韦（ritonavir)、奈非那韦（nelfinavir)、安普那韦（amprenavir)和 洛匹那韦（lopinavir)。2003年又有atazanavir和fosamprenavir两个新的蛋白酶抑制 剂通过了美国FDA的审批。由Bristol-MyersSquibb公司研发的atazanavir是一种每天 只需服用一次的全新的蛋白酶抑制剂。它对胰岛素和脂肪代谢影响非常小，病人没有腹泻 等副作用。能轻度增加胆红素水平，个别患者出现黄疸等，但病人很少因此而停止用药。
[0006] 这些蛋白酶抑制剂虽然能抑制HIV复制，但不能彻底消灭体内的病毒，也不能阻 止体内耐药毒株的出现和传播。蛋白酶抑制剂PI应用后不仅体内病毒的数量明显下降，同 时淋巴细胞中T辅助细胞-CD4细胞则有所增加。然后长期使用这些蛋白酶抑制剂产生明显 的毒副作用和耐药性。脂代谢紊乱是多种副作用中最突出且最复杂的，临床表现为面部和 外周脂肪消耗，腹、背、胸部脂肪积聚。病人出现高甘油三酯血症和高胆固醇血症、乳酸和 血糖升高、对胰岛素产生耐药性等。其次是耐药性，尤其是交叉耐药性是导致临床治疗失败 的一个主要原因。研究表明，发生PI耐药的机制比NRIT和NNRTI更复杂，往往涉及多点基 因突变。一般来说，蛋白酶底物结合区单一突变，可使病毒对药物的耐受性增加10倍。若 蛋白酶S1亚区82位缬氨酸或84位异亮氨酸被取代，则耐受性可增至30倍，如果82与84 位残基同时突变，可使药物治疗效果下降100倍。使高剂量PI会比使用低剂量PI延迟耐 药性的产生，与核苷类药物的联合应用也能减少耐药性的产生。还有耐药性的产生也由于 高的病毒复制速率，逆转录酶在逆转录过程中的出错和在蛋白酶抑制剂的选择性作用下的 进化结果。另外PI其复杂的服用方法、心血管疾病高风险使它不适应于依从性差、糖尿病、 心血管疾病的患者。
[0007] 已知以下式I化合物是一种有效的逆转录病毒蛋白酶抑制剂
【主权项】
1. 一种药用原料药，其活性成分为以下式I化合物：
2. 根据权利要求1的药用原料药，其中含有97%以上的式I化合物。
3. 根据权利要求1的药用原料药，其中还含有作为杂质存在的以下式Ia化合物：
4. 根据权利要求1的药用原料药，其中还含有作为杂质存在的以下式Ib化合物：
5. -种药物组合物，其是由权利要求1所述药用原料药和药用辅料一起制备得到的。
6. -种药物组合物，其中包括作为活性成分的如下式I化合物
在制备用于检测以如下式I化合物为活性成分的药用原料药
或者以该式I化合物为活性成分制成的（例如由该药用原料药制成的）药物组合物的 对照品中的应用。
8. 如下式Ib化合物
或者以该式I化合物为活性成分制成的（例如由该药用原料药制成的）药物组合物的 对照品中的应用。
9. 控制药品质量的方法，所述的药品是以式I化合物为活性成分的药用原料药或者由 该药用原料药制备成的药物组合物，该方法包括使该药品中的杂质式Ib化合物控制在一 定范围内，以使该药品在长期贮藏过程中杂质式Ia化合物呈现低的增长。
10. 制备本发明第一方面任一实施方案所述药用原料药的方法，该方法包括以下步 骤： (1)向N-喹啉酰基-L-天门冬氨酸、3-异丙基-3-[ (2S，3S) -2-羟基-3-(苯基甲氧基 羰基）氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯、苯并三唑-1-基氧三（二甲基氨基）鱗氟磷 酸盐和1-羟基苯并三唑的无水二甲基甲酰胺的搅拌溶液中加入N，N-二异丙基乙胺，在室 温下搅拌使反应完全，反应物用乙酸乙酯稀释，并用水、2%硫酸氢钾、5%碳酸氢钠和饱和 氯化钠水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，减压蒸发溶剂，用硅胶柱色谱以乙酸乙酯提纯，得 到3-异丙基-3-[ (2S，3S) -2-羟基-3- (N-喹啉酰基-L-天门冬酰基）氨基-4-苯基丁基] 肼基甲酸叔丁酯（即式Ia化合物）
(2) 在室温、氮气氛下，使二环己基碳化二亚胺、3-异丙基-3-[ (2S，3S) -2-羟 基-3-(N-喹啉酰基-L-天门冬酰基）氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯（即式Ia化合 物）、无水亚磷酸在无水吡啶中混合，在60°C搅拌反应后，减压蒸发溶剂，以碳酸氢钠水溶 液处理，于室温下激烈搅拌1小吋，滤出沉淀物，以水洗涤，以浓盐酸酸化滤液至约pHl. 5 ; 以乙酸乙酯萃取吸收产物，有机物经无水硫酸镁脱水，溶剂蒸发，得到3-异丙基-3-[ (2S， 3S)-2-次膦羧氧基-3-(N-喹啉酰基-L-天门冬酰基）氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁 酯（即式Ib化合物）
(3) 使3-异丙基-3-[(2S，3S)-2-次膦羧氧基-3-(N-喹啉酰基-L-天门冬酰基）氨 基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯（即式Ib化合物）在六甲基二硅胺烷中的悬浮液于 120±5°C下搅拌使反应混合物转呈均质化，添加双（三甲硅烷基）过氧化物，接着在上述 温度下搅拌1小吋；反应混合物冷却至室温后，真空蒸发至干；残余物溶于甲醇中，减压蒸 发至干，再溶于0.IM碳酸氢钠水溶液中，所得混合物以浓盐酸酸化至约pHl. 5,经氯化钠饱 和，以乙酸乙酯萃取。合并的有机相经无水硫酸镁脱水，蒸发至干，得到3-异丙基-3-[(2S， 3S)-2-膦羧氧基-3-(N-喹啉酰基-L-天门冬酰基）氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯
⑷在室温下将3_异丙基-3_[ (2S，3S) _2_勝竣氧基-3_ (N-喧琳醜基-L-天门冬 酰基）氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯加至碳酸氢钠水溶液中，搅拌直至溶液变澄 清；加异丙醇，搅拌混合物，过滤；所得滤液在55-60°C真空下蒸馏去除溶剤；使物料冷却 至25-35°C，添加异丙醇，升温至55-60°C，真空蒸馏除溶剂，干燥，所得固体用异丙醇洗涤， 再在70-75°C的真空下蒸发至干燥，即得式I所示二钠盐化合物为3-异丙基-3-[(2S， 3S)-2-膦羧氧基-3-(N-喹啉酰基-L-天门冬酰基）氨基-4-苯基丁基肼基甲酸叔丁酯二 钠
(5)纯化：使步骤⑷所得产物加至庚烷：乙酸乙酯=10 : 2~5的混合溶剂中， 在70-75°C下搅拌1-3小时，冷却至室温，滤出固体析出物，用庚烷20ml分2次洗涤，再在 60°C、真空下蒸发至干燥，即得；任选地根据需要重复本步骤（5)。
【专利摘要】本发明涉及抗病毒药物及其药物组合物，具体涉及抗人类免疫缺乏病毒(HIV)的药物及其药物组合物，特别是涉及一种可作为逆转录病毒蛋白酶抑制剂的药物，该逆转录病毒蛋白酶抑制剂具有式I所示的化学结构。
【IPC分类】C07F9-60, C07D215-48, G01N30-02, A61K31-675, A61P31-18
【公开号】CN104628771
【申请号】CN201410399934
【发明人】夏桂民, 杨东元, 伊恩·雷诺兹, 杨洁
【申请人】赫斯（西安）生物科技有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2014年8月14日