钠调pH至8. 5,加水稀释至cd 为 3ms/cm〇
[0096] 平衡：设置检测波长280nm，用平衡缓冲液（10mmol/L Tris-HCl，pH 8. 5)平衡8 倍柱体积，平衡时栗流速为20.0 ml/min，待UV值稳定后，紫外校零；
[0097] 上样：上样时栗流速为15ml/min，上样结束后用平衡缓冲液（10mmol/L Tris-HCl，pH8. 5)复平衡5个柱床体积；
[0098] 洗脱：上样完毕后，用洗脱缓冲液洗脱（100mmol/L HAc-NaAc，pH5. 0)，调节栗流速 为10ml/min，根据UV值的变化收集目的峰。
[0099] 凝胶过滤层析（HR16/70层析柱Sephacryl S-100HR填料）具体实施步骤为：
[0100] 平衡：设置检测波长 280nm，用 HAc-NaAc 缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc，pH 5. 0)平 衡5-10个柱体积，平衡时栗流速为1. 0ml/min，待UV值稳定后，紫外校零；
[0101] 上样：将阴离子交换纯化后目的蛋白直接上样。上样时栗流速为1. 〇ml/min，样品 上样量为柱体积的2%。；
[0102] 洗脱：上样完毕后，用HAc-NaAc液洗脱（10mmol/L HAc-NaAc，pH 5. 0)，调节栗流 速为1.0ml/min，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0103] 实施例6
[0104] 疏水柱层析 CKK50/20 层析柱，Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (high sub)填料） 具体实施步骤为：
[0105] 样品预处理：过滤后的发酵上清液，用乙酸调pH至5. 0,加固体Nacl调节cd50ms/ cm ；
[0106] 平衡：设置检测波长280nm，使用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓冲液，pH5. 0， 加固体Nacl调节cd 50ms/cm)，调节栗流速为20.0 ml/min,平衡8倍柱床体积，待UV值稳 定后，紫外校零；
[0107] 上样：以15ml/min流速上样，上样结束后，用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓 冲液，pH5. 0,加固体Nacl调节cd 50ms/cm)平衡5倍柱床体积；
[0108] 洗脱：使用洗脱液（10mm〇l/L Tris-HCl缓冲液，pH 8. 5)洗脱，调节栗流速为 10ml/min，开始洗脱，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0109] 阳离子柱层析（XK50/30层析柱，CM Sepharose Fast Flow填料）具体实施步骤 为：
[0110] 样品预处理：所得疏水层析后蛋白溶液，用乙酸调pH至5. 0,加水稀释至cd为 2ms/cm〇
[0111] 平衡：设置检测波长280nm，用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc，pH5. 0)平衡8倍 柱体积，平衡时栗流速为20. 0ml/min，待UV值稳定后，紫外校零；
[0112] 上样：上样时栗流速为15ml/min，上样结束后用平衡缓冲液（10mm〇l/L HAc-NaAc，pH5. 0)复平衡5个柱床体积；
[0113] 洗脱：上样完毕后，用洗脱缓冲液洗脱（100mm〇l/L PB，pH8.5)，调节栗流速为 10ml/min，根据UV值的变化收集目的峰。
[0114] 凝胶过滤层析（HR16/70层析柱Sephacryl S-100HR填料）具体实施步骤为：
[0115] 平衡：设置检测波长280nm，用Tris-HCl缓冲液（10mmol/L Tris-HCl缓冲液，pH 8. 5)平衡5-10个柱体积，平衡时栗流速为1. 0ml/min，待UV值稳定后，紫外校零；
[0116] 上样：将阳离子交换纯化后目的蛋白直接上样。上样时栗流速为l.Oml/min，样品 上样量为柱体积的2%。；
[0117] 洗脱：上样完毕后，用Tris-HCl洗脱液（10mm〇l/L Tris-HCl缓冲液，pH 8. 5)洗 脱，调节栗流速为1.0ml/min，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0118] 实施例7
[0119] 疏水柱层析 CKK50/20 层析柱，Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (high sub)填料） 具体实施步骤为：
[0120] 样品预处理：过滤后的发酵上清液，用乙酸调pH至5. 0,加固体Nacl调节cd50ms/ cm ；
[0121] 平衡：设置检测波长280nm，使用平衡缓冲液（10mm〇l/L HAc-NaAc缓冲液，pH5. 0， 加固体Nacl调节cd 50ms/cm)，调节栗流速为20.0 ml/min,平衡8倍柱床体积，待UV值稳 定后，紫外校零；
[0122] 上样：以15ml/min流速上样，上样结束后，用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓 冲液，pH5. 0,加固体Nacl调节cd 50ms/cm)平衡5倍柱床体积；
[0123] 洗脱：使用洗脱液（10mm〇l/L Tris-HCl缓冲液，pH 8. 5)洗脱，调节栗流速为 10ml/min，开始洗脱，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0124] 阴离子柱层析（XK50/30层析柱，Source 30Q填料）具体实施步骤为：
[0125] 样品预处理：所得疏水层析后蛋白溶液，用氢氧化钠调pH至8. 5,加水稀释至cd 为 3ms/cm〇
[0126] 平衡：设置检测波长280nm，使用平衡缓冲液（10mmol/L Tris-HCl缓冲液， pH8. 5)，调节栗流速为20ml/min，平衡8倍柱床体积；
[0127] 上样：上样时栗流速为15ml/min，上样结束后用平衡缓冲液（10mmol/L Tris-HCl 缓冲液，pH8. 5)平衡5个柱床体积；
[0128] 洗脱：使用洗脱液（10mm〇l/L HAc-NaAc缓冲液，pH5. 0)洗脱，调节栗流速为10ml/ min，根据UV值的变化收集目的峰。
[0129] 凝胶过滤层析（HR16/70层析柱Sephacryl S-100HR填料）具体实施步骤为：
[0130] 平衡：设置检测波长 280nm，用 HAc-NaAc 缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc，pH 5. 0)平 衡5-10个柱体积，平衡时栗流速为1. 0ml/min，待UV值稳定后，紫外校零；
[0131] 上样：将阴离子交换纯化后目的蛋白直接上样，上样时栗流速为1. 0ml/min，样品 上样量为柱体积的2%。；
[0132] 洗脱：上样完毕后，用HAc-NaAc液洗脱（10mmol/L HAc-NaAc，pH 5. 0)，调节栗流 速为1. 0ml/min，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0133] 实施例8
[0134] 疏水柱层析 〇(K5〇/2〇 层析柱，Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (high sub)填料） 具体实施步骤为：
[0135] 样品预处理：过滤后的发酵上清液，用乙酸调pH至5. 0,加固体Nacl调节cd 50ms/cm ；
[0136] 平衡：设置检测波长280nm，使用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓冲液，pH5. 0， 加固体Nacl调节cd 50ms/cm)，调节栗流速为20.0 ml/min,平衡8倍柱床体积，待UV值稳 定后，紫外校零；
[0137] 上样：以15ml/min流速上样，上样结束后，用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc缓 冲液，pH5. 0,加固体Nacl调节cd 50ms/cm)平衡5倍柱床体积；
[0138] 洗脱：使用洗脱液（10mm〇l/L Tris-HCl缓冲液，pH 8. 5)洗脱，调节栗流速为 10ml/min，开始洗脱，根据UV值的变化收集目的蛋白溶液。
[0139] 阳离子柱层析（XK50/30层析柱，Source30S填料）具体实施步骤为：
[0140] 样品预处理：所得疏水层析后蛋白溶液，用乙酸调pH至5. 0,加水稀释至cd为 2ms/cm ；
[0141] 平衡：设置检测波长280nm，用平衡缓冲液（10mmol/L HAc-NaAc，pH5. 0)平衡8倍 柱体积，平衡时栗流速为20. 0ml/min，待UV值稳定后，紫外校零；
[0142] 上样：上样时栗流速为15ml/min，上样结束后用平衡缓冲液（10mm〇l/L HAc-NaAc，pH5. 0)复平衡5个柱床体积；
[0143]洗脱：