一种墨西菊宁Ⅰ的制备方法及抗肿瘤应用
【技术领域】
[0001] 本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种墨西菊宁I的制 备方法及抗肿瘤应用。
【背景技术】
[0002] 墨西菊宁I (Mexicanin I)为倍半猫内醋类物质，CAS号41653-83-2， mp. 257-260°C，分子式C15H18O4,分子量262. 31，结构式为：
墨西菊宁I来源于菊科（Compositae)牙鸟葱叶堆心菊Helenium scorzoneraefolium(DC.) Gray的地上部分。研宄表明，墨西菊宁I具有抗溃疡作用，大凰口服40mg/kg，对EtOH所致 罝损害的保护作用为〇. 25 (无损害）；具有细胞毒活性，对KB细胞的ED50为1. 9 μ g/mL。
[0003] 通过文献检索，国内尚未见墨西菊宁I用于制备抗肿瘤药物。
【发明内容】
[0004] 为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种墨西菊宁I的制备方 法及抗肿瘤应用。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案： 墨西菊宁I的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 以鸦葱叶堆心菊地上部分为原料，切成段状，放入高速组织捣碎机，在转速为 18000rpm条件下保持3-5min后，过40目筛备用； (2) 原料按照料液比1:4-6 (g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入0. 3-0. 5%的纤维 素酶，在超声功率500-700W、45-60°C条件下酶解60-90min，得到酶解原料； (3) 将酶解原料投入加入闪式提取器中，加入提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取 液，浓缩干燥得到粗提物； (4) 将所得粗提物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，氯仿-甲醇溶剂系统 梯度洗脱，收集墨西菊宁I流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶； (5) 将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到墨西菊宁I结晶。
[0006] 所述步骤（2)中乙醇水溶液体积百分比为70-80%。
[0007] 所述步骤（2)中提取溶剂为70-85%的乙醇溶液。
[0008] 所述步骤（3)中闪式提取电压为150V，提取时间为3_5min。
[0009] 所述步骤（4)中所述高压硅胶柱层析，硅胶目数为200目，耐压35MPa，柱内径为 250mm，层析柱径高比为I :10。
[0010] 所述步骤（4)中氯仿-甲醇的体积比为1:1-1:13。
[0011] 所述制备的墨西菊宁I，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、 胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
[0012] 采用本法制备墨西菊宁I，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且低污染； 添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。
[0013] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0014] 实施例1 : 墨西菊宁I的制备 以鸦葱叶堆心菊地上部分为原料，切成Icm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为 18000rpm条件下保持5min后，过40目筛备用，称取lkg，按照料液比1:4(g/ml)的比例加入 80%乙醇水溶液后，再加入0. 5%的纤维素酶，在超声功率700W、50°C条件下酶解70min，得 到酶解原料，加入闪式提取器中，加入6L80%的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V， 提取时间为3min，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用 甲醇溶解，干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径为 250mm，层析柱径高比为1 :10,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:6、1:13梯度洗脱，收集墨西菊 宁I流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到墨西菊宁I结晶，含量 为 95. 8%。
[0015] 实施例2: 墨西菊宁I的制备 以鸦葱叶堆心菊地上部分为原料，切成Icm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为 18000rpm条件下保持3min后，过40目筛备用，称取lkg，按照料液比1:6 (g/ml)的比例加 入70%乙醇水溶液后，再加入0. 4%的纤维素酶，在超声功率700W、45°C条件下酶解90min， 得到酶解原料，加入闪式提取器中，加入4. 5L75%的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为 150V，提取时间为5min，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提 物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径 为250mm，层析柱径高比为1 :10,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:7、1:13梯度洗脱，收集墨西 菊宁I流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到墨西菊宁I结晶，含 量为94. 4%。
[0016] 实施例3: 墨西菊宁I的制备 以鸦葱叶堆心菊地上部分为原料，切成Icm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为 18000rpm条件下保持5min后，过40目筛备用，称取lkg，按照料液比1:5(g/ml)的比例加入 75%乙醇水溶液后，再加入0. 5%的纤维素酶，在超声功率600W、55°C条件下酶解75min，得 到酶解原料，加入闪式提取器中，加入4L70%的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V， 提取时间为4min，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用 甲醇溶解，干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径为 250mm，层析柱径高比为1 :10,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:5、1:12梯度洗脱，收集墨西菊 宁I流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到墨西菊宁I结晶，含量 为 95. 4%。
[0017] 实施例4: 墨西菊宁I的制备 以鸦葱叶堆心菊地上部分为原料，切成Icm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为 18000rpm条件下保持5min后，过40目筛备用，称取lkg，按照料液比1:6(g/ml)的比例加入 75%乙醇水溶液后，再加入0. 3%的纤维素酶，在超声功率500W、60°C条件下酶解60min，得 到酶解原料，加入闪式提取器中，加入5L85%的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V， 提取时间为3min，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用 甲醇溶解，干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径为 250mm，层析柱径高比为1 :10,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:7、1:13梯度洗脱，收集墨西菊 宁I流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到墨西菊宁I结晶，含量 为 94. 9%。
[0018] 实施例5: 墨西菊宁I的抗肿瘤应用 1、材料 动物：昆明种小鼠，雌雄各半性，体重20±2g，由南京中医药大学提供。
[0019] 细胞株：Sarc〇ma 180腹水型瘤株（S180)，由中国科学院上海药物研宄所提供。
[0020] 2、方法 取50只小鼠，每只小鼠左腋下接种S18tl瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为生 理盐水对照组（NS组)、阳性对照组、墨西菊宁I低剂量组（2mg/kg)、中剂量组（4mg/kg)、高 剂量组（8mg/kg)。接种24h后墨西菊宁I给药组灌胃给药，连续7,阳性对照组试验期间腹 腔注射2次，隔日给药。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药 24h后断颈处死，称重，并计算抑瘤率。
[0021] 3、结果 本发明植物提取物对小鼠 S18tl皮下荷瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为70. 86-76. 04%， 结果见表1。
[0022] 抑瘤率（％)=( 1-治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重）X% 表1本发明植物提取物对S18tl皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（n=10, ^ ±S)
注：与阳性对照组相比，#P < 0. 01。
【主权项】
1. 一种墨西菊宁I的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 以鸦葱叶堆心菊地上部分为原料，切成段状，放入高速组织捣碎机，在转速为 18000rpm条件下保持3-5min后，过40目筛备用； (2) 原料按照料液比1:4-6 (g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入0. 3-0. 5%的纤维 素酶，在超声功率500-700W、45-60°C条件下酶解60-90min，得到酶解原料； (3) 将酶解原料投入加入闪式提取器中，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩干燥得 到粗提物； (4) 将所得粗提物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，氯仿-甲醇溶剂系统 梯度洗脱，收集墨西菊宁I流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶； (5) 将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到墨西菊宁I结晶。2. 如权利要求1所述的墨西菊宁I的制备方法，其特征在于所述步骤（2)中乙醇水溶 液体积百分比为70-80%。3. 如权利要求1所述的墨西菊宁I的制备方法，其特征在于所述步骤（2)中提取溶剂 为70-85%的乙醇溶液。4. 如权利要求1所述的墨西菊宁I的制备方法，其特征在于所述步骤（3)中闪式提取 电压为150V，提取时间为3-5min。5. 如权利要求1所述的墨西菊宁I的制备方法，其特征在于所述步骤（4)中所述高压 硅胶柱层析，硅胶目数为200目，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1 :10。6. 如权利要求1所述的墨西菊宁I的制备方法，其特征在于所述步骤（4)中所述氯 仿-甲醇的体积比为1:1-1:13。7. 根据权利要求1~6所述方法制备的墨西菊宁I，在其口服配方中添加肠吸收促进 剂。8. 根据权利要求7所述的墨西菊宁I，其特征在于肠吸收促进剂包含中链脂肪酸盐、 胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
【专利摘要】本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及一种墨西菊宁Ⅰ的制备方法及抗肿瘤应用。制备方法包括以下步骤：（1）以鸦葱叶堆心菊地上部分为原料，粉碎；（2）原料加入乙醇水溶液后，再加入纤维素酶，在超声条件下酶解，得到酶解原料；（3）将酶解原料投入加入闪式提取器中，进行闪式提取，过滤、浓缩干燥得到粗提物；（4）粗提物干法上样至高压硅胶柱层析纯化，氯仿-甲醇溶剂系统梯度洗脱，收集流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶；（5）重结晶。采用本发明制备方法，工艺操作简便、得率高，污染小，适合高纯度墨西菊宁Ⅰ的生产。墨西菊宁Ⅰ具有抗肿瘤作用，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，利于提高生物利用度。
【IPC分类】A61P35/00, C07D307/93
【公开号】CN104910115
【申请号】CN201510263789
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月22日