建立的方法，以经验决定。
[0058] 本发明的医药组合物可藉由任何适用的路径投与，包含但不限于非经口服的或经 口服的投与方式。该用于非经口服的医药组合物包含溶液、悬浮液、乳化液、及固态的可注 射的组合物，其在使用前可用溶剂立刻溶解或悬浮。该注射型可藉由将一种或多种的活性 成分溶解、悬浮、或乳化于稀释剂中以制得。该等稀释剂的例子为用于注射的蒸馏水、生理 食盐水、植物油、酒精及其组合。再者，该注射型可能包含稳定剂、助溶剂、悬浮剂、乳化剂、 缓和剂、缓冲液、保存剂等。该注射型于最后的制备步骤是经灭菌的、或以无菌步骤制得。本 发明的医药组合物亦可制备成无菌的固态制备物，例如，藉由冷冻干燥，且可在灭菌后使 用、或于使用前立速溶于无菌的可注射水或其他无菌的稀释剂中以使用。
[0059] 根据本发明，该组合物亦可透过口服路径投与，其中该组合物可为固态或液态。该 固态组合物包含片剂、丸剂、囊剂、分散的粉剂、颗粒及其类似物。该口服组合物亦包含漱口 水，其可藉此黏贴于口腔中，以及舌下片剂。该囊剂包含硬胶囊及软胶囊。于该等口服用固 态组合物，一种或多种的活性化合物可被单独地混合或以稀释剂、结合剂、粉碎剂、润滑剂、 稳定剂、助溶剂、并接着以一传统方式制备成制备物。若有必要时，该等制备物可以包覆剂 进行包覆，或可以两种或多种包覆层包覆。另一方面，该口服用液态组合物包含医药上可接 受的水溶液、悬浮液、乳化液、糖浆、酏剂等。于该等组合物中，一种或多种活性化合物可被 溶解、悬浮或乳化于常用的稀释剂中（如纯化水、乙醇或其混合物等）。除了该等稀释剂外， 该组合物亦可包含浸润剂、悬浮剂、乳化剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、保存剂及缓冲液及其 类似物。
[0060] 于实例中的本发明萃取物、分液或化合物或其医药组合物，经确认可于HCC细胞中 造成细胞凋亡，进而指出该等物质具有抗癌活性，其可用于预防或治疗癌症，尤其是HCC。另 外，其可有效治疗纤维化，尤其是肝纤维化。
[0061]因此，本发明提供该萃取物、该分液或式I化合物于制备用于治疗癌症（尤其是 HCC)的医药的用途。另外，本发明提供用于预防或治疗癌症或纤维化(尤其是HCC及肝纤维 化)的方法，其包含投与本发明的治疗有效量的萃取物、分液或化合物至有需求的对象。 [0062]以下所提供的实例是用于阐述本发明，但不应以任何方式局限本发明范围的方式 来解读。
[0063] 实例
[0064] 实例1:从GP或红景天(Rhodiola rosea)萃取及纯化
[0065] 将石莲(Graptopetalum paraguayense)(称作GP)的叶子磨碎，且于_20°C冷冻干 燥成粉末，并于萃取前储存于25°C的防潮室中。首先，1.5g GP粉末与10ml 100%的甲醇 (MeOH)-起剧烈震荡5分钟，接着以1500g进行5分钟离心。经移除上清液后，将10ml的水、 100%丙酮、100%甲醇、100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、100%DMS0及30%DMS0加入各个 离心沈淀物以悬浮成各个萃取物。该等悬浮物分别藉由剧烈震荡5分钟以混合，并于1500g、 5分钟、离心两次，再于930(^离心5分钟，并于室温藉由层流方式以0.45以111滤纸过滤。将30% DMS0上清液可以Sephadex LH-20管柱进行分馏得到四个分液(F1-F4)、或以150mg/ml的原 液(是指30%DMS0 GP萃取物)存放于-20°C。该GP萃取物或分液HH-F3亦以透析膜(丽0)12-14，000) (Spectrum Laboratories，Rancho Dominguez，CA)进行对水透析，以取得活性化合 物。透过西方墨渍法，分析AURKA、AURKB、及FLJ10540的蛋白表现程度来分析活性分子，其称 为分液HH-F3。此外，该分液HH-F3进一步以HPLC、及 1H-及13C-NMR光谱分析以辨识该活性分 子的结构。
[0066] 相似地，将植物红景天(Rhodiola rosea)(简称为RS)冻干成粉末，并于萃取前存 于25°C的防潮室中。将1.5g的RS粉末溶解于10ml水中，且接着以1500g离心5分钟，接着于室 温藉由层流方式以〇. 45μηι滤纸过滤。该样本以150mg/ml的原液存放于-20°C。
[0067] 于本发明的分液HH-F3进行化学性分析，根据于1Η及13C NMR光谱中大量的芳香族 讯号，鉴定出其主要成分为多酚类化合物。于HH-F3分液的主要化合物经鉴定为单宁，归因 于经冷冻干燥后其特有的粉红色，并带有部分银色似金属光泽的特征。藉由色度分析法分 析浓缩的单宁量以测定HH-F3分液的总单宁含量约为68%，其中于0D 5QQ监测时以儿茶素作 为标准。该HH-F3分液的HPLC图谱（图1)显示两组化合物(A组和B组），其于HH-F3分液中具有 截然不同的分子量范围，且于B组中可侦测到一主要及一次要的成分。一富含原花色素的高 分子量分液HH-F3a (相较于起始物质HH-F3的量，HH-F3a有71.9 %的产量)是从HH-F3分液经 透析以制得。简单来说，HH-F3(112. lmg)藉由透析膜(MWC0 12-14，000)进行对水透析，得到 内膜分液(HH-F3A，80.6mg)及外膜分液(7.4mg)。经以西方墨渍法（图6 (D)图）测量AURKA的 消失，以判别出该分液含有活性化合物。HH-F3a的原花色素分液的主要骨架是决定为原花 色素聚合物(见如下），及其生理化学特性，包含列于表一的平均分子量(mMW)、平均聚合度 (mDP)、PC:ro的比例及立体化学(顺式:反式hmMff及mDP是藉由分析降解的尾端及延长的单 体的比例以决定。此外，为了简化制备步骤，遂施行另一种藉由将GP萃取物直接对水透析的 方法(方法II )，而由方法II所制备的化合物的生理化学数据亦列于表一中。列于表一的生 理化学特性指出由方法II所制备的分液与方法K用以制备HH-F3a的方法)所制得者相同。
[0068]
[0069] HH-F3a的预测结构：具有高原飞燕草素比例（>95%)的聚合的原花色素（21〈n〈 38)〇
[0070] 表一
[0071 ]本发明具有式I结构式的原花色素聚合物的生理化学特性 [0072]
[0074] 1制备HH_F3a的方法(藉由Sephadex LH-20色层分析）
[0075] 2藉由透析
[0076]由于没有自GP取得的聚合性化合物被报告过，因此，以另一种珍贵的景天科 (Crassulaceae)草药红景天(Rhodiola rosea)(金色的根)的多酸化合物来做为参考化合 物，以鉴定HH-F3a的结构。R.rosea被报导具有聚合性原花色素 (PAChHH-FSa分液的主要成 分的结构与R. rosea的原花色素化合物十分相近(见表二），但具有不同的原花青素单元(PC 单元)较次讯号（〈5%)，此讯号无法于13C匪R光谱（δ。114ppm，B环C-2'及C-5'）中被侦测 到。此外，该PAC化合物易于许多常见的葡萄品种中发现，像是葡萄(Vitis vinifera)。因 此，亦以得自葡萄（Vitis vinifera)的PACs进行比较。表二显示自R.rosea及葡萄 (V.vinifera)(-种常见的葡萄品种）的原花色素聚合物的生理化学特性。比较表二的数 据，于HH-F3a分液的原花色素化合物的PD对PC比例为2.5 X内、R.rosea的mDP及mMW为3.0 X，以及30至80 X、1 · 1至4 · 9 X、及4 · 7至41 · 3 X，较葡萄（Vitis vinifera)的mDP、mMW及3-〇-没食子酰基(3-0-galloyl)百分比（％)高。就我们所知，尚无任何原花色素化合物从GP中 被分离出，且亦无具有相同生理化学特性的原花色素化合物被报告过。此证据即表明于HH-F3a分液中所发现的原花色素化合物为一新颖化合物，其富含3,4,5_三羟基苯甲基部份(包 含一个B环的单元及没食子酸(gallie acid));其与R.rosea中所发现者十分相似，但相 较于葡萄皮及种子中所发现者来的高。
[0077]表二
[0078]已知的原花色素聚合物的生理化学特性 [0079] L0081」1欧洲葡萄与地中海及中亚问本质者
[0082] 实例3:功效实例
[0083] 1.存活试验
[0084] 将细胞种于24孔盘中（每孔4,000-5,000细胞），过夜培养，接着以30%01^0 6?萃 取物或 HH-F3 分液处理 0、24、48、或72小时。经处理后，以11?83(137111]\1恥(：1、2.7111]\11((：1、 10mM Na2HP〇4、2mM KH2PO4)轻轻地清洗细胞三次，接着以〇.5μg/ml MTT(溴化3-(4,5-二甲 基唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鑰)培养2小时。将培养基移除，并将溶解于100%DMS0的深蓝 色晶体，于室温中作用10分钟。以ELI SA分析仪于570nm测量其0D值。
[0085] 2.西方墨渍法
[0086] 所有的样本藉由加温至95°C 10分钟以变性，并进行8%或10%的SDS-聚丙烯酰胺 凝胶电泳（SDS-PAGE)，于焦集胶体(stacking gel)及分离胶体(running gel)分别以80V及 100V进行。经SDS-PAGE后，藉由Bio-Rad转渍系统，将蛋白质转渍到聚偏氟乙烯 (polyvinylidene difluoride，PVDF)膜。待蛋白质转渍后，将该膜以丽春红(Ponceau S)染 剂染色以确认蛋白转渍的效率及一致性。再以5%的无脂的脱脂牛奶(BD)，将该膜于室温进 行阻隔（block)30分钟，接着以初级抗体于4°C整夜培养。之后，以lx Tris缓冲的生理食盐 水TWeen-20(TBST)冲洗膜三次(每次10分钟）。该膜再以二级抗体培养2小时。接着，以lx TBST冲洗三次（每次10分钟）。藉由加入HRP受质过氧化物溶液/发光胺反应剂（luminol reagents)(Immobilon?西方化学发光受质，微孔，以1:1比例混合）即可使二级抗体的讯号 可视化，并以Fujifilm LAS4000发光影像分析系统侦测。
[0087] 3.细胞计量
[0088] 将细胞种于12孔盘中（每孔10,000-30，000细胞)整夜，并接着以HH-F3分液处理0、 24、48、或72小时。将该等细胞以胰蛋白酶消化后，接着经与0.4%台酚蓝混合后计算。
[0089] 4.细胞周期分析及流式细胞仪
[0090] 经胰蛋白酶处理后的细胞，以lx PBS清洗三次，将该等细胞以800g离心5分钟。接 着，将该等细胞重新悬浮于溶于PBS的70%乙醇中，并置于-20°C超过16小时。经800g离心5 分钟后，该细胞沈淀物以含有l〇〇μg/ml RNAse A(Sigma-Aldrich)的冷roS重新悬浮20分 钟。接着，将该等细胞以20μg/ml碘化丙啶(PI，Sigma-Aldrich)进行染色20-30分钟，并以BD FACSCanto测量及以Flowjo软件分析其DNA含量。
[0091 ] 5.粒线体膜电位分析
[0092]粒线体膜电位是使用JC-1 (碘化5,5'，6,6'-四氯-1，1'，3,3'-四乙基苯并咪唑碳 花青)分析;JC-1是购自Cayman Chemical Co.。以每孔7000个细胞的密度，将培养的细胞种 于96孔黑色盘中，整夜培养，接着使用