一种活性纳米硒脑肽的制备工艺的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种脑蛋白粉制备方法，尤其设及一种从猪脑组织中提取的活性纳米 砸脑肤的制备工艺。
【背景技术】
[0002] 哺乳动物脑组织是与人脑组织较亲和的组织，其所含有的各种蛋白质、肤类、神经 生长因子、憐脂、粘多糖等可为人脑组织利用。利用酶工程技术，从动物脑组织中可获取含 有大量小分子肤、氨基酸、辅酶体等物质，业内把它称之为脑蛋白水解物或脑肤。据研究报 道，目前在哺乳动物脑组织中已发现30多种活性肤，脑肤的功能主要表现为调节功能和营 养功能两方面，调节功能包括改善睡眠和提高记忆力，主要表现为缩短入睡期，延长睡眠时 间，提高记忆，增加智力。营养功能包括它所含有8种人体必需氨基酸，且能透过血脑屏脑， 直达脑组织，为大脑提供营养，被誉为脑动力素。近年来，奥地利及日本等国W动物脑组织 为原料相继开发出了治疗脑功能性疾病的营养补充剂或药品，如奥地利依比威巧bewe)药 厂生产的脑活素注射液已有多年的历史，临床应用最为广泛。脑活素临床上可用于神经系 统疾病特别是阿尔茨海默氏病（AD)的治疗，能明显延缓老年痴呆病变的进展，改善痴呆症 状。研究表明，脑活素含有75%的游离氨基酸和25%的小分子肤，脑活素的药理作用与其含 有的小分子肤类的生物活性密切相关。
[0003] 大量科学研究表明，自由基是人类衰老和患病的根源。机体自身及外界环境因 素往往使人体产生过多的自由基，自由基攻击生命大分子，造成组织细胞损伤。脑是最易 受自由基攻击的部位，因为脑在氧化代谢过程中产生的毒性自由基比其他任何组织器官要 多。砸作为重要的抗氧化剂和自由基清除剂，在体内通过谷脫甘肤过氧化物酶特异性地催 化还原型谷脫甘肤与过氧化物(毒性自由基）的氧化还原反应，把有毒的氧自由基变成无毒 物质，从而起到保护脑细胞免受损害，维护大脑的健康。研究表明，凡患有老年性痴呆症、 脑中风、失眠、记忆力减退的人，其血砸的含量比正常人的血砸水平要低，运表明其抗氧化 和对自由基损害的防御能力下降，脑组织容易受到自由基毒性的损害。因此，砸是一种重 要的抗脑衰老元素，适当从体外补充砸，可使体内的砸含量维持在正常水平，不仅能改善睡 目民，提高记忆力，增强智力，而且可W改善整个身体的机能状态，延缓机体衰老的进程。关 于砸的日摄入量，我国科技工作者杨光折教授和陈孝曙教授经过多年的研究分析，得出结 论：人体对砸的生理需要量为40yg/日，界限中毒剂量为800yg/日，建议膳食砸补充量为 50-250yg/日，最高安全摄入量为400yg/日，此数据为国际组织FDA/WHCVIAEA所采用。 1998年中国营养学会已将人体必需的微量元素砸列为15种每日膳食营养素之一，并推荐 成年人每日膳食砸补充量为50微克。与无机砸及有机砸相比，纳米砸具有毒性小，易于吸 收，高效高活性等优势。因此，纳米砸的应用前景和市场潜力十分巨大。
[0004] 国内已有不少利用动物脑组织提取制备脑蛋白水解物或脑肤的报道，如中国专利 号化200710118548公开了一种脑肤及其制备方法及其用途；中国专利号化201210253341 公开了一种提取鱼脑油、鱼脑肤的方法。国内也有大量的W多（聚）糖或蛋白质或多肤 为介质制备单质纳米砸的专利技术报道，如中国专利号化97107038公开了一种活性红 色单质砸的制备方法，专利号化02138643公开了甲壳素纳米砸及其制备方法，专利号 化200410093254公开了一种纳米砸溶胶的制备方法，专利号化200510086601公开了活性 蛋白复合型纳米砸的制备及液相保存技术，专利号化200510086602公开了液相多、聚糖纳 米砸及其制备方法与保存。现有的技术方案只是制备单一功能的动物脑蛋白水解物或某种 形态的单质纳米砸，而将纳米砸与脑蛋白或脑肤有机融合，制备功能更强的活性纳米砸脑 蛋白或脑肤至今尚无专利报道。
[0005] 此外，在现有的动物脑蛋白或脑肤提取工艺中，一般采用有机溶剂巧日丙酬、乙酸、 乙醇等）抽提法对脑蛋白水解物进行脱脂，运种方法脱脂效果较好，产品收得率高，但是需 要消耗大量的有机溶剂，易造成环境污染，成本高，对生产操作带来不便和危险性，而且蛋 白质、肤类等活性物质长时间在有机溶媒的作用下可能导致不可逆的变性失活。因此，开发 一种更加有效的脑蛋白脱脂新工艺具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的正是基于上述状况而提出的一种活性纳米砸脑肤制备工艺，该工艺 W猪脑组织为主要原料，工艺简单，成本低，安全可靠，易于实施，所制备的活性纳米砸脑肤 可作为有关保健食品和医药工业的原料，具有较高的实用价值。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用W下技术方案来实现的：一种活性纳米砸脑肤制备 工艺，其工艺步骤如下： (1) 取新鲜（或经冷冻保存后解冻）猪脑去粘膜、去血管、洗净后，加入2-4倍重量的去 离子水匀浆，得到脑浆液； (2) 向所述脑浆液中加入脂肪酶酶解，灭酶，离心收集沉淀，向沉淀中加入1-3倍重量 的去离子水揽拌均匀后，得到脱脂脑蛋白液； (3) 向所述脱脂脑蛋白液中加入复合酶酶解，灭酶，调节抑值为7. 0,离心收集上清 液； (4) 将上清液通过截留分子量为5000化的超滤膜进行超滤，收集透过液，得到脑肤液； (5) 向所述脑肤液中依次加入亚砸酸钢溶液和抗坏血酸溶液，在40-55°C下揽拌反应 1-2小时，得到反应液； (6) 将所述反应液进行喷雾干燥，得到成品。
[0008] 步骤（2)所述脂肪酶为碱性脂肪酶，酶活力为10000-30000U/g，酶解条件为 30-45 °C，pH8.5~9. 5,酶解30-60分钟，脂肪酶添加量为所述脑浆液重量的0. 05-0. 15%， 酶解后在90-100°C灭酶20分钟。
[0009] 步骤（3)所述复合酶为经活化的膜蛋白酶和风味蛋白酶的混合物，膜蛋白酶和风 味蛋白酶的质量混合比为1-3 :0. 5-1，酶解条件为45-55°C，pH7. 8~8. 5,酶解8-16小时， 所加复合酶添加量为所述脱脂脑蛋白液重量的0. 2-2. 0%，酶解后在90-100°C灭酶20分钟； 膜蛋白酶的活化方法为：取需要量的膜蛋白酶加入所述膜蛋白酶质量5-10倍的0. 02mol/ LCaClz. 2&0 溶液，于 4-5°C活化 30-60 分钟。
[0010] 步骤（5)所述加入亚砸酸钢溶液和抗坏血酸溶液的顺序是先加亚砸酸钢溶液，揽 拌5-10分钟W后再在揽拌下滴加抗坏血酸溶液。
[0011] 步骤（5)所述加入亚砸酸钢溶液和抗坏血酸溶液的量可W根据实际需要调整，但 须满足抗坏血酸与亚砸酸钢的摩尔比> 10,亚砸酸钢溶液的质量浓度为0. 01-0. 1%，抗坏 血酸溶液的质量浓度为0. 5-1. 2%。
[0012] 步骤（6)所述喷雾干燥时进风口溫度为180-200°C，出风口溫度为80-100°C。
[0013] 通过实施上述技术方案，本发明具有如下的有益效果：制备工艺中W酶解方式对 动物脑蛋白水解物进行脱脂，不仅脱脂效果好，避免了环境污染，而且保证了小分子肤的稳 定性和生物活性；制备工艺中采用具有生物活性的脑肤作为介质模板，既能吸附和稳定纳 米砸，强化纳米砸的生物活性，又达到将活性脑肤与纳米砸结合起来，使脑肤与纳米砸的生 理功能相互促进，协同增效，使所得产品具有更好的增强记忆、改善睡眠W及治疗神经性头 痛等多种脑功能性疾病的功效。
【附图说明】
[0014] 图1为活性纳米砸脑肤的透射电镜图。
【具体实施方式】[001引 实施例1 (1)取经过检验的健康的新鲜猪脑200kg，去粘膜、去血管、洗净，加入2倍猪脑重量的 去离子水，用匀浆机匀浆，得到脑浆液；（2)将脑浆液升溫至35°C，调节抑值为9. 0,加入 脑浆液总重量的0. 1%的脂肪酶，揽拌5分钟，停止揽拌，保溫酶解40分钟后，升溫至95°C 灭酶20分钟，冷却至室溫后，4000rmp离屯、15分钟，收集沉淀，向沉淀中加入2倍沉淀重量 的去离子水揽拌均匀后，得到脱脂脑蛋白液；（3)将脱脂脑蛋白液升溫至50°C，加入脱脂脑 蛋白液总重量的1. 2%的复合酶，调节抑值为8. 0,揽拌5分钟，停止揽拌，保溫酶解8小时 后，升溫至95°C灭酶20分钟，冷却至室溫后，调节抑值为7. 0,4000rmp离屯、15分钟，收集 上清液；复合酶为经活化的膜蛋白酶和风味蛋白酶的混合物，膜蛋白酶和风味蛋白酶的质 量混合比为3 :1 ; (4)将上清液通过截留分子量为5000化的超滤膜进行超滤，收集透过液， 得到脑肤液；（5)将脑肤液升溫至50°C，加入300mL亚砸酸钢溶液，揽拌5分钟W后，加入 ISOOmL抗坏血酸溶液，不断揽拌保溫反应1小时，得到反应液；亚砸酸钢溶液的质量浓度为 0. 05%，抗坏血酸溶液的质量浓度为0. 6% (6)将反应液进行喷雾干燥，得到成品13. 69kg。 [001引实施例2 (1)取经过检验的健康的