靶向脂质体的制备及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及靶向脂质体的制备及其应用，具体涉及肝靶向脂质体的制备及其应 用。
【背景技术】
[0002] 肝脏相关疾病是影响人类健康的重要疾病之一，我国每年因终末期肝病死亡 人数超过30万。然而目前用于治疗肝病的药物多为系统给药，具有肝脏分布少、体内 不稳定、肝外副作用较多等缺点，限制了药物的临床应用。因此，如何将药物高效地传 递至肝脏，更好地发挥治疗作用、降低肝外副作用是肝病治疗领域亟待解决的重大问 题（Poelstra K, Prakash J, Beljaars L. Drug targeting to the diseased liver[J]· Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society, 2012, 161(2) : 188-197)。肝脏靶向给药系统可以将药物特异性靶向肝脏，有利 于肝脏富集，减少药物用量及降低全身的毒副作用（贺玲，李健和.肝靶向给药系统的研 究进展[J].研究进展，2010，17(9):15-17)。脂质体由于其免疫原性低、载药范围广，具 有保护药物活性、提高稳定性、缓释等优点，是最常用的载药模型之一。然而，普通的脂质 体并不能完成靶向传递的功效，因此需对普通脂质体进行靶向修饰，使其达到主动靶向 (Pranali PD,Swati BjVladimir PT, et al. Current trends in the use of liposomes for tumor targeting[J]· Nanomedicine，2013, 8(9):1509-1528)。
[0003] 乙型肝炎病毒是一种嗜肝类病毒，其外膜蛋白的PreSl区是与肝细 胞受体结合的重要部位（Liang TJ. Hepatitis B:The Virus and Disease[J]· Hepatology，2009, 49 (5) :S13-S21)。最近研究揭示，钠离子-牛磺胆酸共转运多肽NTCP (Sodium taurocholate cotransporting polypeptide)是 HBV 的功能性受体（Yan H，Zhong GjXu Gj et al. Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus [J] · Elife，2012, I (e00049)，包括 D 基因 型preS/2-48在内的源于PreSl的多段多肽均可以与其特异性结合（Gripon P，Cannie I, Urban S. Efficient inhibition of hepatitis B virus infection by acylated peptides derived from the large viral surface protein [J].J Virol, 2005, 79(3):1613-1622 ； Petersen Jj Dandri Mj Mier Wj et al.Prevention of hepatitis B virus infection in vivo by entry inhibitors derived from the large envelope protein[J]. Nat Biotechnolj 2008, 26(3):335-341 ；Schulze A, Schieck A, Ni Yj et al. Fine mapping of pre-S sequence requirements for hepatitis B virus large envelope protein-mediated receptor interaction [J]· J Virol，2010, 84(4) : 1989-2000)。在本发明申请的一个实施 例中，以 C 基因型 HBVpreS/13-32myl: (myr-GTNLSVPNPLGFFPDHQLDP)作为靶向序列，偶联 Mal-PEG-DSPE作为导向性材料，制备具有肝细胞靶向性的纳米脂质体，构建一种新型的肝 细胞靶向给药系统，并在细胞模型上对其靶向性进行验证(任浩洋、常红霞、蔡雯雯，一种具 有肝细胞选择性的脂质体的导向性评价[J].解放军药学学报，2007, 23(1) :37-40)。
【发明内容】
[0004] 在本发明的一个实施例中，以HBVpreS/13-32胃r作为靶向序列（SEQ IDN0. 3)， 将其化学偶联到Mal-PEG-DSPE (马来酰亚胺-聚乙二醇-硬脂酰基磷脂酰乙醇胺)，生 成HBVpreS/13-32myl:-PEG-DSPE ;采用乙醇注入法制备脂质体，包裹荧光素钠 （Fluorescein 8〇乜11111^5)形成耶￥?代5/13-32胃1:45-1^(^，以稳定表达阶1^的!1印62为细胞模型，分析纳 米脂质体靶向性。
[0005] 本发明的一个实施例结果显示，合成的靶向脂质体呈类圆形，大小均匀，粒径为 (94. 09 ±9. 2) nm，达到纳米级别；有效包裹荧光素钠，包封率为89. 32 ±1. 02% ;与无靶向修 饰脂质体相比，可递送更多的荧光素钠进入细胞内。HBVpreS/13-32m!T修饰的靶向脂质体， 有较高的包封率，为纳米脂质体，能特异性地通过NTCP靶向肝细胞，有望成为一种新型的 肝细胞靶向给药系统。
[0006] 因此，本发明提供一种靶向肝细胞的化合物，该化合物的结构如下式1所示：
[0007] X-B (式 1)
[0008] 式 1 中，
[0009] X为与钠离子-牛磺胆酸共转运多肽（NTCP)特异性结合的源于乙型肝炎病毒外膜 蛋白PreSl区的多肽；和
[0010] B为下式2所示的马来酰亚胺-聚乙二醇-硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚合物：
[0011]
[0012] (式 2)
[0013] 式2中，η为2 - 100的整数，DSPE为硬脂酰基磷脂酰乙醇胺；
[0014] 其中，X通过式2的马来酰亚胺部分与B相连。
[0015] 在一个具体实施例中，X为源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl区的第2-119位氨 基酸的片段。
[0016] 在一个具体实施例中，所述X优选地为源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl区的第 13-119位氨基酸的片段。
[0017] 在一个具体实施例中，所述X进一步优选地为源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl 区的第13-59位氨基酸的片段。
[0018] 在一个具体实施例中，所述X进一步优选地为源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl 区的第13-49位氨基酸的片段。
[0019] 在一个具体实施例中，所述X进一步优选地为源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl 区的第13-39位氨基酸的片段。
[0020] 在一个具体实施例中，所述X进一步优选地为源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl 区的第13-32位氨基酸的片段。
[0021] 在一个具体实施例中，所述X的N端被脂肪酸或胆固醇修饰。
[0022] 在一个具体实施例中，所述X的N端被豆蘧酸修饰。
[0023] 在一个具体实施例中，所述片段的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1 - 3中任一项所示。
[0024] 在一个具体实施例中，η为2 - 80的整数，优选5 - 50的整数，优选10 - 40的 整数。
[0025] 在一个具体实施例中，聚乙二醇的分子量在600 - 2500的范围之内，优选为 1000 - 2500,更优选为 1500 - 2000。
[0026] 在一个具体实施例中，X所示多肽在其C末端还含有半胱氨酸残基，通过该半胱氨 酸残基与B的马来酰亚胺部分相连。
[0027] 在一个具体实施例中，X所示多肽在其C末端还含有半胱氨酸残基，其氨基酸序列 如 SEQ ID NO:4 所示。
[0028] 在一个具体实施例中，X所示多肽的N末端被豆蘧酰化修饰。
[0029] 在一个具体实施例中，本发明的化合物如下式3所示：
[0030]
[0031] 式3中，X、η和DSPE如上文所定义。
[0032] 在一个具体实施例中，本发明的化合物如下式4所示：
[0034] 式中的聚乙二醇的分子量为2000。
[0035] 本发明涉及一种用于递送药物的组合物，该组合物含有本发明式1、2、3或4所示 的化合物，以及磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG-DSPE中的任一种、任意两种或全部三种。
[0036] 在一个具体实施例中，本发明用于递送药物组合物含有本发明化合物和磷脂酰胆 碱，还任选地含有胆固醇和/或PEG-DSPE。
[0037] 在一个具体实施例中，本发明用于递送药物组合物中，本发明化合物、磷脂酰胆 碱、胆固醇和PEG-DSPE的重量比为1~100:1~1000:0~500:0~500。
[0038] 在一个具体实施例中，所述用于递送药物的组合物是脂质体。
[0039] 本发明还涉及一种药物组合物，该药物组合物含有本发明的脂质体及治疗有效量 的药物。
[0040] 本发明还涉及本发明式1、2、3和4所示化合物在制备治疗乙型肝炎或抑制乙型肝 炎病毒的药物中的用途。
【附图说明】
[0041] 图 1 显示 HBVpreS/13-32，-PEG-DS