0/20层析柱，Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (high sub)填料） 具体实施步骤为：
[0049] 样品预处理：过滤后的发酵上清液，用乙酸调pH至5. 0,加固体NaCl调节cd 50ms/cm；
[0050] 平衡：设置检测波长280nm，使用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓冲液，pH5. 0， 加固体NaCl调节cd 50ms/cm)，调节栗流速为20.0 ml/min,平衡8倍柱床体积，待UV值稳 定后，紫外校零；
[0051] 上样：以15ml/min流速上样，上样结束后，用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓 冲液，pH5. 0,加固体Nacl调节cd 50ms/cm)平衡5倍柱床体积；
[0052] 洗脱：使用洗脱液（10mm〇l/L Tris-HCl缓冲液，pH 8. 5)洗脱，调节栗流速为 10ml/min，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0053] 阴离子柱层析（XK50/30层析柱，DEAE Sepharose Fast Flow填料）具体实施步 骤为：
[0054] 样品预处理：所得疏水层析后蛋白溶液，用氢氧化钠调pH至8.5,加水稀释至cd 为3ms/cm〇
[0055] 平衡：设置检测波长280nm，使用平衡缓冲液（10mm〇l/L Tris-HCl缓冲液， pH8. 5)，调节栗流速为20.0 ml/min，平衡8倍柱床体积；
[0056] 上样：将疏水层析峰直接上样，上样时栗流速为10ml/min，上样结束后用平衡缓 冲液（10mmol/L Tris-HCl，pH 8. 5)平衡5个柱床体积；
[0057] 洗脱：使用洗脱液（100mm〇l/L HAc-NaAc缓冲液，pH5. 0)洗脱，调节栗流速为8ml/ min，根据UV值的变化收集目的峰。
[0058] 凝胶过滤层析（HR16/70层析柱Sephacryl S-100HR填料）具体实施步骤为：
[0059]平衡：设置检测波长 280nm，用 HAc-NaAc 缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc，pH 5. 0)平 衡5-10个柱体积，平衡时栗流速为1.0ml/min，待UV值稳定后，紫外校零；
[0060] 上样：将阴离子交换纯化后目的蛋白直接上样。上样时栗流速为1.0ml/min，样品 上样量为柱体积的2% ;
[0061] 洗脱：上样完毕后，用HAc-NaAc缓冲液洗脱（10mmol/LHAc-NaAc，pH 5. 0)，调节 栗流速为1.0ml/min，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0062] 实施例3
[0063]疏水柱层析CKK50/20层析柱，Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (high sub)填料） 具体实施步骤为：
[0064] 样品预处理：过滤后的发酵上清液，用乙酸调pH至5. 0,加固体Nacl调节cd50ms/ cm；
[0065] 平衡：设置检测波长280nm，使用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓冲液，pH5. 0， 加固体Nacl调节cd50ms/cm)，调节栗流速为20.0 ml/min,平衡8倍柱床体积，待UV值稳定 后，紫外校零；
[0066] 上样：以15ml/min流速上样，上样结束后，用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓 冲液，pH5. 0,加固体Nacl调节cd 50ms/cm)平衡5倍柱床体积；
[0067] 洗脱：使用洗脱液（10mm〇l/L Tris-HCl缓冲液，pH 8. 5)洗脱，调节栗流速为 10ml/min，开始洗脱，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0068] 阴离子柱层析（XK50/30层析柱，聚苯乙烯-二乙烯苯（SKI-10)填料）具体实施 步骤为：
[0069] 样品预处理：所得疏水层析后蛋白溶液，用氢氧化钠调pH至8. 5,加水稀释至cd 为 3ms/cm〇
[0070] 平衡：设置检测波长280nm，用平衡缓冲液（10mmol/L Tris-HCl，pH 8. 5)平衡8 倍柱体积，平衡时栗流速为20.0 ml/min，待UV值稳定后，紫外校零；
[0071] 上样：将疏水层析峰直接上样，上样时栗流速为15ml/min，上样结束后用平衡缓 冲液（10mm〇l/L Tris-HCl，pH 8. 5)复平衡5个柱床体积；
[0072]洗脱：上样完毕后，用洗脱缓冲液洗脱（100mm〇l/L HAc-NaAc，pH5. 0)，调节栗流速 为10ml/min，根据UV值的变化收集目的峰。
[0073] 实施例4
[0074]疏水柱层析CKK50/20层析柱，Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (high sub)填料） 具体实施步骤为：
[0075]样品预处理：过滤后的发酵上清液，用乙酸调pH至5. 0,加固体Nacl调节cd 50ms/cm
[0076] 平衡：设置检测波长280nm，使用平衡缓冲液（lOmmol/L HAc-NaAc缓冲液，pH5. 0， 加固体Nacl调节cd 50ms/cm)，调节栗流速为20.0 ml/min,平衡8倍柱床体积，待UV值稳 定后，紫外校零；
[0077] 上样：以15ml/min流速上样，上样结束后，用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓 冲液，pH5. 0,加固体Nacl调节cd 50ms/cm)平衡5倍柱床体积；
[0078] 洗脱：使用洗脱液（10mm〇l/L PB缓冲液，pH 8. 5)洗脱，调节栗流速为10ml/min， 开始洗脱，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0079] 阴离子柱层析（XK50/30层析柱，聚苯乙烯-二乙烯苯（SKI-10)填料）具体实施 步骤为：
[0080] 样品预处理：所得疏水层析后蛋白溶液，用氢氧化钠调pH至8. 5,加水稀释至cd 为 3ms/cm〇
[0081] 平衡：设置检测波长280nm，用平衡缓冲液（10mmol/L Tris-HCl，pH 8. 5)平衡8 倍柱体积，平衡时栗流速为20. 0ml/min，待UV值稳定后，紫外校零；
[0082] 上样：上样时栗流速为15ml/min，上样结束后用平衡缓冲液（10mmol/L Tris-HCl，pH8. 5)复平衡5个柱床体积；
[0083] 洗脱：上样完毕后，用洗脱缓冲液洗脱（100mm〇l/L HAc-NaAc，pH5. 0)，调节栗流速 为10ml/min，根据UV值的变化收集目的峰。
[0084] 凝胶过滤层析（HR16/70层析柱Sephacryl S-100HR填料）具体实施步骤为：
[0085] 平衡：设置检测波长 280nm，用 HAc-NaAc 缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc，pH 5. 0)平 衡5-10个柱体积，平衡时栗流速为1.0ml/min，待UV值稳定后，紫外校零；
[0086] 上样：将阴离子交换纯化后目的蛋白直接上样。上样时栗流速为1.0ml/min，样品 上样量为柱体积的2% ;
[0087] 洗脱：上样完毕后，用HAc-NaAc液洗脱（10mmol/L HAc-NaAc，pH 5. 0)，调节栗流 速为1.0ml/min，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0088] 实施例5
[0089] 疏水柱层析 CKK50/20 层析柱，Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (high sub)填料） 具体实施步骤为：
[0090] 样品预处理：过滤后的发酵上清液，用乙酸调pH至5. 0,加固体Nacl调节cd50ms/ cm ；
[0091] 平衡：设置检测波长280nm，使用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓冲液，pH5. 0， 加固体Nacl调节cd50ms/cm)，调节栗流速为20.0 ml/min,平衡8倍柱床体积，待UV值稳定 后，紫外校零；
[0092] 上样：以15ml/min流速上样，上样结束后，用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓 冲液，pH5. 0,加固体Nacl调节cd50ms/cm)平衡5倍柱床体积；
[0093] 洗脱：使用洗脱液（10mm〇l/L HAc-NaAc缓冲液，pH5. 0)洗脱，调节栗流速为10ml/ min，开始洗脱，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0094] 阴离子柱层析（XK50/30层析柱，聚苯乙烯-二乙烯苯（SKI-10)填料）具体实施 步骤为：
[0095] 样品预处理：所得疏水层析后蛋白溶液，用氢氧化