灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法_2

文档序号:8484000阅读:来源:国知局
. 5,酶解时间18-22min,纤维素复合酶的加入量为 萃取液的1.5-2.5% (W:V);所述纤维素复合酶由纤维素酶、蛋白酶、果胶酶按比活力 4. 8-5. 2:2. 8-3. 2:1. 8-2. 2 混合而成。
[0039] 所述桔梗水提物的提取工艺如下:取桔梗90-110g,用水煎制煮沸25-35min,倒出 药渣,补加适量冷水于药渣中,再煮沸18-22min,倒出药汁,之后再补加适量冷水于药渣中, 煮沸18-22min,倒出药汁,合并药汁,过滤药汁,将过滤后的药汁于55-65°C下干燥,得到桔 梗水提物。
[0040] 所述金银花和枸杞醇提物的提取工艺如下:将金银花和枸杞按照0. 8-1. 2 :1的质 量配比混合后,30-50目粉碎,之后用纱布包好扎紧,放入酒精回流提取仪中,用2. 5-3. 5倍 的乙醇提取2. 5-3. 5h,获得萃取液,将剩余物质再加入2. 5-3. 5倍的乙醇提取I. 5-2. 5h,再 次获得萃取液,之后合并两次获得的萃取液,旋蒸减压浓缩得到金银花和枸杞醇提稠状物; 所述乙醇的体积百分浓度为93-97%。
[0041] (二)实施例如下:下面通过实施例进一步说明本发明:
[0042] 实施例组1
[0043] 实施例1-1
[0044] 一种灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法,所述灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法 包括如下步骤:
[0045] (1)配置培养基:所述培养基主要由以下组分配制而成(W/V):葡萄糖26. Og/L,玉 米粉11. 2g/L,麸皮粉10. 8g/L和蛋白胨5. 9g/L ;
[0046] (2)发酵培养:在培养基中添加450mg/L的桔梗水提物,之后接入灵芝种子培养 物进行发酵培养,发酵培养条件如下:发酵起始PH值为6,温度为30°C,摇床转速为160r/ min,发酵时间为168h ;发酵过程结束后将得到的灵芝发酵菌体烘干至恒重;所述灵芝种子 培养物为灵芝菌丝体或灵芝子实体;
[0047] 所述桔梗水提物的提取工艺如下:取桔梗100g,用水煎制煮沸30min,倒出药澄, 补加适量冷水于药渣中,再煮沸20min,倒出药汁,之后再煮沸20min,倒出药汁,合并药汁, 过滤,于60°C下干燥,得到桔梗水提物;
[0048] (3)提取分离:包括以下步骤:
[0049] ①将干燥至恒重的灵芝发酵菌体粉碎后萃取三次,所述萃取方法为:先将灵芝发 酵菌体的粉碎物与氯仿提取液按1:14 (W: V)比例混合,接着将该混合液与浓度为5% (W: V) 的似!03溶液按照3:1 (V:V)比例混合,浸泡24h后,提取萃取液,将剩余物质按照本方法 进行下一次萃取;之后将几次萃取获得的萃取液合并,利用超声辅助设备,在400W超声输 出功率下,采用55kHz的超声频率,超声处理30min,停滞lOmin,再次超声处理30min ;然后 过滤分离;
[0050] ②过滤分离后得到滤液α和滤渣;先将滤渣按1:8 (W:V)比例加入浓度为5. 0% (W = V)NaHCO3溶液,利用超声辅助设备,在400W超声输出功率下,采用55kHz的超声频率, 超声处理30min,停滞lOmin,再次超声处理30min,之后利用孔径为0. 45 μ m的微孔滤膜过 滤得到滤液β ;接着将滤液α和滤液β合并,开启分散机,调整转速至5000r/min,分散 20min,得上清液;之后在4°C冰浴条件下,将上清液用6mol/L的稀盐酸进行酸化至pH = 3, 得到酸化液;
[0051] ③将酸化液用等体积的氯仿提取液萃取4次后,收集并合并萃取液,静置40min, 用孔径0. 45 μ m的微孔滤膜过滤,得到黄色清液;
[0052] ④将黄色清液在45°C条件下减压蒸干得到黄色粘稠液体,将黄色粘稠液体在 60°C水浴条件下干燥烘干至恒重;
[0053] 步骤①和步骤③所述的氯仿提取液是由氯仿和无水乙醇按照18:1的体积配比配 制而成。
[0054] 实施例1-2
[0055] 实施例1-2与实施例1-1区别在于:将培养基中添加的桔梗水提物替换为200mg/ L的金银花和枸杞醇提物。
[0056] 所述金银花和枸杞醇提物的提取工艺如下:将金银花和枸杞按照1 :1的质量配比 混合后,40目粉碎,之后用纱布包好扎紧,放入酒精回流提取仪中,用3倍的乙醇提取3h,获 得萃取液,将剩余物质再加入3倍的乙醇提取2h,再次获得萃取液,之后合并两次获得的萃 取液,旋蒸减压浓缩得到金银花和枸杞醇提稠状物;所述乙醇的体积百分浓度为95%。
[0057] 实施例1-3
[0058] 实施例1-3与实施例1-1区别在于:步骤(3)的第③步中所述的萃取液在静置前 先加入纤维素复合酶进行酶解,酶解温度50°C,pH = 6. 0,酶解时间20min,纤维素复合酶的 加入量为萃取液的2.0% (W:V);所述纤维素复合酶由纤维素酶、蛋白酶、果胶酶按比活力 5:3:2混合而成。
[0059] 实施例组2
[0060] 实施例2-1
[0061] -种灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法,所述灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法 包括如下步骤:
[0062] (1)配置培养基:所述培养基主要由以下组分配制而成(W/V):葡萄糖25. Og/L,玉 米粉10. 2g/L,麸皮粉9. 8g/L和蛋白胨4. 9g/L ;
[0063] (2)发酵培养:在培养基中添加400mg/L的桔梗水提物,之后接入灵芝种子培养物 进行发酵培养,发酵培养条件如下:发酵起始pH值为5. 5,温度为28°C,摇床转速为160r/ min,发酵时间为166h ;发酵过程结束后将得到的灵芝发酵菌体烘干至恒重;所述灵芝种子 培养物为灵芝菌丝体或灵芝子实体;
[0064] 所述桔梗水提物的提取工艺如下:取桔梗100g,用水煎制煮沸30min,倒出药澄, 补加适量冷水于药渣中,再煮沸20min,倒出药汁,之后再煮沸20min,倒出药汁,合并药汁, 过滤,于60°C下干燥,得到桔梗水提物;
[0065] (3)提取分离:包括以下步骤:
[0066] ①将干燥至恒重的灵芝发酵菌体粉碎后萃取三次,所述萃取方法为:先将灵芝发 酵菌体的粉碎物与氯仿提取液按〇. 8:14 (W:V)比例混合,接着将该混合液与浓度为4. 8% (W:V)的NaHCCV^液按照2. 8:1(V:V)比例混合,浸泡22h后,提取萃取液,将剩余物质按照 本方法进行下一次萃取;之后将几次萃取获得的萃取液合并,利用超声辅助设备,在380W 超声输出功率下,采用50kHz的超声频率,超声处理28min,停滞8min,再次超声处理28min ; 然后过滤分离;
[0067] ②过滤分离后得到滤液α和滤渣;先将滤渣按〇. 8:8(W:V)比例加入浓度为 4.8%(1:¥)似!1〇)3溶液,利用超声辅助设备,在3801超声输出功率下,采用501^的超声 频率,超声处理28min,停滞8min,再次超声处理28min,之后利用孔径为0. 4 μ m的微孔滤膜 过滤得到滤液β ;接着将滤液α和滤液β合并,开启分散机,调整转速至4800r/min,分散 18min,得上清液;之后在3. 8°C冰浴条件下,将上清液用5. 8mol/L的稀盐酸进行酸化至pH =2. 8,得到酸化液;
[0068] ③将酸化液用等体积的氯仿提取液萃取3次后,收集并合并萃取液,静置35min, 用孔径0. 5 μ m的微孔滤膜过滤,得到黄色清液;
[0069] ④将黄色清液在44°C条件下减压蒸干得到黄色粘稠液体,将黄色粘稠液体在 58°C水浴条件下干燥烘干至恒重;
[0070] 步骤①和步骤③所述的氯仿提取液是由氯仿和无水乙醇按照19:1的体积配比配 制而成。
[0071] 实施例2-2
[0072] 实施例1-2与实施例1-1区别在于:将培养基中添加的桔梗水提物替换为180mg/ L的金银花和枸杞醇提物。
[0073] 所述金银花和枸杞醇提物的提取工艺如下:将金银花和枸杞按照0. 8 :1的质量配 比混合后,30目粉碎,之后用纱布包好扎紧,放入酒精回流提取仪中,用2. 5倍的乙醇提取 2. 5h,获得萃取液,将剩余物质再加入2. 5倍的乙醇提取I. 5h,再次获得萃取液,之后合并 两次获得的萃取液,旋蒸减压浓缩得到金银花和枸杞醇提稠状物;所述乙醇的体积百分浓 度为93%。
[0074] 实施例2-3
[0075] 实施例1-3与实施例1-1区别在于:步骤(3)的第③步中所述的萃取液在静置前 可先加入纤维素复合酶进行酶解,酶解温度45°C,pH = 5. 5,酶解时间18min,纤维素复合酶 的加入量为萃取液的1.5% (W:V);所述纤维素复合酶由纤维素酶、蛋白酶、果胶酶按比活 力4. 8:2. 8:1.8混合而成。
[0076] 实施例组3
[0077] 实施例3-1
[0078] -种灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法,所述灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法 包括如下步骤:
[0079] (1)配置培养基:所述培养基主要由以下组分配制而成(W/V):葡萄糖27. Og/L,玉 米粉12. 2g/L,麸皮粉11. 8g/L和蛋白胨6. 9g/L ;
[0080] (2)发酵培养:在培养基中添加500mg/L的桔梗水提物,之后接入灵芝种子培养 物进行发酵培养,发酵起始pH值为6. 5,温度为32 °C,摇床转速为170r/min,发酵时间为 170h ;发酵过
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