[0043] 较优的，步骤3)中，所述低溫离屯、的条件为：4°C，8000~10000巧m，离屯、15~ 30min〇
[0044] 较优的，步骤4)a中，所述超滤处理所采用的是截留分子量分别为3kDa的超滤管。
[0045] 更优的，步骤4)a中，所述超滤处理过程中，转速为4800r/min，时间为30min，离屯、 溫度为4°C。
[0046] 较优的，步骤4)b中，固相萃取柱分离，具体方法为：活化和平衡WatersS巧-pak C18固相萃取柱；将步骤4)a中收集的滤液进行稀释后上样，采用洗脱液洗脱，收集所得到 的洗脱液，即包含生物活性多肤混合物。
[0047] 较优的，步骤4)b中，固相萃取柱分离法中，所采用的洗脱液为甲醇和d地2〇的混 合液，所述甲醇和d地2〇的混合液中甲醇与d地2〇的体积比为80:20，所述甲醇和d地2〇的混 合液中含有0. 1% (v/v)的甲酸。 阳048] 较优的，步骤4)b中，固相萃取柱分离法中，采用甲醇活化WatersS巧-pakC18固 相萃取柱；优选2ml甲醇。
[0049] 较优的，步骤4)b中，固相萃取柱分离法中，采用d地2〇平衡WatersS巧-pakC18 固相萃取柱；优选ImlddHzO。
[0050] 较优的，步骤4)b中，固相萃取柱分离法中，将步骤4)a中收集的超滤液上样，采用 400ul洗脱液洗脱。
[0051] 较优的，步骤4)b固相萃取柱分离法中，先采用2血甲醇活化WatersS巧-pakC18 固相萃取柱，采用1血d地2〇平衡WatersS巧-pakC18固相萃取柱；上样样品为2血；将步 骤4)a中收集超滤液上样，采用400μL洗脱液洗脱。
[0052] 较优的，步骤5)所述两步酶解法具体步骤为将步骤4)得到的含有多肤的混合物 溶于灭菌去离子水中，调节抑值为2.0 + 0. 1，再加入胃蛋白酶，获得反应液，于37 + 0. 5°C 的恒溫水浴中保溫反应90min，获得第一步酶解液；将第一步酶解液的抑值调整为 7. 5 + 0. 1，并加入膜酶，于37 + 0. 5°C的恒溫水浴中保溫反应150min，获得第二步酶解液； 将第二步酶解液采用沸水浴法使酶失活，时间为5min，获得酶解产物；采用冷冻干燥获得 粉状酶解产物。
[0053] 更优选的，所述沸水浴法为95°C水浴法。
[0054] 较优的，步骤5)所述胃蛋白酶的添加量为胃蛋白酶10~30mg/g底物；所述膜酶 的添加量为膜酶30~50mg/g底物。
[0055] 更优的，步骤5)所述胃蛋白酶的添加量为胃蛋白酶20mg/g底物；所述膜酶的添加 量为膜酶40mg/g底物。
[0056] 较优的，提取分子量为684. 2細a的多肤的洗脱峰，即为生物活性多肤GTQYTD。
[0057] 在本发明中，已知GTQYTD的分子量，提取分子大小为684. 2細a的洗脱峰，即为本 发明的生物活性多肤GTQYTD。具体的，本发明GTQYTD分子大小为684. 2細a的洗脱峰其保 留时间为4. 20min。
[0058] 本发明第Ξ方面，提供了前述生物活性多肤GTQYTD或其衍生物在制备抗氧化和/ 或增强机体免疫力的食品、保健品及药物中的应用。
[0059] 本发明的生物活性多肤GTQYTD或其衍生物可W用于酸奶等乳制品W及各种食 品、减少自由基对皮肤伤害的化妆品；并且由于本发明的生物活性多肤GTQYTD能够通过胃 肠道直接吸收不被降解，因此可W用于制备提高免疫力的保健品，或者用于制备具有抗氧 化和/或增强机体免疫力的药物。
[0060] 本发明第四方面，提供了一种抗氧化药物，包含前述生物活性多肤GTQYTD或前述 生物活性多肤的衍生物。
[0061] 本发明第五方面，提供了一种增强机体免疫力药物，包含前述生物活性多肤 GTQYTD或前述生物活性多肤的衍生物。
[0062] 所述多肤的衍生物，是指在多肤的氨基酸侧链基团上、氨基端或簇基端进行径基 化、簇基化、幾基化、甲基化、乙酷化、憐酸化、醋化或糖基化等修饰，得到的多肤衍生物。
[0063] 与现有技术相比，本发明生物活性多肤的有益效果为：
[0064] 本发明的乳源性生物活性多肤GTQYTD具有很好的抗氧化活性和促进机体免疫力 活性；一方面能够清除机体内的自由基，减少自由基对人体的伤害；另一方面，本发明的生 物活性多肤还能够增强机体免疫力，增强巨隧细胞的吞隧功能，提高机体抵御外界病原体 感染的能力，降低机体发病率，而且经过胃肠道消化模拟实验能直接吸收不被降解，进入体 内不会引起机体的免疫排斥反应。另外，模拟消化实验结果表明发现的运条生物活性多肤 在通常的动物体内消化条件下稳定，不会被进一步降解，能够被动物机体直接吸收利用发 挥其具有的生物活性功能，对开发具有抗氧化功能、增强免疫功能、延缓衰老的食品、保健 品和药品具有十分重要的意义和应用价值。
【附图说明】 W65] 图1:瑞±乳杆菌发酵乳中菌体胞内肤消化产物的洗脱图谱
[0066] 图2:质量色谱提取图（m/z= 684. 28)
[0067] 图3:质荷比为684. 28的片段的一级质谱图
[0068] 图4:质荷比为684. 28的片段1的二级质谱图 W例 图5:质荷比为684. 28预测得到的序列的az，by断裂情况脚QYTD)
[0070] 图6:T;rolox标准曲线
【具体实施方式】
[0071] 在进一步描述本发明【具体实施方式】之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下 述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体 实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
[0072] 当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端 点W及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和 科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、 材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可W使用与本 发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实 现本发明。
[0073] 除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术 领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技 术及相关领域的常规技术。运些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook 等MOLECULARCLONING:ALABORATORYMANUAL,Secondedition,ColdSpringHarbor L油oratoryPress，1989andThirdedition，2001;Ausubel等，CURRENTPROTOCOLSIN MOLECULARBIOLOGY,JohnWiley&Sons，化wYork,1987andperiodicupdates;theseries METHODSINENZYMOLOGY,AcademicPress,SanDiego；Wolffe,CHROMATINSTRUCTUREAND FUNCTION,Thirdedition,AcademicPress,SanDiego, 1998 ;METH0DSINENZYMOLOGY， Vol. 304,Chromatin(P.M.WassarmanandA.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，SanDiego， 1999;和METHODSINMOLECULARBIOLOGY,Vol. 119,C虹omatinProtocols(P.B.Becker,ed.)HumanaPress,Totowa，1999 等。
[0074]实施例1活性肤GTQYTD的发现 [00巧]一、瑞±乳杆菌发酵乳的制备
[00