br>[0087] 本发明所涉及的治疗性组合物另一种给药方式为吸入或吹入，直接给药到呼 吸道。例如可参见美国专利No. 5, 607, 915以及已公开的PCT申请W097/39745和TO 99/47196。因此本发明拟提供一种液体制剂，该制剂适合通过喷雾器、液体喷雾装置、或电 (EHD)喷雾装置给药。
[0088] 在一实施例中，该组合物可以含有一种药学上可接受的液态载体，比如醇、水、聚 乙二醇或全氟化碳。还可选择性加入其它原料以改变该活性成分的溶液或悬浮液的喷雾特 性。所述的其它原料可以是液体，如乙醇、乙二醇、聚乙二醇或脂肪酸。根据本发明，其它的 方法也可用于配制适合喷雾装置使用的溶液或悬浮液。参见：美国专利No. 5, 112, 598和 No. 5, 556, 611.
[0089] 本发明的活吸入制剂可采用适合干粉吸入器的的干粉载体。所述的载体可以是 单糖（如果糖、甘露醇、阿拉伯塘、木糖醇和葡萄糖）及其水合物，二糖（如乳糖、麦芽糖、 和蔗糖）和多糖（如淀粉、糊精和葡聚糖）。例如，本发明的积雪草酸盐可以如美国专利 No. 5, 376, 386所述，和一种或多种上述载体在超微粉碎机中制成干粉。
[0090] IV.可药用积雪草酸盐的制备与表征
[0091] 考虑到积雪草酸能够较好地溶于甲醇，本发明计划制备积雪草酸盐，例如通过分 别将积雪草酸溶于氢氧化钠、碳酸钠和氢氧化铵的甲醇溶液来制备。关于积雪草酸盐的制 备与表征，下文中将详细叙述。
[0092] A.积雪草酸盐的筛选
[0093] 由于积雪草酸易溶于甲醇（见下文），因此，可分别将积雪草酸溶于氢氧化钠、碳 酸钠和氢氧化铵的甲醇溶液中来制备相应的盐。
[0094] 1.积雪草酸与碳酸钠反应（AJF09, 82)
[0095] 0. 992g积雪草酸溶于27. 5ml甲醇，向该溶液中加入2. 0043g无水碳酸钠，剧烈摇 动。再将该甲醇-积雪草酸溶液转移至圆底烧瓶中蒸干，生成白色精细粉末状积雪草酸钠 盐，将其于KKTC真空干燥2小时，得约Ig样品。
[0096] 2.积雪草酸与氢氧化铵的甲醇溶液作用（AJF09, 99a)
[0097] 向0. 4923g积雪草酸中逐滴加入约6ml氢氧化铵的甲醇溶液，大部分积雪草酸溶 解，体系内开始出现新的片状物，再加入1ml氢氧化铵的甲醇溶液，搅拌过夜。体系内有沉 淀生成，过滤后得0. 〇741g积雪草酸铵盐。
[0098] 3.积雪草酸与氢氧化钠的甲醇溶液作用（AJF09, 99b)
[0099] 0. 4961g积雪草酸加入到7. Oml 0. 2M的氢氧化钠的甲醇溶液中，固体全部溶解 后，向体系内逐滴加入饱和氯化钠溶液至体系浑浊且有沉淀生成，加入7. Oml去离子水使 析出的氯化钠溶解。过滤，滤渣于l〇〇°C真空干燥后2h后，得0. 4938g积雪草酸钠盐。
[0100] 4.积雪草酸钾盐
[0101]
[0102] 如式4所示，4g(8. 196mmol)积雪草酸加入到30ml甲醇中，加热，使固体全部溶解。 向体系内加入由0. 56g(8. 187mmol)氢氧化钾和20ml甲醇配成的溶液，直到体系的pH变为 8~9。将溶液用活性炭脱色后浓缩。再向浓缩液中加入足量丙酮使体系均匀。冷却，有沉 淀生成，过滤后得到3. 5g积雪草酸钾盐，为灰白色晶体。图16a所示为该产物的1H-NMR谱 图。图17a所示为该产物的质谱图。
[0103] 5.积雪草酸氨基丁三醇盐
[0105] 如式5所不，2g(4. 09mmol)积雪草酸和0· 59g(4. 623mmol)氨基丁三醇加入到 30ml甲醇中，室温下搅拌24小时后，再回流0. 5小时。将体系浓缩，再加入少量水。有沉淀 生成，过滤，将滤饼置于适量甲醇中，加热使之溶解，过滤，除去不溶物，浓缩。向浓缩液中加 入足量丙酮使体系均匀。冷却，有沉淀生成，过滤后所得固体于50°C下干燥，得到I. 5g积雪 草酸氨基丁三醇盐，为米色固体。图16b所示为该产物的1H-NMR谱图。图17b所示为该产 物的质谱图。
[0106] 6.积雪草酸磷酸酯的钠盐
[0107]
[0108] 如式6中第一步反应所示，12ml吡啶于冰盐浴中冷却至-KTC，向其中逐滴加入 2. 2g(0. 01435mol)P0H。两分钟后，向其中逐滴加入由2g(0. 004098mol)积雪草酸和6ml批 啶配成的溶液,搅拌反应1. 5小时。向体系内缓慢加入40ml冰水，室温下搅拌过夜。蒸去大 部分溶剂，得到固体，真空干燥。将该固体加入到20ml 4N的盐酸中，得到胶状沉淀，过滤， 滤饼用水洗涤，从而得到粗产品。将其溶于甲醇，用活性炭脱色，浓缩，再向浓缩液中加入足 量丙酮使体系均匀。体系中有沉淀生成，过滤，得到胶状的磷酸酯。
[0109] 如式6中最后一步反应所示，将上步反应的粗产物溶于甲醇，加入IN的氢氧化钠 甲醇溶液，直到体系的PH变为8~9。用活性炭脱色，浓缩，再向浓缩液中加入足量丙酮使 体系均匀。冷却，体系内出现沉淀，过滤后所得固体于50°C下干燥，得到2. 2g米色固体，即 为积雪草酸磷酸酯的钠盐。图16c所示为该化合物的1H-NMR谱图。图17c所示为该化合 物的质谱图。
[0110] 7.积雪草酸三乙酸酯的酰胺衍生物
[0111]
[0112] 如式7中第一步反应所示，搅拌下，将5g积雪草酸溶于IOml吡啶中，冷至KTC，加 入15ml乙酸酐，室温下搅拌20小时。向体系中加入200ml冰水，有沉淀生成。过滤，水洗， 所得固体于50°C下干燥。得到6. 28g积雪草酸三乙酸酯白色粉末。
[0113] 如式7中第二步反应所示，将6. 5g(0. 01058mol)积雪草酸三乙酸酯加入到100mL 二氯甲烷中，冰水浴冷却，向其中加入1.2g(0.01186mol)三乙胺、1.55g(0.0111mol)甘氨 酸乙酯盐酸盐和0. 2g(0. 00164mol)4-二甲基氨基吡啶，反应混合物在0~5°C下反应0. 5 小时。再向体系内逐滴加入2. 37g(0. 0115mol)DCC的50ml二氯甲烷溶液，控制滴加速度， 0.5小时加完。加完后，保持0~5°C搅拌反应2小时，再于室温下搅拌反应24小时。过滤， 滤液依次用IN的盐酸、饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤至中性pH。减压蒸去溶剂，得到9g胶状 积雪草酸三乙酸酯的酰胺衍生物。
[0114] 将上述胶状粗产物置于硅胶柱上，以二氯甲烷/丙酮（20:1)为淋洗剂进行柱层 析，收集所需组分并浓缩。过滤，除去固体，滤液减压抽干，得到2. 82g白色晶体。图16d所 示为该化合物的IH-NMR谱图。图17d所示为该化合物的质谱图。
[0115] B.积雪草酸盐的HPLC分析
[0116] 将按照上文所述方法制得的某些积雪草酸盐进行HPLC分析。
[0117] ?标准样品的制备
[0118] 向25ml容量瓶中加入约5mg积雪草酸，再加入1ml甲醇，使固体全部溶解。然后 用流动相稀释至刻度，充分混合。
[0119] ?色谱参数
[0120]
[0121] ?系统的适应性
[0122] 每次测试，都用标准溶液（200 μ g/mL的积雪草酸甲醇溶液）重复进样6次，以此 证明系统的可重复性。并计算重复进样的相对标准偏差的百分比（％RSD)。标准溶液首次 进样后，计算对于积雪草酸的拖尾因子以及理论塔板数，来计算RSD。
[0123] 系统合格的标准
[0124] ?六次重复进样的测试结果中，第一个峰面积相应的相对标准偏差的百分比 RSD)不大于3. 0%。
[0125] ?理论塔板数不少于10000。
[0126] ?拖尾因子应当不大于1. 5。
[0127] ?分辨率不小于2. 0。
[0128] 测试结果
[0129]
[0130] 计算积雪草酸及其盐的回收率（表1)。积雪草酸及其各种盐的保留时间相同，证 实了盐相对于积雪草酸没有发生结构的重大变化（图1)。
[0131] 表1.积雪草酸及其盐的回收
[0133] 在水和甲醇中的溶解度
[0134] 溶解度的实验结果取自积雪草酸及其一种钠盐（AJF09, 99b)在水和甲醇中的溶 解度。具体数据见表2。积雪草酸仅仅微溶于水（0.03mg/ml)，而其钠盐在水中的溶解度比 它大228倍。这对于盐的生成是强有力的证据，并且对于剂型制备来说，极大地的增加了药 物的应用。
[0135] 样品制备
[0136] 分别将积雪草酸及其盐的甲醇和水的饱和溶液过滤，除积雪草酸的水溶液以外， 其余均用流动相稀释。除了钠盐的甲醇溶液制备2份样品以外，其余同种样品均制备3份。
[0137] 表2.溶解度实验结果
[0140] C.核磁共振（NMR)谱图
[0141] 积雪草酸及其钠盐（AJF09, 99b)的1H-NMR及13C-NMR谱图的初步测定是在氘代 DMSO溶液中，于Varian 300MHz核磁共振仪上进行的。总的说来，所得到的NMR谱图中质子 的化学位移和裂分方式（多重性）与积雪草酸的结构相符（见图2)。通过比较积雪草酸及 其盐的谱图可以发现，一些峰的化学位移发生了变化，尤其是在4.0~4. 6ppm之间，这与盐 的形成导致电子发生变化的结果是一致的。
[0142] 13C-NMR谱图中碳的化学位移与积雪草酸的结构也是一致的。图3和图4分别为 积雪草酸及其钠盐的 13C-NMR谱图。积雪草酸的13C-NMR谱图中，碳的化学位移在36, 24和 17ppm的信号，在相应的钠盐的13C-NMR谱图中发生了变化，这也表明了盐的生成。
[0143] 进一步的NMR分析测试是在400MHz的