的步骤（b)中所描述保持恒定在例如大约5. 8的pH和 大约0. 2-0. 5mS/cm的电导率。
[0081] 在使用磷酸盐缓冲液（0. 12M磷酸盐，pH7. 3 ±0. 2)调节和使用（5mM磷酸 盐+10mM乙酸盐，pH6. 0±0. 1)平衡之后，将填充有强阴离子交换剂（Macropr印High Performance;MPHQ)的色谱柱以70 - 130cm/h的线性流速用< 180g蛋白质每升树脂负载。 在给定条件下，残余的IgA和IgM以及其它蛋白质杂质结合至阴离子交换（AIEX)树脂，同 时在流通和洗涤级分中发现IgG。在收集期间，包含IgG的AIEX流通和洗涤级分的pH降低 至并且保持在pH4.8 ±0. 1。
[0082] 接下来的步骤如（a)中所述进行。
[0083] 收率对比（现有方法对比改自的方法）
[0084] 关于来自相同起始中间体的蛋白质收率的两种方法的对比示于表1至3中。将在 低pH温育（pH4)之后的IgG收率设定为100%。
[0085] 表1 :现有技术与改良的方法之间的对比--由回收的血浆产生的起始物质NA
[0086]
[0087] 表2 :现有技术与改良的方法之间的对比--由源血浆产生的起始物质NA[0088]
[0089]
[0090] 表3 :现有技术与改良的方法之间的对比--由源血浆产生的起始物质 PPTII+III
[0091]
[0092] 已显示，作为经过方法改变和收率增加的结果，在产物的纯度方面没有发生明显 改变。
[0093] 实施例2
[0094] 该实施例证明了与现有的6. 5的pH转换相比，使用Tris缓冲液的不同pH调节对 IgG收率的影响。
[0095] 从实施例1中所描述的PPT-NA出发，如上文所述产生低pH4温育的溶液。提取 八份（每份lkg)，并将其用1MTris缓冲液调节至5·2、5·4、5·6、5·8、6·0、6·2、6·4的pH。 根据现有技术方法使用〇. 2MNaOH调节最后一份的pH。在90分钟的时间期间内进行pH 调节，然后如上文所述在环境温度温育90分钟。然后通过过滤除去所形成的沉淀物。然后 将滤液负载至AIEX柱，如实施例1(b)所述。对比经不同负载的溶液的蛋白质和IgG收率。 结果示于图1中。将在不同pH转换时的1MTris缓冲液与用于实施例1 (a)中所描述的现 有技术方法的〇. 2MNaOH比较对IgG收率的影响显示，随着使用1MTris缓冲液增加的pH 转换（pH: 5. 2 - 6. 2)，使IgG收率的损失最小化。
[0096] 实施例3
[0097] 该实施例显示了所使用的Tris缓冲液的浓度在期望的到5. 8的pH转换的影响。 从低口114温育的溶液出发，分别使用说、0.51和0.2511^8缓冲液将？!1从4转换至5.8。
[0098] 结果示于图2中。独立于起始物质（源PPT-II+III、NA或回收的NA)，IgG损失随 着所使用的Tris缓冲液的摩尔浓度的增加而降低。
[0099] 实施例4
[0100] 该实施例证明了用于在步骤（b)中调节pH的不同试剂（包括胺化合物，优选多羟 基化的胺化合物）对IgG收率的影响。
[0101] 使用以下试剂：2_氨基-1-乙醇（C2H7N0)、双（羟乙基）-胺（C4H11N02)、三（2-羟 乙基）胺（C6H15N03)，优选双（2-羟乙基）-氨基-三（羟甲基）-甲烷（C8H19N05)、N，N-双 (2_羟乙基）甘氨酸（C6H13N04)、1，3_双（三（羟甲基）甲基氨基）丙烷（CllH26N2〇6)、 2-氨基-2-羟甲基-丙烷-1，3-二醇（C4H11N03) (Tris碱）以及这些试剂的组合。
[0102] 从实施例1中所述的PPT-NA出发，如上文所述产生低pH4温育的溶液。提取八 份（每份lkg)，并使用上述试剂的1M溶液将其调节至5. 75至5. 85的pH。根据现有方法 使用0. 2MNaOH调节最后一份的pH。在90分钟的时间期间内进行pH调节，然后如上文所 述在环境温度温育90分钟。然后通过过滤除去所形成的沉淀物。对比不同滤液的IgG收 率。
[0103] 结果示于表4中。所述结果显示了使用用于步骤（b)中的pH转换的不同试剂（作 为1M溶液）对IgG收率的影响与使用如现有技术方法中所用的0. 2MNaOH对IgG收率的 影响的比较。结果显示，与现有技术方法相比，采用不同的胺化合物增加了IgG收率。尤其 有利的是使用多羟基化的胺化合物。
[0104] 表4 :与现有技术方法相比的，现有技术与使用不同中和试剂的改良的方法之间 的对比--由源血浆产生的起始物质NA
[0105]
【主权项】
1. 在纯化过程中从包含IgG、其它免疫球蛋白和/或其它蛋白质污染物的溶液增加IgG 收率的方法，包括 (a) 提供包含IgG、其它免疫球蛋白和/或其它蛋白质污染物的酸性溶液，所述酸性溶 液具有3. 5至5. 2的pH和至少10g/l的总蛋白质浓度； (b) 将溶液调节至5. 2至6. 2的pH，同时保持低于1. 5mS/cm的电导率； (c) 将所述溶液温育至少15分钟；和 (d) 除去任何沉淀物。2. 根据权利要求1所述的方法，其中包含IgG的溶液包含源自血浆的抗体。3. 根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中包含IgG的溶液通过人血浆或人的 冷沉淀物贫乏的血浆的乙醇分级获得。4. 根据权利要求3所述的方法，其中包含IgG的溶液为来自辛酸沉淀法的上清液。5. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中步骤（a)中的溶液已通过超渗滤澄清。6. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中步骤（a)中的溶液的pH为3. 9至5. 0， 优选3. 9至4. 6,最优选3. 9至4. 3。7. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中步骤（a)中的蛋白质浓度为10至50g/ 1，优选 20 至 25g/l。8. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中将步骤（b)中的pH调节至pH5. 6至6. 0， 优选5. 8至6.0。9. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中步骤（b)中的pH调节通过添加至少一种 具有或不具有羧基的多羟基化的胺化合物来完成。10. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中采用浓度高于250mM，优选高于500mM， 更优选高于750mM，最优选约1M的Tris调节步骤（b)中的电导率。11. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中步骤（b)中的电导率为低于1.OmS/cm， 优选低于〇. 8mS/cm，更优选0. 2至0. 5mS/cm。12. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中将步骤（b)中的pH调节至pH5.6至 6. 0,和电导率为0. 2至0. 5mS/cm。13. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中步骤（c)中的温育时间为至多72小时、 至多48小时、至多24小时，优选至多12小时，更优选至多6小时，最优选15分钟至90分 钟。14. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中步骤（c)中的温育在环境温度进行。15. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中将步骤（d)中的沉淀物通过深度过滤 除去。16. 根据前述权利要求任一项所述的方法，其中在步骤（d)之后，在允许污染物结合至 树脂但不允许IgG结合至树脂的条件下进行离子交换色谱法步骤。17. 根据权利要求16所述的方法，其中所述离子交换色谱法为阴离子交换色谱法。18. 根据权利要求16或权利要求17所述的方法，其中所述离子交换色谱法在没有对溶 液的电导率另外进行调节的情况下进行。19. 根据前述权利要求任一项所述的方法，还包括病毒灭活步骤。20. 根据权利要求19所述的方法，其中所述病毒灭活步骤为低pH处理。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述低pH处理在步骤（a)之前进行。
【专利摘要】本发明涉及改良的方法，用于纯化IgG，改进每升起始物质的IgG的收率而不损害产品的质量。
【IPC分类】C07K1/36, C07K16/06
【公开号】CN105358571
【申请号】CN201480037548
【发明人】I·艾尔曼亚维, D·西格莫德
【申请人】瑞士杰特贝林生物制品有限公司
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2014年7月1日
【公告号】EP3016976A1, WO2015000886A1