到 一维液相组分。用60 %的乙醇-正己烷溶液溶解一维组分，浓度为73mg/mL，过0. 45μm 微孔滤膜，进行二维液相色谱制备，色谱柱为HanbonSilica色谱柱（250mmX20mm; 1〇μπι，100人），流动相采用二元混合有机相，其中A相是正己烷，B相是乙醇，采用5%B 等度洗脱60min。采用紫外检测器，检测波长210nm，制备温度为室温，进样量为0. 7mL/针， 流动相流速为13mL/min，收集35. 0-41. 5分钟的馏分，旋转蒸发至干，选择真空度0. 05Mpa、 温度60°C，得到二维液相组分。用50%的乙醇-正己烷溶液溶解二维组分，浓度为84μg/ mL，过0. 45μπι微孔滤膜，进行三维液相色谱制备，色谱柱为AcchromX-Amide色谱柱 (250mmX10mm;10μπι，1〇〇A)，流动相采用二元混合有机相，其中A相是正己烧，B相是乙 醇，采用10%B等度洗脱16min。采用紫外检测器，检测波长210nm，制备温度为室温，进样 量为20μL/针，流动相流速为4mL/min，收集6. 7-7. 7分钟的馏分，旋转蒸发至干，选择真空 度0. 05Mpa、温度60°C，得到目的化合物（kansuininG)。经液相色谱分析，为【背景技术】中所 述kansuininG化合物，纯度为99. 9%，一维制备kansuininG粗品中kansuininG的含量 为 23%〇
[0041] 本发明实施例涉及到的材料、试剂和实验设备，如无特别说明，均为符合医药制备 领域的普通市售产品。
[0042] 上述参照【具体实施方式】对该一种麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法进行 的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在 不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，其特征在于：具体步骤如下： (1) 制备甘遂粗提物：以甘遂为原料，磨成粉末状得到干燥的甘遂粗粉，甘遂粗粉与乙 酸乙酯的料液比按kg/L计1: (8-10)将甘遂粗粉用乙酸乙酯常温下浸泡5h，间歇搅拌，提取 1-3次，静置过夜，取上清，过滤，所得滤液进行减压浓缩至干，溶于正己烷-乙醇溶液中，进 行减压抽滤，得到甘遂浓度为50-500mg/mL的提取液； (2) 对所得到的提取液进行一维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其 中A相是正己烧，B相是乙醇；进样量为50-300mL/针；流动相流速为600mL/mi η ;检测器 为紫外检测器，检测波长200-260nm ;梯度洗脱；根据紫外吸收光谱收集目的组分，减压浓 缩至干，得到一维液相组分； (3) 用乙醇体积分数为30-70 %的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解 至浓度为50-100mg/mL ; (4) 进行二维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己烷，B相 是乙醇；进样量为〇. 3-1. OmL/针；流动相流速为10-18mL/mi η ;检测器为紫外检测器，检测 波长200-260nm ;等度洗脱；根据紫外吸收光谱收集目的组分，减压浓缩至干，得到二维液 相组分； (5) 用乙醇体积分数为10-50 %的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解二维液相组分，溶解 至浓度为50-200 μ g/mL ; (6) 进行三维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己烷，B相 是乙醇；进样量为10-100 μ L/针；流动相流速为3-5mL/mi η ;检测器为紫外检测器，检测波 长200-260nm ;等度洗脱；根据紫外吸收光谱收集目的组分，减压浓缩至干，得到目的产物。2. 根据权利要求1所述的麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，其特征在于：所 述步骤（2)中一维液相色谱分离采用的色谱柱为正相硅胶轴向加压色谱柱，填料为Agela Innoval silica--250mmX 150mm ; 10 μ m, 1 00 A，使用时柱温为室温或 25_40°C。3. 根据权利要求1所述的麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，其特征在于：所 述步骤（4)中二维液相色谱采用的色谱柱为：Hanbon Silica色谱柱--250mmX20mm; ΙΟμπι, 100 使用时柱温为室温或25-40°C。4. 根据权利要求1所述的麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，其特征在于：所 述步骤（6)中三维液相色谱采用的色谱柱为：Acchrom X-Amide色谱柱--250mmX10mm; 10. m，100A,使用时柱温为室温或25-40 °C。5. 根据权利要求1所述的麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，其特征在于：所 述步骤（1) (2) (4) (6)中减压浓缩采用旋转蒸发仪进行，工艺条件为真空度0. 05-0. 08Mpa、 温度 50-60 °C。6. 根据权利要求1所述的麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，其特征在于：具 体步骤如下： (1)制备甘遂粗提物：以甘遂为原料，磨成粉末状得到干燥的甘遂粗粉，甘遂粗粉与乙 酸乙酯的料液比按kg/L计1:9将甘遂粗粉用乙酸乙酯常温下浸泡5h，间歇搅拌，提取3次， 静置过夜，取上清，过滤，所得滤液进行旋转蒸发至干，溶于正己烷-乙醇溶液中，进行减压 抽滤，得到甘遂浓度为94mg/mL的提取液； (2) 对所得到的提取液进行一维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其 中A相是正己烧，B相是乙醇；进样量为150mL/针；流动相流速为600mL/min ;检测器为紫 外检测器，检测波长210nm ;梯度洗脱--0-20% B洗脱25min，100% B洗脱8min ;根据紫 外吸收光谱收集目的组分，旋转蒸发浓缩至干，得到一维液相组分； (3) 用乙醇体积分数为60%的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至 浓度为73mg/mL ; (4) 进行二维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己烷，B 相是乙醇；进样量为〇. 7mL/针；流动相流速为13mL/min ;检测器为紫外检测器，检测波长 210nm ;等度洗脱一一5% B等度洗脱60min ;根据紫外吸收光谱收集目的组分，旋转蒸发浓 缩至干，得到二维液相组分； (5) 用乙醇体积分数为50%的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解二维液相组分，溶解至 浓度为84 μ g/mL ; (6) 进行三维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己烷，B 相是乙醇；进样量为20 μ L/针；流动相流速为4mL/min ;检测器为紫外检测器，检测波长 210nm ;等度洗脱一一10% B等度洗脱16min ;根据紫外吸收光谱收集目的组分，旋转蒸发浓 缩至干，得到目的产物。
【专利摘要】本发明涉及一种麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，该方法采用三维液相色谱技术，以正己烷－乙醇为流动相，以正相硅胶色谱柱为一维制备色谱柱，对甘遂提取物进行组分切割，收集目标组分为一维分离组分；再以Silica(250mm×20mm)色谱柱为二维制备色谱柱，对一维分离组分进行组分切割，收集，旋转蒸发浓缩，得到二维分离组分；再以X-Amide(250mm×10mm)色谱柱为三维制备色谱柱，得到高纯度的kansuinin？G，纯度可以达到98％以上；本发明制备过程重复性高，可操作性好，同时甘遂资源丰富，容易获取，适合大规模生产的要求。
【IPC分类】C07D303/32, C07D301/32
【公开号】CN105330619
【申请号】CN201510542708
【发明人】张耀洲, 马红, 杨珊珊, 陆洪, 庞莉, 王欢欢, 韩朝, 李上文, 盖其静, 杜思邈
【申请人】天津耀宇生物技术有限公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年8月31日
【公告号】CN104447633A, CN105130931A, CN105131069A, CN105153070A, CN105153071A, CN105153181A