基于积雪草酸及其特定盐的治疗剂的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请是国际申请日为2009年01月08日，国际申请号为PCT/US2009/030458,国 家申请号为200980108867. 6,进入中国国家阶段日期为2010年09月09日，发明名称为基 于积雪草酸及其特定盐的治疗剂的申请的分案申请。
[0002] 优先权要求
[0003] 本申请要求以下美国临时申请的优先权：申请号为61/006,432,申请日为2008年 1月11日，并在此全文引用并结合于本申请中。
技术领域
[0004] 本发明涉及化学领域，具体涉及一种积雪草酸的制备方法、以及一种积雪草酸氨 基丁三醇盐及其制备方法。
【背景技术】
[0005] Bontems, Bull. Sci. Pharmacol. 49:186-91 (1941)，首次报道了积雪草酸及其三 糖皂甙能够从积雪草中提取而得。积雪草是伞形科莳萝属一年生小型草本植物，产自亚 洲-环太平洋地区。积雪草酸及积雪草苷的化学结构如下所示：
[0008]参见：Polonsky, Compt. Rend. 232 : 1878-80 (1951);和 Bull. Soc. Chim. 173-80(1953).
[0009] 积雪草提取物中含有积雪草酸和积雪草苷，已知可用于治疗皮肤疤痕和慢性溃 疡。在有关方面，文献也披露了使用积雪草提取物治疗与结核病或麻风病相关的皮肤畸形。 比如可参见：Boiteau et al. ,Bull. Soc. Chim. 31:46-51 (1949).
[0010] 此类伤口愈合的药理作用方式与诱发角质化有关，参见：May，Eur. J. Pharmacol. 4:331-39 (1968)，特别是通过促进皮肤纤维原细胞增殖和包括I型胶原蛋白 在内的细胞外基质的合成。比如可参阅：Lu et al.，Int'l J. Dermatol. 43:801-07(2004); Skukla et al·，J.Ethnopharmacol. 65:1_11 (1999)。根据 Bonte 等人报道，Bonte et al.，Planta Med. 60:133-35 (1994)，通过将积雪草苷和积雪草酸进行对比发现，前者分 子中的糖部分对于其生物活性来说，似乎并非不可或缺。并且正如Grimaldi et al.，J. Ethnopharmacol. 28:235-41 (1990)中所论述，在人体口服之后，积雪草苷完全转化成血楽 积雪草酸。
[0011] 基于对这些伤口愈合特性的认识，美国专利No. 5, 834, 437中提出了包含积雪草 酸或其衍生物的皮肤病制剂的方案。此外，也可参见美国专利No. 6, 417, 349,其中，在肝纤 维化动物模型中，通过腹腔给药积雪草苷和羟基积雪草苷的水溶性提取物，达到了缓解症 状的效果，其中所述的羟基积雪草苷也是由积雪草产生的一个相关化合物。除了愈合伤口 和抗纤维化的功能以外，另据报道，在标准的（胶原诱导）关节炎啮齿动物模型中，试验证 实，口服积雪草苷还降低了脾细胞和炎症分子的水平，包括C0X-2, PGE2, TNF-α和IL-6， 以及由此抑制或降低了多种关节炎参数，比如足爪肿胀、关节炎评分以及滑膜增生。参见： Li et al·，Yao Xue Xue Bao (Acta Pharma. Sinica)42:698-703(2007)〇
[0012] 尽管这些和其他的披露信息都提示了积雪草酸和积雪草苷的治疗潜力，然而该潜 力的实现却面临着很大的障碍。主要问题在于，这两种化合物的提取都很困难，获得的收率 和纯度都相对偏低。此外，对于用于治疗性组合物中的积雪草酸盐的制备，人们还知之甚 少。在美国专利No. 6, 891，063中曾报道过某些适用于局部治疗的积雪草酸盐，主要是一些 铵盐。
【发明内容】
[0013] 为了解决上述积雪草酸提取困难，所得产物的收率和纯度都相对偏低的技术问 题，本发明提供了一种积雪草酸的制备方法、以及一种积雪草酸氨基丁三醇盐及其制备方 法。
[0014] 因此，为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一为：一种积雪草酸的制备 方法，所述制备方法包括以下步骤：在积雪草苷粉末中加入8X4% Na0H/50% EtOH溶液，加 热回流3-4小时，在所得水解产物中加入盐酸调节pH至4-5抽滤，弃去滤液，将所得滤饼依 次用水、30 % EtOH溶液洗涤直到滤液接近无色，弃去滤液，在所得滤饼中加入8 X无水乙醇 回流直到固体溶解，加入2 X活性炭，回流30分钟，趁热抽滤，弃去用过的活性炭，在滤液中 加入2 X活性炭回流30分钟，趁热抽滤，弃去用过的活性炭，将所得滤液冷至室温，加水，直 到没有新的沉淀生成，所得沉淀即为积雪草酸，其中所述的百分比为质量体积比。
[0015] 本发明所述积雪草酸的制备方法较佳地包括以下步骤：将200g纯度约为92%的 积雪草苷溶解于8X4% Na0H/50% EtOH溶液中，所得溶液于80°C水浴中加热回流3~4 小时，冷却至室温，通过在搅拌下分批少量加入稀盐酸，调节该溶液的pH至4~5,在此过 程中，不断有沉淀生成，最后整个体系成为粘稠的糊状，将该糊状物用直径为200mm的布氏 漏斗抽滤，弃去滤液，沉淀用水多次减压洗涤，直至洗涤液接近无色，再用30%的乙醇洗 涤，直至洗涤液接近无色，两次的洗涤液均弃去，向上述滤渣中加入8X无水乙醇，将体系 于80°C水浴中加热回流，直至固体完全溶解，再加入2X活性炭，继续回流30分钟，用直径 为200_的布氏漏斗趁热抽滤，除去活性炭，弃去用过的活性炭，再向滤液中加入与前次等 量的活性炭，回流30分钟，用直径为200_的布氏漏斗趁热抽滤，滤液冷至室温，向其中分 批加入水，每次约100_200ml，直至不再产生白色沉淀，所需水的总体积约为4000ml，用直 径为200mm的布氏漏斗抽滤,弃去滤液,将漏斗内的白色固体干燥后碾碎，即得纯度为98% 的积雪草酸，其中所述的百分比为质量体积比。
[0016] 为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之二为：一种积雪草酸氨基丁三醇 盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：将2g积雪草酸和0. 59g氨基丁三醇加入到 30ml甲醇中，室温下搅拌24小时后，再回流0. 5小时，将体系浓缩，再加入少量水，有沉淀生 成，过滤，将滤饼置于适量甲醇中，加热使之溶解，过滤，除去不溶物，浓缩，向浓缩液中加入 足量丙酮使体系均匀，冷却，有沉淀生成，过滤后所得固体于50°C下干燥，得到I. 5g积雪草 酸氨基丁三醇盐，为米色固体。
[0017] 为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之三为：一种积雪草酸氨基丁三醇 盐，其结构式如下所示：
[0018]
[0019] 本发明提供了高纯度的积雪草酸。在一实施例中，该积雪草酸为医药级，优选纯 度约98%。
[0020] 本发明还提供了由高纯度积雪草酸制备的盐。该盐可以为碱金属盐、碱土金属盐 或任意取代的铵盐。具体的可以为钾盐、钠盐或由氨基丁三醇形成的铵盐。本发明还提供 了一种包含上述任意一种或多种盐的固体制剂。
[0021] 本发明进一步提供了高纯度积雪草酸的衍生物。所述的衍生物可以是酰胺或酯。 优选的衍生物为积雪草苷。
[0022] 本发明还提供了一种治疗性组合物，该组合物由以下步骤制备而得：将高纯度的 积雪草酸或积雪草苷和药学上可接受的载体配制成含有治疗有效量的积雪草酸或积雪草 苷的剂型。
[0023] 本发明还进一步提供了一种治疗或预防纤维化疾病的方法。该方法包括给已患病 或存在患病风险的受试者施用上述治疗性组合物。本发明中所涉及的典型的纤维化疾病是 放射性肺炎及纤维化、特发性肺纤维化、糖尿病、肾病以及慢性阻塞性肺病（COPD)。
[0024] 本发明还提供了一种治疗或预防炎症疾病的方法，包括给已患病或存在患病风险 的受试者施用上述治疗性组合物。这些炎症性疾病类型可以为关节炎、炎症性肠病以及银 屑病。
[0025] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实 例。
[0026] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0027] 本发明的积极进步效果在于：利用本发明所述积雪草酸以及积雪草酸氨丁三醇盐 的制备方法，提取积雪草酸较为容易，而且所得产物积雪草酸和积雪草酸氨丁三醇盐的收 率和纯度都较高。利用本发明制备的积雪草酸以及积雪草酸氨基丁三醇盐制备的药用组合 物可用于治疗关节炎、银屑病以及其它炎症，还可用于治疗肺纤维化、糖尿病肾病等纤维化 疾病，并且能够获得显著的疗效。
【附图说明】
[0028] 图1为积雪草酸及其盐的叠加谱图。
[0029] 图 2 为积雪草酸（Lot071109)及其钠盐（AJF09,99b)的1H-NMR (300MHz, DMS0-d6) 谱图。
[0030] 图 3 为积雪草酸（Lot071109)及其钠盐（AJF09,99b)的 13C-NMR (300MHz, DMS0-d6) 谱图。
[0031] 图4为积雪草酸（Lot071109)及其钠盐（AJF09, 99b)在化学位移ll-41ppm部分 的 13C-NMR(300MHz, DMS0-d6)谱图。
[0032] 图4a为积雪草酸在DMS0-d6*的完整1H-NMR谱图。
[0033] 图4b为积雪草酸1H-NMR谱的放大图。
[0034] 图4c为积雪草酸钠盐（AJF09, 99b)的完整1H-NMR谱图。
[0035] 图4d为积雪草酸1H-NMR谱的放大图。
[0036] 图4e为积雪草酸在DMS0-d6*的完整13C-NMR谱图。
[0037] 图4f为积雪草酸13C-NMR谱的放大图。
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