粉、敷料、泡沫、膜、皮肤贴 剂、晶片、埋植剂、海绵、纤维、绷带和微乳剂；还可使用脂质体。典型载体包括醇、水、矿物 油、液体矿脂、白凡士林、甘油、聚乙二醇和丙二醇。可掺入渗透增强剂；参见例如Finnin和 Morgan，J.PharmSci，88(10) :955-958 (1999)。其他局部施用方法包括通过电穿孔、离子透 入疗法、超声透入疗法、超声促渗和显微操作针或无针（例如Powderject?，Bioject?等） 递送。局部施用的制剂可设计为立即和/或改进释放。改进释放制剂包括延迟、持续、脉冲、 控制、靶向和程控释放。
[0099] 免疫原性组合物还可鼻内或通过吸入施用，通常采取来自干粉吸入器的干粉的形 式（单独或作为混合物，例如在具有乳糖的干共混物中，或作为混合组分颗粒，例如与磷脂 例如磷脂酰胆碱混合），或作为来自增压容器、泵、喷雾器、雾化器（优选使用电流体动力学 产生细雾的雾化器）的气溶胶喷雾。它还可经由喷洒器施用，伴随或不伴随合适推进剂例 如1，1，1，2-四氟乙烷或1，1，1，2, 3, 3, 3-七氟丙烷的使用。对于鼻内使用，粉末可包含生 物粘附剂，例如壳聚糖或环糊精。增压容器、泵、喷雾器、雾化器或喷洒器含有本发明的一种 或多种化合物的溶液或悬浮液，包含例如乙醇，水性乙醇或用于分散、增溶或延长活性剂释 放的合适替代试剂，作为溶剂的一种或多种推进剂和任选的表面活性剂例如三油酸脱水山 梨醇酯、油酸或寡聚乳酸。
[0100] 在干粉或悬浮液制剂中使用之前，药物产品一般微粒化至适合于通过吸入递送的 大小（通常小于约5微米）。这可通过任何适当的粉碎方法来实现，例如螺旋喷流粉碎、流 化床喷流粉碎、超临界流体处理（以形成纳米颗粒）、高压匀浆化或喷雾干燥。
[0101] 用于吸入器或吹入器的胶囊（例如由明胶或羟丙基甲基纤维素制备）、泡罩和药 液筒可配制为含有本发明的化合物的粉末混合物。合适的粉基可为乳糖或淀粉，并且性能 改进剂可为1-亮氨酸、甘露醇或硬脂酸镁。乳糖可为无水的，或采取一水合物的形式。其 他合适的赋形剂包括右旋糖酐、葡萄糖、麦芽糖、山梨糖醇、木糖醇、果糖、蔗糖和海藻糖。
[0102] 使用电流体动力学产生细雾，用于雾化器的合适溶液制剂可含有约1yg至约 20mg本发明的化合物/驱动，并且驱动体积可从约lyl到约100yl不等。在另一个实施 例中，化合物的量/驱动的范围可为约100yg至约15mg、或约500yg至约10mg、或约lmg 至约10mg、或约2. 5yg至约5mg。在另一个实施例中，驱动体积的范围可为约5y1至约 75yl、或约10yl至约50yl、或约15yl至约25yl。典型制剂可包含本发明的化合物、 丙二醇、无菌水、乙醇和氯化钠。可代替丙二醇使用的可替代溶剂包括甘油和聚乙二醇。
[0103] 吸入/鼻内施用的制剂可使用例如PLGA配制为立即和/或改进释放。改进释放 制剂包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和程控释放。
[0104] 在干粉吸入器和气溶胶的情况下，剂量单位一般借助于递送计量的量的阀来确 定。依照本发明的单位通常安排为施用含有约long至约l〇〇yg本发明化合物的计量的剂 量或"喷烟（puff)"。在另一个实施例中，在计量的剂量中施用的化合物量为约50ng至约 75yg、或约100ng至约50yg、或约500ng至约25yg、或约750ng至约10yg、或约1yg至 约5yg。总体日剂量通常在约1yg至约lOOmg的范围内，其可在单一剂量中施用，或更通 常地，作为全天的分份剂量施用。在另一个实施例中，总体日剂量的范围可为约50yg至约 75mg、或约100 y g至约50mg、或约500 y g至约25mg、或约750 y g至约10mg、或约lmg至约5mg〇
[0105] 本发明的免疫原性组合物还可经口或口服施用，即通过口或经由口进入受试者的 体内，并且涉及吞咽或通过口腔粘膜（例如舌下或经颊吸收或两者）转运。合适的调味料 例如薄荷脑和左薄荷脑，或甜味剂例如糖精或糖精钠，可加入预期用于经口或口服施用的 那些本发明制剂中。
[0106] 本发明的免疫原性组合物可经直肠或阴道施用，例如采取栓剂、子宫托或灌肠剂 的形式。可可脂是常规栓剂基质，但适当时可使用多种替代物。直肠/阴道施用的制剂可 配制为立即和/或改进释放。改进释放制剂包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和程控释放。
[0107] 本发明的免疫原性组合物还可直接施用于眼或耳，通常采取微粒化悬浮液的滴或 在等渗pH调整的无菌盐水中的溶液的形式。其他适合于眼和耳施用的制剂包括软膏、生物 可降解的（例如可吸收的凝胶海绵、胶原）和生物不可降解的（例如硅酮）埋植剂、晶片、 透镜和微粒或囊状系统，例如类脂质体（niosome)或脂质体。聚合物例如交联聚丙烯酸，聚 乙烯醇，透明质酸，纤维素聚合物例如羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素或甲基纤维素，或 杂多糖聚合物例如琼脂糖胶（gelangum)，可连同防腐剂例如苯扎氯按一起掺入。此类制剂 还可通过离子透入疗法递送。眼/耳施用的制剂可配制为立即和/或改进释放。改进释放 制剂包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和程控释放。
[0108] 本发明的免疫原性组合物不受限于可用于上述类型的药物制剂的常规、生理学可 接受的载体、佐剂或其他成分的选择。由上述组分制备具有适当PH、等渗性、稳定性及其他 常规特征的这些药学可接受的组合物在本领域技术内。
[0109] 一般而言，关于本发明的免疫原性组合物组分的适当"有效量"或剂量的选择还将 基于在一种或多种免疫原性组合物中采用的抗原的身份，以及受试者的健康状况，最尤其 包括免疫接种的受试者的一般健康、年龄和重量。施用方法和途径，以及免疫原性组合物中 的另外组分的存在，也可影响组合物的剂量和量。此类选择以及有效剂量的上调或下调在 本领域技术内。在受试者中诱导免疫应答优选保护性应答，或产生外源效应而无显著不利 副作用所需的组合物量，取决于这些因素而改变。合适的剂量由本领域技术人员容易地确 定。
[0110] 类似地，免疫原性组合物施用次序和个别施用之间的时间段可由本领域技术人员 基于宿主的体格特征和对施加方法的确切应答而选择。此类最佳化预期完全在本领域技术 内。
[0111] 本发明的免疫原性组合物还可用于制备用于治疗和/或预防动物中的C型流感病 毒感染的药剂。
[0112]重组抟术
[0113] 在本发明的另外其他实施例中，免疫原性组合物可包含重组疫苗。此类重组疫苗 一般包含载体和包含抗原的异源插入片段。在一些实施例中，异源插入片段包含如上所 述的编码本发明的氨基酸序列的一种或多种核酸序列，例如SEQIDN0:4、6、8、10、12、14、 16-20。插入片段可任选包含异源启动子，例如本领域已知的合成启动子。作为另外一种 选择，宿主载体的启动子可对插入片段的表达施加转录控制。启动子的合适非限制性例子 (其可为天然或异源的，取决于载体的选择）为H6牛痘启动子、13L牛痘启动子、42K痘病毒 启动子、7. 5K牛痘启动子和Pi牛痘启动子。
[0114] 合适的载体已在本专利申请中的其他地方描述。在一些实施例中，载体可为病毒 载体，包括但不限于牛痘和痘病毒载体，例如副痘、浣熊痘、猪痘和不同禽痘载体（例如金 丝雀痘和鸡痘毒株）。目前考虑的病毒毒株包括D1701、ALVAC、TROVAC、NYVAC毒株。一 般地，病毒宿主非必需的序列是用于本发明的插入片段的合适插入位点。上述毒株在本领 域中得到充分表征，并且这些载体中的一些插入位点是众所周知的。参见例如美国专利号 5, 174, 993 ;美国专利号5, 505, 941，美国专利号5, 766, 599,美国专利号5, 756, 103,美国专 利号7, 638, 134,美国专利号6, 365, 393。
[0115] 存在可用于克隆和表达本发明的核苷酸序列的几种已知方法或技术。例如，序列 可作为限制片段分离且克隆到克隆和/或表达载体内。序列还可PCR扩增且克隆到克隆和 /或表达载体内，或它们可通过这两种方法的组合进行克隆。一般可遵循如下述中所述的 本领域已知且未具体描述的标准分子生物学技术：Sambrook等人，MolecularCloning:A LaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,NewYork(1989)；Ausubel 等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley和Sons，Baltimore， Maryland(1989) ;Perbal，APracticalGuidetoMolecularCloning,Johnffiley&Sons, NewYork(1988) ;Watson等人，RecombinantDNA，ScientificAmericanBooks，NewYork; Birren等人（编辑）GenomeAnalysis:ALaboratoryManualSeries，第 1-4卷ColdSpring HarborLaboratoryPress，NewYork(1998);以及美国专利号 4, 666, 828 ;4, 683, 202; 4, 801，531 ;5, 192, 659和5, 272, 057中所述的方法。聚合酶链反应（PCR) -般如PCR Protocols：AGuidetoMethodsandApplications，AcademicPress，SanDiego,CA(1990) 中所述进行。
[0116] 本发明涵盖原核和真核表达系统包括载体和宿主细胞的使用，所述表达载体可用 于表达由本发明的核苷酸序列表达的截短和全长形式的重组多肽两者。多种宿主-表达载 体系统可用于表达本发明的多肽。此类宿主-表达系统还代表通过其可克隆且随后纯化目 的编码序列的媒介物。本发明还提供了宿主细胞，当用适当载体或核苷酸序列转化或转染 时，所述宿主细胞可表达所编码的本发明的多肽基因产物。此类宿主细胞包括但不限于微 生物，例如用含有编码序列的重组细菌噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细 菌（例如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌（B.subtilis));用含有基因产物编码序列的重组酵母表 达载体转化的酵母（例如酵母属（Saccharomyces)、毕赤酵母属（Pichia));用含有编码序 列的重组病毒表达载体（例如杆状病毒）感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体（例 如花椰菜花叶病毒，CaMV;烟草花叶病毒，TMV)感染或用含有编码序列的重组质粒表达载 体（例如Ti质粒）转化的植物细胞系统；或容纳含有启动子的重组表达构建体的哺乳动物 细胞系统（例如C0S、CH0、BHK、293、3T3)，所述启动子源自哺乳动物细胞的基因组（例如金 属硫蛋白启动子）或源自哺乳动物病毒（例如腺病毒晚期启动子；牛痘病毒7. 5K启动子）。
[0117] 一般地，本发明的载体可源自但不限于细菌质粒、细菌噬菌体、酵母附加体、酵母 染色体元件、病毒（例如如上所述）、哺乳动物染色体和其组合，例如源自质粒和细菌噬菌 体遗传元件包括但不限于粘粒和噬菌粒的那些。
[0118] 本发明的载体可用于多肽的表达。一般地，本发明的载体包括与多核苷酸可操作 地连接的顺式作用调节区，所述多核苷酸编码待表达的多肽。调节区可为组成型或诱导型 的。适当的反式作用因子通过体外翻译系统由宿主、互补载体或在引入宿主内之后由载体 本身提供。
[0119] 本发明的载体可包括通常包括在表达或展示载体中的任何元件，包括但不限于复 制起点序列、一种或多种启动子、抗生素抗性基因、前导区或信号肽序列、多种标签序列、可 编码其多肽赋予抗生素抗性的基因的填充序列、限制位点、核糖体结合位点、翻译增强子 (能够形成茎环结构用于mRNA转录后稳定性的序列）、编码缺乏终止密码子的氨基酸的序 列和编码细菌外壳蛋白质的序列。
[0120] 检测、诊断方法
[0121] 本发明提供了诊断在动物中通过牛C型流感病毒的感染的方法。该诊断可经由多 种诊断方法中的任一种完成，包括但不限于ELISA、蛋白质印迹、PCR、基于核酸的测定包括 DNA或RNA印迹分析以及测序。作为另外一种选择，可采用基于蛋白质的测定。在基于蛋白 质的测定中，可从动物中分离怀疑受感染的细胞或组织。可由此类细胞或组织制备细胞提 取物，并且可经受例如使用可区别地检测病毒存在的适当抗体的蛋白质印迹。