CN0005共 同孵育2h，然后再与Golgiplug-块孵育6h.测定TNF-α;
[0035] 图14是RAW264 · 7细胞的TNF-α荧光表达。
【具体实施方式】
[0036] 下述实施例用于进一步说明本专利但不意味着限制本专利 [0037] 实施例1:化合物6，9a，1la及化合物NK007-1、化合物NK007-2的合成 [0038]化合物6(如图3所示）
[0039]N2保护下，在250mL反应瓶中加入150mL新蒸无水THF，室温下分批加入1.14克 (0 · 03mol)NaBH4，电磁搅拌下分批加入6 · 84克(0 · 02mol)原料5，搅拌10分钟，缓慢加入四氯 化锆6.99克(0.03mol)，室温搅拌10小时，TLC检测原料反应完全。冰水浴冷却下滴加10mL水 和10mL稀盐酸充分分解过量NaBH4，脱溶后用250mLCH2C12和50mL水稀释，搅拌分液，有机相 经水洗，饱和食盐水洗涤，无水MgS(k干燥，脱溶得白色固体产品6.46克，收率95 %。熔点 18^1831^11^^(0)(:13,40010^)37.81(8,111),7.75(8,111),7.56(8,110,7.54(8,110, 7.18(s,lH),5.11(s,2H),4.13(s,3H),4.12(s,3H),4.06(s,3H),4.02(s,3H).
[0040] 化合物9a(如图4所示）
[0041 ] 在250mL反应瓶中，N2氛围中加入0·27克（0·9mmol)固体光气，20mL无水CH2C12，缓 慢滴加1.1克(2.5mmo1)上述所得酸8a和三乙胺0.28克(2.8mmol)的100mL无水CH2C12，溶液， 混合物室温搅拌2小时，升温至回流8h，并在回流条件下缓慢滴加1.25mL(5.2mmol)无水 SnCl4的20mLCH2C12溶液，滴毕，继续回流反应6h。冷却，慢慢加入15mL1N盐酸，搅拌，分液， 有机相经水，饱和食盐水洗涤，无水Na2S04干燥，脱溶后经快速减压柱层析得亮黄色固体，收 率96%，熔点224-227°<3; 111匪1?(40010^，0)(：13)39.09(8，1!1)，7.77(8，1!1)，7.75(8，1!1)， 7.27(s,lH),5.71(d,J=18.0Hz,1H),4.68(d,J=18.0Hz,1H),4.44-4.40(m,1H),4.16(s, 3H)，4.12(s，3H)，4.09(s，3H)，4.08(s，3H)，2.64-2.56(m，4H);13C匪R(100MHz，CDC13)S 195.6.174.0. 151.8.149.8.149.2.149.0.137.2.127.9.124.5.123.2.121.8.121.5， 107.6.104.1.102.9.102.4.61.0. 56.1，56·0,55·9,55·8,40·7,30.1,20.8.
[0042] 化合物11a(如图5所示）
[0043]在1OOmL反应瓶中加入50mL无水THF，室温N2保护下一次加入0.08克（2mmo1)NaBH4， 0.41克（lmmo1)原料10a，混合物搅拌1Omin，缓慢加入四氯化锆0.23克（lmmo1)，室温搅拌反 应24h，TLC检测原料反应完全。冰水冷却，用20mL水分解，再加入50mLCH2C12搅拌，硅藻土过 滤，CH2C12洗涤，分液，有机相再经饱和食盐水洗涤，无水Na2S〇4干燥，脱溶得淡黄色固体产 品，收率93 %，经手性HPLC测试ee值99 % (测试条件:AD-H柱，流动相比例:正己烷:异丙醇= 75:25，外加0 · 1 % 的Et3N，紫外吸收波长254nm，流速：1 ·OmL/min);熔点272°Cdec;咕NMR (300MHz，CDC13)S7.83(s，1H)，7.82(s，1H)，7.31(s，lH)，7· 15(s，lH)，4.63((1,J= 14.4Hz， 1H),4.12(s,6H),4.06(s,3H),4.05(s,3H),3.67(d,J=14.4Hz,lH),3.50-3.46(m,lH), 3.39-3.34(m,lH),2.94-2.89(m,lH),2.52-2.46(m,2H),2.29-2.21(m,lH),2.08-2.01(m, 1H) ,1 ·95-1·90(ι?，1H) ,1 ·81-1·74(ι?，1H);13CNMR(100MHz，CDC13)S148.7,148.5,148.4， 126.3.125.9.124.4.123.6.123.4.104.0. 103.5.103.3.103.1.60.2.56.1.55.93.55.89, 55.2.54.0. 33.8.31.3.21.7.
[0044] 化合物NK007-1和NK007-2 (如图6所示）
[0045] 于250mL单口瓶中加入l.Ommol苹果酸，分别加入50mLCH2C12和50mLCH30H，室温， 缓慢滴加1.Ommol娃儿藤碱的50mLCH2C12溶液，滴毕，继续搅拌反应8h，过滤即得相应酸的 娃儿藤碱盐衍生物。其中，使用L-苹果酸时得到的产物为NK007-1，使用D-苹果酸时，得到的 产物为NK007-2。
[0046] 化合物NK007-1和NK007-2的理化性质（表1)
[0047] 表 1
[0049] 实施例2:化合物NK007-1和NK007-2的抗烟草花叶病毒活性(表2)
[0050] 1、病毒提纯及浓度测定：
[0051]病毒提纯及浓度测定参照南开大学元素所生测室编制烟草花叶病毒S0P规范执 行。病毒粗提液经2次聚乙二醇离心处理后，测定浓度，4°C冷藏备用。
[0052] 2、化合物溶液配制：
[0053] 称量后，原药加入DMF溶解，制得1X105yg/mL母液，后用含1%。吐温80水溶液稀释 至所需浓度;宁南霉素制剂直接兑水稀释。
[0054] 3、离体作用：
[0055]摩擦接种珊西烟适龄叶片，用流水冲洗，病毒浓度lOyg/mL。收干后剪下，沿叶中脉 对剖，左右半叶分别浸于1%。吐温水及药剂中，30min后取出，于适宜光照温度下保湿培养， 每3片叶为1次重复，重复3次。3d后记录病斑数，计算防效。
[0056] 4、活体保护作用：
[0057]选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，全株喷雾施药，每处理3次重复，并设1%。吐温 80水溶液对照。24h后，叶面撒布金刚砂(500目），用毛笔蘸取病毒液，在全叶面沿支脉方向 轻擦2次，叶片下方用手掌支撑，病毒浓度10yg/mL，接种后用流水冲洗。3d后记录病斑数，计 算防效。
[0058] 5、活体治疗作用：
[0059]选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，用毛笔全叶接种病毒，病毒浓度为lOyg/mL，接 种后用流水冲洗。叶面收干后，全株喷雾施药，每处理3次重复，并设1%。吐温80水溶液对照。 3d后记录病斑数，计算防效。
[0060]6、活体钝化作用：
[0061]选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，将药剂与等体积的病毒汁液混合钝化30min后，摩擦接种，病毒浓度20邱/!^，接种后即用流水冲洗，重复3次，设1%。吐温80水溶液对照。 3d后数病斑数，计算结果。
[0062] 抑制率（％ ) = [(对照枯斑数-处理枯斑数)/对照枯斑数]X100%
[0063]表2
[0065]通过对两个光学纯的NK-007异构体抗烟草花叶病毒试验数据可知：
[0066] (S)-娃儿藤碱与L-苹果酸形成的盐NK007-1的活性比与D-苹果酸形成的盐NK007- 2活性高。
[0067]测试结果显示，化合物NK007-1和NK007-2活性显著，明显高于NK007。
[0068] 实施例3:化合物NK007-1和NK007-2的调节免疫活性
[0069]测试方法
[0070] 材料：手术剪2把，眼科镊2把，玻片，96孔板（corning公司），移液器，40μπιcel1 strainer，15mL离心管(BD公司），EP管，计数板，显微镜，离心机，排枪，Babl/c小鼠（维通利 华）。试剂：PBS(北京索莱宝公司），RPMI-1640培养基和DMEM培养基（Gibco公司），血清 (Gibco公司），红细胞裂解液(北京索莱宝公司），LPS(sigma公司）；台盼蓝。双抗(碧云天公 司）（一)光学异构体对LPS刺激脾细胞产生TNF-α的影响
[0071] 操作步骤：
[0072] 1)各种溶液的配置:NK007光学异构体母液为ImM;
[0073] LPS：lmg/mL；
[0074] 完全培养基：1640+10%血清+1 %双抗。
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