麦赤霉病菌的抑制作用
[0044]
[0045] 注：CK代表对照；1为培养2地，2为培养4她，3为培养72h。表中数据为平均值+ 标准差，同列数据后面不同字母表示在P<〇. 05水平差异显著。
[0046] 由表1可知，在平板上接菌后培养至72h时，菌株DSerl305对小麦赤霉病菌的抑 制率为65. 57%，明显高于4化和24h的抑制作用，和对照组相比对小麦赤霉病菌的抑制作 用效果差异显著。
[0047] 2、粘质沙雷氏菌DSerl305产生铁载体特性
[0048] 采用CAS检测平板法检测菌株产生铁载体能力，包括：在铁载体检测培养基（刃 天青（CA巧 60. 5mg/L，FeCls. 6&0Immol/L，十六烷基Ξ甲基漠化锭（皿TMA)72. 9mg/L，pH 7.0,琼脂20g/L。）平板上点接同一株菌，均匀接种Ξ点，菌悬液（0成。。> 1)每次接种量为 4μL(3~5μL均可），置于28°C恒溫培养箱培养比后再倒置培养3d。观察并测量澄黄色 晕圈大小和菌落直径，结果见图5及下表2。
[0049] 表2菌株DSerl305在铁载体检测培养基上产生铁载体能力分析 阳化0]
[0051] 由图5和表2可知，菌株DSer1305具有较强的产生铁载体的能力。
[0052] 3、粘质沙雷氏菌DSe;rl305产生果胶酶特性
[0053] 1)果胶酶活性菌株初筛
[0054] 在牛肉膏蛋白腺培养基中按照质量体积百分含量添加0. 5%果胶，点接粘质沙雷 氏菌DSerl305, 一个培养皿中接种5点，在30°C下恒溫培养5天，培养基表面用质量浓度为 2%的十六烷基Ξ甲基漠化锭溶液浸润30min，倒去十六烷基Ξ甲基漠化锭溶液，用1M化C1 溶液清洗培养基表面，观察菌落周围区域。菌落周围有透明圈产生者为阳性；没有透明圈产 生者为阴性，透明圈越大说明产生果胶酶的活力越强。
[0055] 2)果胶酶活性菌株复筛
[0056]点接初筛中果胶酶活性菌株，一个培养皿中一株菌均匀点接Ξ个位置，接菌量为 3μL(1~5μL均可），在30°C下培养4d(2~4d均可），培养基表面用质量浓度为2 %的 十六烷基Ξ甲基漠化锭溶液浸润30min，倒去十六烷基Ξ甲基漠化锭溶液，用1M化C1溶液 清洗培养基表面，观察并测量透明圈直径和菌落直径，结果见图6及下表3。
[0057] 表3菌株DSe;rl305在平板上产生果胶酶能力分析
[0058]
[0059] 由图6和表3可知，粘质沙雷氏菌DSerl305具有产生果胶酶的特性。 阳060] 4、粘质沙雷氏菌DSer1305对小麦发芽和幼苗生长的影响试验
[0061] 1)菌悬液的制备
[0062] 将保存在试管中的粘质沙雷氏菌DSer1305接种在YM液体培养基内，28°C(25~ 30°C均可）培养4d(3~4d均可），10000巧m(8000~12000巧m均可）离屯、9min(8~lOmin 均可），收集菌体，使用0. 9 % (m/v)生理盐水调整菌悬液0D> 1 (约109 一i°c化/mL)，取制 备好的菌悬液与无菌水按比例1:2、1:1、2:1(V/V)混合，备用； 阳〇6引。种子挑选 W64] 挑选饱满、无霉变、大小均一、无破损的小麦种子，品种为周麦18,国家审定小麦品 种，先用无菌水冲洗7次巧~8次均可），W冲去表面灰尘； 阳0化]3)种子吸胀和接种菌悬液
[0066] 先用无菌水浸泡冲洗过的小麦种子，置于30°C恒溫培养箱、遮光1化使其充分吸 水（即吸胀），过滤除去多余水分；再将菌悬液与无菌水的混合液分别置入烧杯中浸泡吸胀 的小麦种子3.化(3~4h均可），无菌水作为对照（CK)，使种子与菌悬液充分接触，后置于 28°C(25~30°C均可）恒溫培养箱中，直到种子露白（即接菌）；
[0067] 4)促进种子发芽及幼苗生长试验
[0068] 把露白种子点播在直径为12畑1、高3cm盛有无菌滤纸的玻璃平皿中，每皿播种40 粒种子，而后每皿喷洒5血无菌水，置于14h光周期23°C、1化暗周期30°C，相对湿度为 65%~70%，光强为ILux的溫室环境下培养5山观察、记录出芽情况；每隔一天接种菌悬 液30mU每2d诱1次无菌水，W保持皿内的相对湿度，只接等量无菌水的作为对照（CK)， 每个处理3个重复，每个重复3组平行；3天后测定皿内小麦种子的出芽率、成活率，培养1 周后测定幼苗的苗高、根长、根数、鲜量等指标，用SPSS11. 0软件统计分析，评价接种菌株 DSerl305对小麦种子发芽和幼苗生长的影响，结果见图7及下表4~6。图7中A、B、C依 次代表对照组与比例1:2处理组、1:1处理组及2:1处理组的对比结果。
[0069] 表4接种菌株DSerl305对小麦发芽率的影响
[0070]
[0071] 表5接种菌株DSer1305对小麦成活率的影响
[0072]
[0073] 由表4、表5可知，比例1:1处理组的发芽率和成活率为99. 44%，均低于对照组 巧9. 72% );比例2:1处理组的发芽率及成活率稍高于对照组。
[0074] 由表6可知，比例1:2处理组的苗高、根长、根数和鲜重均高出对照组（CK)和其他 处理组，而对照组的各项指标均低于处理组。并且，处理组中菌悬液：无菌水=1:2为最佳 配比。 阳0巧]表6接种菌株DSerl305对小麦幼苗生长的影响
[0076]
[0077] 注：同栏每列数据后不同小写字母表示p<0. 05水平的差异性显著。 阳〇7引实施例2
[0079] 粘质沙雷氏菌DSerl305(CCTCCN0:M2013624)在制备抑制小麦赤霉病菌的生防 菌剂中的应用（或是在防治小麦赤霉病害中的应用），具体为：取菌株DSerl305扩大培养， 收集菌体，无菌水稀释后得到液态生防菌剂，直接浸泡小麦种子或喷施麦苗即可。菌种扩大 培养及菌体收集方法均为现有技术，此处不再寶述。
[0080] 实施例3
[0081] 粘质沙雷氏菌DSerl305(CCTCCN0:M2013624)在制备促进小麦发芽和幼苗生长 的生物促生菌剂中的应用（或是在促进小麦发芽和幼苗生长中的应用），具体为：取菌株 DSerl305扩大培养，收集菌体后真空干燥，得到固态生物促生菌剂。在施用前与水混合，浸 泡小麦种子或喷施麦苗即可。 阳0間实施例4
[0083] 用于防治小麦赤霉病害的生防菌剂，制备方法同实施例3。
[0084] 用于促进小麦发芽和幼苗生长的生物促生菌剂，制备方法同实施例2。
【主权项】
1. 大豆根瘤内生菌，其特征在于：该菌的名称为粘质沙雷氏菌（Serratiasp.) DSerl305,保藏编号：CCTCCNO:M2013624。2. 如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌在制备铁载体和/或果胶酶中的应用。3. 如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌在制备抑制小麦赤霉病菌的生防菌剂中的应 用。4. 如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌在制备促进小麦发芽和幼苗生长的生物促生 菌剂中的应用。5. 如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌在防治小麦赤霉病害中的应用。6. 如权利要求1所述的大豆根瘤内生菌在促进小麦发芽和幼苗生长中的应用。7. 用于防治小麦赤霉病害的生防菌剂，其特征在于：包含权利要求1中的大豆根瘤内 生菌。8. 用于促进小麦发芽和幼苗生长的生物促生菌剂，其特征在于：包含权利要求1中的 大豆根瘤内生菌。
【专利摘要】本发明公开了一种大豆根瘤内生菌及其应用，生防菌剂及生物促生菌剂，属于作物栽培种植及作物病害生物防治技术领域。本发明中大豆根瘤内生菌为粘质沙雷氏菌(Serratia？sp.)DSer1305(保藏编号：CCTCC？NO:M？2013624)，是从大豆根瘤样品中分离出的一株内生细菌，为革兰氏阳性菌；菌体呈短杆状，无芽孢，菌落呈乳白色，边缘圆整、突起有光泽，表面有皱褶；该菌能产生铁载体和果胶酶，抗小麦赤霉病菌并促进小麦发芽及幼苗生长，可用于制备生防菌剂和生物促生菌剂。CCTCC NO: M 201362420131201
【IPC分类】C12N1/20, A01P21/00, C12R1/43, C12P1/04, A01P3/00, C12N9/88, A01N63/00
【公开号】CN105368751
【申请号】CN201510898665
【发明人】赵龙飞, 徐亚军, 侯怡婷, 张梦瑶, 李亚楠, 李小雨, 彭顶华
【申请人】商丘师范学院
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年12月8日