结核分枝杆菌复合群或非结核分枝杆菌的鉴定系统的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种结核分枝杆菌复合群或非结核分枝杆菌的鉴定系统。
【背景技术】
[0002]目前全球应用最为普遍的鉴别结核分枝杆菌复合群(Mycobacteriumtuberculosis complex, MTC)和非结核分枝杆菌(Non-tuberculous mycobacteria, NTM)的方法是含对硝基苯甲酸(p-Nitrobenzoic Acid, PNB/PNBA)的鉴别培养基法。根据不同的报道，98%-100%的MTC在含500ug/ml的罗氏培养基上不能够生长；而NTM中除个别种的分枝杆菌，或个别种中的少量菌株外，都能够耐受500ug/ml的PNB，在固体培养基上生长良好。液体培养基情况类似，但所使用PNB临界浓度多在250?500ug/ml之间。PNB选择性培养基法以其简单、廉价，相对可靠而在全球广泛使用。在液体培养基中MTC的报告时间为4-11天，NTM的报告时间为2-10天，而在PNB选择性罗氏培养基上需要20天以上。因此应用含PNB培养基鉴别MTC与NTM所需报告结果时间太长，效率低。
【发明内容】
[0003]在下文中给出关于本发明的简要概述，以便提供关于本发明的某些方面的基本理解。应当理解，这个概述并不是关于本发明的穷举性概述。它并不是意图确定本发明的关键或重要部分，也不是意图限定本发明的范围。其目的仅仅是以简化的形式给出某些概念，以此作为稍后论述的更详细描述的前序。
[0004]本发明实施例的目的是针对上述现有技术的缺陷，提供一种应用PNB进行快速鉴别结核分枝杆菌复合群或非结核分枝杆菌的系统。
[0005]为了实现上述目的，本发明采取的技术方案是:
[0006]一种结核分枝杆菌复合群或非结核分枝杆菌的鉴定系统，其特征在于，包括:
[0007]磨菌瓶，用于盛放刮取的含有结核分枝杆菌复合群或非结核分枝杆菌的菌落，所述菌落为抗酸菌的菌落；
[0008]无菌试管，用于盛放菌液和灭菌蒸馏水，所述灭菌蒸馏水的加入量为调节无菌试管中菌液浓度为20-40mg/ml ；
[0009]溶液A的调制控制装置，包括:盛液器、多个取液器、兑取器和孵育器，至少一取液器用于取无菌试管中的菌液至盛液器，兑取器用于按照每毫升中加入3-6 μ 15%对硝基苯甲酸；孵育器用于为盛液器提供37°C下孵育12-24小时；至少一取液器用于向盛液器加入400-500 μ 115%三氯乙酸使反应体系酸化，加入1-1.5ml灭菌蒸馏水，以及加入200-300 μ 10.1%亚硝酸钠；孵育器还用于为盛液器提供冰上孵育10-20分钟，使对氨基苯甲酸重氮化；至少一取液器还用于向盛液器加入200-300 μ 10.5%氨基磺酸氨，中和亚硝酸钠；孵育器还用于为盛液器提供冰上孵育2-4分钟；至少一取液器还用于向盛液器加入l-2ml0.1%N- (1-萘基)乙二胺二盐酸盐，显色；
[0010]对氨基苯甲酸水溶液调制控制装置，包括:至少5个盛液器，用于盛放用灭菌蒸馏水配制的至少5个梯度浓度的对氨基苯甲酸水溶液；
[0011]分光光度计，用于分别读取经溶液A的调制控制装置处理后的溶液A和经溶液A的调制控制装置处理后的对氨基苯甲酸水溶液的吸光度值。
[0012]与现有技术相比，本发明的有益效果是:
[0013]采用本发明的系统鉴别MTC或NTM，具有简便、快速、廉价的优点，本发明缩短了鉴别MTC与NTM的时间，而且操作简便、价格便宜。
【附图说明】
[0014]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0015]图1为本发明实施例提供的对氨基苯甲酸(PABA)浓度标准曲线图。
【具体实施方式】
[0016]为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。在本发明的一个附图或一种实施方式中描述的元素和特征可以与一个或更多个其它附图或实施方式中示出的元素和特征相结合。应当注意，为了清楚的目的，附图和说明中省略了与本发明无关的、本领域普通技术人员已知的部件和处理的表示和描述。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0017]本发明提供一种结核分枝杆菌复合群或非结核分枝杆菌的鉴定系统，包括:
[0018]一种结核分枝杆菌复合群或非结核分枝杆菌的鉴定系统，其特征在于，包括:
[0019]磨菌瓶，用于盛放刮取的含有结核分枝杆菌复合群或非结核分枝杆菌的菌落，所述菌落为抗酸菌的菌落；
[0020]无菌试管，用于盛放菌液和灭菌蒸馏水，所述灭菌蒸馏水的加入量为调节无菌试管中菌液浓度为20-40mg/ml ；
[0021]溶液A的调制控制装置，包括:盛液器、多个取液器、兑取器和孵育器，至少一取液器用于取无菌试管中的菌液至盛液器，兑取器用于按照每毫升中加入3-6 μ 15%对硝基苯甲酸；孵育器用于为盛液器提供37°C下孵育12-24小时；至少一取液器用于向盛液器加入400-500 μ 115%三氯乙酸使反应体系酸化，加入1-1.5ml灭菌蒸馏水，以及加入200-300 μ 10.1%亚硝酸钠；孵育器还用于为盛液器提供冰上孵育10-20分钟，使对氨基苯甲酸重氮化；至少一取液器还用于向盛液器加入200-300 μ 10.5%氨基磺酸氨，中和亚硝酸钠；孵育器还用于为盛液器提供冰上孵育2-4分钟；至少一取液器还用于向盛液器加入l-2ml0.1%N- (1-萘基)乙二胺二盐酸盐，显色；
[0022]对氨基苯甲酸水溶液调制控制装置，包括:至少5个盛液器，用于盛放用灭菌蒸馏水配制的至少5个梯度浓度的对氨基苯甲酸水溶液；
[0023]分光光度计，用于分别读取经溶液A的调制控制装置处理后的溶液A和经溶液A的调制控制装置处理后的对氨基苯甲酸水溶液的吸光度值。
[0024]具体的采用上述的装置，求取溶液A和对氨基苯甲酸水溶液吸光度值的方法如下:
[0025]a.求取溶液A吸光度值:
[0026]I)用取液器取无菌试管中的菌液加入盛液器中，用兑取器给盛液器中加入对硝基苯甲酸，对硝基苯甲酸的加入量为每毫升菌液中加入3-6μ 15%的对硝基苯甲酸，盛液器放入孵育器中，37°C孵育12-24小时；
[0027]2)用取液器给盛液器中加入400-500 μ 115%三氯乙酸使反应体系酸化；
[0028]3)用取液器给盛液器中加入1-1.5ml灭菌蒸馏水；
[0029]4)用取液器给盛液器中加入200-300 μ 10.1%亚硝酸钠，在孵育器中冰上孵育10-20分钟，使对氨基苯甲酸重氮化；
[0030]5)用取液器给盛液器中加入200-300 μ 10.5%氨基磺酸氨，中和亚硝酸钠,在孵育器中冰上孵育2-4分钟；
[0031]6)用取液器给盛液器中加入l_2ml0.1%N_ (1-萘基)乙二胺二盐酸盐，显色；
[0032]7)在分光光度计上读取吸光度值；
[0033]b.求取以下对氨基苯甲酸水溶液吸光度值:
[0034]用灭菌蒸馏水配制至少5个梯度浓度对氨基苯甲酸水溶液，参照步骤a的求取吸光度值的方法处理对氨基苯甲酸水溶液，然后读取吸光度值。
[0035]采用本发明的系统，通过对硝基苯甲酸还原试验对所述菌液进行鉴定，具有简便、快速和廉价的优点。
[0036]为了得到更准确的鉴定结果，本发明的鉴定系统，还包括:
[0037]涡旋振荡器，用于将盛放菌落的磨菌瓶振荡10 - 20秒；
[0038]无菌吸管，用于吸取振荡后的磨菌瓶上部的菌液；所述菌液为将振荡后的磨菌瓶静置3-7分钟，然后打开瓶盖，加入1-3毫升灭菌蒸馏水，静置，使磨菌瓶中的大块物质沉淀后所得到的菌液；所述菌液用于放入所述无菌试管中。
[0039]优选地，为了得到更准确的鉴定结果，所述磨菌瓶的菌落为临床标本初分