Pou5f1b在肿瘤诊断、治疗、预后和预测复发中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及P0U5F1B在肿瘤诊断、治疗、预后和预测复发中的应用。
【背景技术】
[0002]食管癌是常见的恶性肿瘤之一，其发病率居恶性肿瘤的第八位，死亡率高居第六位。我国的食管癌发病率极高，约占全球50%，并且我国已成为全球患食管癌死亡率最高的国家。
[0003]目前，针对食管癌的治疗方法主要有手术疗法、放射疗法和化学疗法等，但患者的预后效果仍然较差，75%的患者在接受治疗后I年内死亡，只有5?10%的患者的生存时间可达到5年。
[0004]肿瘤标志物的发现和合理应用是肿瘤复发预测的前提。迄今为止，全球预测早期复发以及预后不佳的食管癌的标志物尚不成熟，对于新诊断食管癌患者，了解疾病进展风险和指引治疗过程的工具也很有限。因此，检出食管癌复发标志物的研宄己经成为食管癌这种具有高度的分子和临床异质性的肿瘤防治急需解决的重大科学问题。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种肿瘤检测试剂盒。
[0006]本发明的另一目的在于提供一种肿瘤的预后试剂盒。
[0007]本发明的再一目的在于提供一种肿瘤的复发预测试剂盒。
[0008]本发明所采取的技术方案是:
一种肿瘤检测试剂盒，该试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B拷贝数的试剂。
[0009]进一步的，上述试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B表达水平的试剂。
[0010]进一步的，上述试剂盒中含有实时荧光定量检测基因P0U5F1B转录水平的引物序列。
[0011]进一步的，上述试剂盒中含有实时荧光定量检测基因P0U5F1B转录水平的引物序列:上游引物 5’ -GCCATACGGTCACAGAGCTT-3’ (SEQ ID NO:1)和下游引物 5’ -GGAAGCTTAGCCAGGTCAGA-3’ (SEQ ID NO:2)0
[0012]一种肿瘤的预后试剂盒，该试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B拷贝数的试剂。
[0013]进一步的，上述试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B表达水平的试剂。
[0014]进一步的，上述试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B拷贝数的试剂。
[0015]一种肿瘤的复发预测试剂盒，该试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B表达水平的试剂。
[0016]一种肿瘤治疗药剂，该药剂中含有抑制基因P0U5F1B表达的试剂。
[0017]进一步的，上述抑制基因P0U5F1B表达的试剂选自可使基因P0U5F1B沉默的试剂。
[0018]本发明的有益效果是: 本发明发现了 P0U5F1B在多种肿瘤如食管癌、乳腺癌、肝癌、和卵巢癌等中显著扩增。目前用于肿瘤临床辅助诊断技术尚不完善，而P0U5F1B在肿瘤中与正常组织相比是明显扩增的，这提示P0U5F1B具有成为肿瘤辅助诊断标记物的潜能。
[0019]本发明通过一系列分析方法发现:在多种肿瘤中P0U5F1B的扩增与肿瘤的转移、复发、患者预后和肿瘤细胞干性密切相关。通过一系列体内功能实验发现:高表达P0U5F1B可以促进TIC的形成进而增强食管癌细胞的体内成瘤能力，降低无瘤小鼠的生存率。提示P0U5F1B可作为食管癌治疗的靶点。而通过抑制P0U5F1B在癌细胞和组织中的表达水平，可以有效抑制TIC的形成降低食管癌细胞的体内成瘤能力、提高无瘤小鼠的生存率。以上实验数据均足以证明抑制内源性P0U5F1B可显著降低食管癌细胞的体内成瘤能力、提高患者生存率，这提示了 P0U5F1B具有成为诊断、治疗、预后和预测复发的标记物的潜能。P0U5F1B抑制剂在制备治疗肿瘤的药物组合物上极具临床应用价值，为肿瘤的有效治疗提供了新的药物和方法。
【附图说明】
[0020]图1为通过对Tumorscape数据库中的数据进行分析得出的人类基因组在3138例肿瘤样本、2526例肿瘤组织和611个肿瘤细胞系中的扩增图谱；
图2为通过GISTIC 2.0对Tumorscape数据库中的数据进行分析得出的人类基因组在3138例肿瘤样本、2526例肿瘤组织和611个肿瘤细胞系中的扩增图谱；
图3为通过对TCGA数据库中的数据进行分析得出的人类基因组在5443例原发肿瘤组织、393例转移组织和63例复发组织中的扩增图谱；
图4为通过GISTIC 2.0对TCGA数据库中的数据进行分析得出的人类基因组在5443例原发肿瘤组织、393例转移组织和63例复发组织中的扩增图谱；
图5为8q24.21区段中基因的分布图谱；
图 6 为:8q24.21 区段上的 FAM84B、PCAT1、P0U5F1B、MYC、PVT1、GSDMC、FAM49B 和 ASAPl基因的拷贝数增加的样本分别在TCGA数据库中的5443例原发肿瘤组织、393例转移组织和63例复发组织中所占的比例；
图7显示在TCGA数据库中9297例肿瘤样本中P0U5F1B拷贝数的扩增(Amplificat1n)和增加(Gain)均与肿瘤患者的总生存率呈显著负相关；
图8显示在TCGA数据库中9297例肿瘤样本中P0U5F1B拷贝数的扩增(Amplificat1n)与患者无病生存率呈显著负相关，P0U5F1B拷贝数扩增(Amplificat1n)的肿瘤病人与P0U5F1B拷贝数增加(Gain)的肿瘤病人的无病生存率具有显著性差异；
图9显示P0U5F1B的扩增在特定肿瘤类型中的比例；
图10显示通过FISH (荧光原位杂交)证实P0U5F1B在食管癌、乳腺癌和肝癌的组织和细胞系中扩增；
图11显示，Real-Time PCR分析结果表明P0U5F1B在3种肿瘤组织，包括食管癌、乳腺癌和肝癌中扩增；
图12中Kaplan-Meier生存曲线显示，P0U5F1B拷贝数的扩增与食管癌患者无病生存率呈显著负相关；
图13中Kaplan - Meier生存曲线显示，P0U5F1B拷贝数的扩增与乳腺癌患者无病生存率呈显著负相关；
图14中Kaplan -Meier生存曲线显示，P0U5F1B拷贝数的扩增与肝癌患者无病生存率呈显著负相关；
图15为对TCGA数据库中泛癌的P0U5F1B mRNA水平进行分析，结果显示P0U5F1B的扩增促进P0U5F1B mRNA表达的上调；
图16显示通过Gene Set Enrichment Analysis (GSEA)分析方法对TCGA中泛癌的P0U5F1B拷贝数变异与肿瘤复发相关的基因集的相关性进行分析，结果；
图17显示通过Gene Set Enrichment Analysis (GSEA)分析方法对TCGA中泛癌的P0U5F1B拷贝数变异与肿瘤预后相关的基因集的相关性进行分析，结果表明P0U5F1B在所有类型的肿瘤中的扩增与预后相关的基因集呈负相关；
图18显示通过Gene Set Enrichment Analysis (GSEA)分析方法对TCGA中泛癌的P0U5F1B拷贝数变异与肿瘤细胞干性相关的基因集的相关性进行分析，结果表明P0U5F1B在所有类型的肿瘤中的扩增与肿瘤细胞干性相关的基因集呈正相关；
图19接种Eca 9706-P0U5F1B的小鼠比接种Eca 9706-vector的小鼠更容易长肿瘤；图20显示，高表达POU5F1B显著增加食管癌中的肿瘤起始细胞(TIC，tumor initiatedcells)；
图 21 显示接种 Eca 9706-shP0U5FlBl#2 和接种 Eca 9706-sh P0U5F1B1#3 的小鼠比接种Eca 9706-Control鼠更容易长肿瘤；
图22显示，沉默P0U5F1B显著增加食管癌中的肿瘤起始细胞(TIC，tumor initiatedcells)；
图23显示在16只小鼠中P0U5F1B的高表达与无瘤小鼠生存率显著负相关；在16只小鼠中P0U5F1B的低表达与无瘤小鼠生存率显著正相关；
图24显示，小鼠肿瘤复发模型实验结果表明P0U5F1B高表达促进食管癌的复发P0U5F1B高表达促进食管癌的复发。
【具体实施方式】
[0021]一种肿瘤检测试剂盒，该试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B拷贝数的试剂。
[0022]优选的，上述试剂盒中含有定量检测基因P0U5F1B拷贝数的试剂为上游引物5’-GCCATACGGTCACAGAGCTT-3’ (SEQ ID NO:1)和下游引物 5’- GGAAGCTTAGCCAGGTCAGA-3’(SEQ ID NO:2)o
[0023]一种肿瘤检测试剂盒，该试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B表达水平的试剂。
[0024]优选的，上述试剂盒中含有实时荧光定量检测基因P0U5F1B转录水平的引物序列。
[0025]优选的，上述试剂盒中含有实时荧光定量检测基因P0U5F1B转录水平的引物序列:上游引物 5’ -GCCATACGGTCACAGAGCTT-3’ (SEQ ID NO:1)和下游引物 5’ -GGAAGCTTAGCCAGGTCAGA-3’ (SEQ ID NO:2)。
[0026]一种肿瘤检测试剂盒，该试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B拷贝数的试剂，以及含有能够定量检测基因P0U5F1B表达水平的试剂。
[0027]—种肿瘤的预后试剂盒，该试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B拷贝数的试剂。
[0028]优选的，上述试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B表达水平的试剂。
[0029]优选的，上述试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B拷贝数的试剂。
[0030]一种肿瘤的复发预测试剂盒，该试剂盒中含有能够定量检测基因P0U5F1B表达水平的试剂。
[0031]一种肿瘤治疗药剂，该药剂中含有抑制基因P0U5F1B表达的试剂。
[0032]优选的，上述抑制基因P0U5F1B表达的试剂选自可使基因P0U5F1B沉默的试剂。
[0033]优选的，上述沉默P0U5F1B的试剂为具有发夹结构的shP0U5FlB，其序列为:5’-CGGAGAAGTCCCAGGACAT-3’ (SEQ ID NO:3)。
[0034]下面结合具体实施例，进一步阐述本
【发明内容】
。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常