剂(诸如siRNA分子)可由 技术人员参考编码Ku70和/或Ku80的基因和mRNA的已知序列来选择或设计。根据运些实施 方案的适体适于被用作使用DNA损伤剂(例如化学治疗剂或放射物)的癌症疗法的辅助物。
[0024] 事实上，由本发明的适体和基因沉默剂的运些组合提供的优势是本发明的另外的 方面提供了与阻止或抑制Ku70和/或Ku80的基因表达的基因沉默剂缔合的包含SEQ ID NO: 1、2或3的适体或该适体的配体结合片段。基因沉默剂可选自由W下组成的组:SiRNA分子、 核酶和反义寡核巧酸。
[0025] 在另外的方面，本发明提供了药物组合物，所述药物组合物包含本发明的适体或 其配体结合片段，及药学上可接受的赋形剂。本发明的适体可任选地与抗癌剂上考虑 的方式缔合。在合适的实例中，药物组合物可W为可注射的组合物的形式。可选地，可将药 物组合物配制为用于口服施用。
[0026] 本发明还提供了用于在预防和/或治疗癌症中使用的根据本发明的适体或W上考 虑的那样的药物组合物。如本文别处所讨论的，待预防和/或治疗的癌症可W是脑癌。可将 药物组合物配制为W药物组合物的剂量单位提供治疗有效量的适体。可选地或另外地，可 将药物组合物配制为提供治疗有效量的与适体缔合的抗癌剂。
[0027] 在另外的方面，本发明提供了预防和/或治疗受试者中的癌症的方法，所述方法包 括将治疗有效量的本发明的药物组合物施用至需要其的受试者。
[0028] 如W上提及的，本发明的适体及其配体结合片段适用于诊断应用。在此类应用中， 适体或配体结合片段可与检测部分缔合。在本发明的运些实施方案的上下文中的检测部分 可W是可与适体缔合的且其检测提供对适体定位的指示的任何化合物或基团。因此，对与 本发明的适体缔合的固定检测部分的检测可指示本发明的适体已与例如患者中的或来自 患者的样品中的癌症相关配体结合。
[0029] 仅通过举例的方式，合适的检测部分可选自由W下组成的组:放射性核素、染料、 巧光团、纳米颗粒(诸如纳米壳）、纳米笼和显色剂(例如酶，诸如辣根过氧化物酶，其能够在 显色底物中引起显色变化）。
[0030] 使纳米颗粒诸如纳米壳或纳米笼适于被用作抗癌剂的纳米颗粒诸如纳米壳或纳 米笼的特性(在生物组织吸收很低的光谱区域中吸收福射的能力，所述区域诸如近红外区） 还使运些剂适于被用作检测部分。
[0031] 例如上考虑的方式，任选地与检测部分缔合的本发明的适体可被用于癌症的 诊断或临床分级。在本发明的一方面，提供了诊断罹患癌症的受试者中的癌症或对罹患癌 症的受试者中的癌症分级的方法，所述方法包括对患者提供一定量的与检测部分组合的本 发明的适体，并确定检测部分在受试者中的保留，并从而确定适体在受试者中的保留。本发 明的适体(及缔合的检测部分)的保留可指示在受试者中癌症的存在。另外，适体(及缔合的 检测部分)在受试者中的保留可指示受试者罹患的癌症的临床分级。
[0032] 本发明的适体的另一个应用在于它们作为研究试剂的潜在用途。存在一些运样的 情形:其中使能够特异性地结合与癌细胞相关的配体的剂可得可W是期望的。仅通过举例 的方式，运些情形可包括细胞培养测定或细胞分离测定。适于W该方式使用的本发明的适 体或其配体结合片段可包含检测部分，所述检测部分可W是W上讨论的那样的检测部分。 例如，在期望将本发明的适体用于促进细胞的流式细胞分选的研究试剂的情况中，如先前 所考虑的，可将适体与巧光团缔合。可选地，可将作为研究试剂使用的本发明的适体与其他 功能部分缔合。仅通过举例的方式，可将适体与磁珠结合，所述磁珠允许表达由本发明的适 体结合的配体的细胞藉W可被分离的选择性策略。
[0033] 虽然本发明的适体可能够结合与大范围的癌症相关的配体，并因此可应用于例如 任何此类癌症的治疗、诊断或分级，但是在优选实施方案中，所讨论的癌症可W是脑癌。可 受益于本发明的适体的治疗或诊断应用的脑癌的合适的实例包括，但不限于选自由W下组 成的组的那些:神经胶质瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤和神经銷肿瘤。在运些实例中，本发明的适体 特别地可用于关于神经胶质瘤的治疗或诊断应用。
[0034] 在另外的实施方案中，本发明提供了试剂盒，所述试剂盒包含本发明的适体或其 配体结合片段。本发明的试剂盒可包含本文公开的发明的一种、多于一种、或所有的适体。 本发明的试剂盒可任选地包含另外的成分，诸如可用于结合的适体的定位的检测部分。本 发明的试剂盒可包含在组织化学产品中常规的稀释剂或显色底物。本发明的试剂盒可包含 关于使用本发明的适体实践诊断测试的信息。
[0035] 现将参考W下的实验结果及附图进一步描述本发明，其中：
[0036] 图1展示了图示在一些细胞类型中用切3标记的适体和DAPI核复染剂的共聚焦成 像的结果的代表性显微照片。
[0037] 图2展示了用一些细胞类型在使用切3标记的适体的流式细胞研究中得到的代表 性图。
[0038] 图3图示了本发明的适体被神经胶质瘤细胞主动吸收。
[0039] 图4归纳了在图3中示出的数据。
[0040] 图5展示了示出在非癌性脑或来自I-IV级神经胶质瘤的样品中用本发明的适体或 阴性对照适体标记的结果的代表性显微照片。
[0041] 图6图示了SEQ ID N0:2(GL43)的适体的细胞结合是神经胶质细胞或神经元细胞 特异性的。
[0042] 图7示出了在其上来自U87细胞的蛋白已被分离的染色的SDS-PAGE凝胶的图像。标 记SA44IP和SA43IP的泳道包含使用本发明的适体通过免疫沉淀（IP-由于不使用抗体，更适 当地称为适体沉淀(aptame巧recipitation)，AP)分离的蛋白。
[0043] 图8示出了在其上来自1321N1细胞的蛋白已被分离的染色的SDS-PAGE凝胶的图 像。标记SA44IP和SA43IP的泳道包含使用本发明的适体通过免疫沉淀（IP-由于不使用抗 体，更适当地称为适体沉淀，AP)分离的蛋白。
[0044] 图9示出了在其上来自IV级多形性胶质母细胞瘤原代细胞系9114的细胞的蛋白已 被分离的染色的SDS-PAGE凝胶的图像。标记SA44AP和SA43AP的泳道包含使用本发明的适体 通过适体沉淀(AP)分离的蛋白。
[0045] 图10示出了在其上来自IV级多形性胶质母细胞瘤原代细胞系9111的细胞的蛋白 已被分离的染色的SDS-PAGE凝胶的图像。标记SA44AP和SA43AP的泳道包含使用本发明的适 体通过适体沉淀(AP)分离的蛋白。
[0046] 图11图示了来自已通过质谱分析的图7中示出的凝胶的区域的前5种显著的蛋白 命中化it)。
[0047] 图12图示了来自已通过质谱分析的图8中示出的凝胶的区域的前5种最显著的蛋 白命中。
[0048] 图13图示了对U87细胞的裂解物进行的蛋白免疫印迹的结果。该图示出了本发明 的适体SA43的适体沉淀并从而将Ku70从细胞裂解物"拉下"的能力，由此证明SA43对Ku复合 物的特异性。标记"输入物"的泳道是全细胞裂解物。标记"SA43"、"SA44"和"对照"的泳道分 另帽示了在U87细胞裂解物内被本发明的适体SA43、对照适体"SA44"结合的产物，及无适体 的全细胞裂解物。将来自凝胶的蛋白转移至硝酸纤维膜上，并将该膜用Ku70特异性的抗体 探测。如可W看出的，仅"输入物"和"SA43"泳道包含Ku蛋白，指示了 SA43的特异性。
[0049] 实验结果1
[0050] 在W下的研究中调查并证明了本发明的适体结合与癌细胞相关的配体，W及该结 合的特异性。
[0051] 将本发明的适体(如在W下列出的）用于标记所培养的癌细胞和非癌细胞，并对此 类细胞进行流式细胞术，并还用于标记非癌性脑组织的组织学切片W及从I至IV级神经胶 质瘤采集的组织的切片。
[0052] 使用的适体如下：
[0化3] 参沈Q ID N0:1(也被称为SA44或化44)
[0化4] 参沈Q ID N0:2(也被称为SA43或化43)
[0化5] 参沈Q ID N0:3(也被称为SA56或化56)
[0056] 作为对照，也遵循相同的标记方案，使用SEQ ID N0:4(也被称为化44)或随机产生 的如下序列(被称为"neg适体"）：
[0057] CCG UUA AUU AGG CCC UUA AAU GGC AUA AAA UUU GAA AGG GAA U
[0058] W下提供了所进行的研究的更多细节。
[0059] 材料和方法
[0060] 细胞系和细胞培养物：
[0061] 使用不同级别的人神经胶质瘤细胞系执行本实验，所述人神经胶质瘤细胞系包括 1321Ν1(Π 级星形细胞瘤）、U87MG(IV级胶质母细胞瘤）、T98G(IV级胶质母细胞瘤)和非癌性 胎儿星形胶质细胞SVGpl2(表2.1)。细胞系获取自European Collection of Cell Qiltures巧CACC)，UK和American Type