固定有引物层或引物、探针混合层的固相载具的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及PCR反应(Polymerase Chain React1n,聚合酶链式反应，一种用于体外扩增核酸片段的技术)实验用具技术领域，尤其是一种固定有引物层或引物、探针混合层的固相载具。
【背景技术】
[0002]PCR板是PCR试验或荧光定量PCR试验中常用的分子生物学耗材，分为48孔PCR板、96孔PCR板、384孔PCR板、8联管和单孔PCR反应管。PCR板的使用方法是通过加入PCR反应引物、探针、酶混液(DNA聚合酶与缓冲液的混合液或DNA聚合酶、逆转录酶与缓冲液的混合液)、水和模板核酸片段，混合后放入PCR仪或实时荧光定量PCR仪上进行PCR反应。这种方法的不足之处在于:1、检测或扩增同一个基因、进行多个PCR反应时，需要向多个PCR反应管/孔内重复加入相同的引物和探针；2、检测或扩增不同的基因、进行多个PCR反应时，需要向不同的PCR反应管/孔内加入不同的引物和探针。这样，既耗费实验人员时间，工作量大，工作效率低，又容易出错，引物或探针加错管(孔)位，从而直接影响实验结果的及时性、准确性和重复性。例如:1、检测60份标本中的乙肝病毒基因，就需要重复60次向60个PCR反应管/孔内加入乙肝病毒基因的引物和探针，工作量大，耗时长，工作效率低，实验人员也很辛苦；2、同时检测30份标本中的乙肝病毒基因和丙肝病毒基因，就需要重复30次向30个PCR反应管/孔内加入乙肝病毒基因的引物和探针，再重复30次向30个PCR反应管/孔内加入丙肝病毒基因的引物和探针，不仅工作量大，耗时长，还有可能加错管(孔)位，得出错误的结果。
【实用新型内容】
[0003]为了克服现有技术的不足，本实用新型提供了一种固定有引物层或引物、探针混合层的固相载具。
[0004]本实用新型解决现有PCR技术问题所采用的技术方案是:一种固定有引物层或引物、探针混合层的固相载具，包括固相载具，所述固相载具上设有至少一个PCR反应管/孔，该PCR反应管/孔内固定有一层反应层。
[0005]根据本实用新型的另一个实施例，进一步包括所述反应层为固化的引物层或固化的引物探针混合层。
[0006]根据本实用新型的另一个实施例，进一步包括所述固相载具为48孔PCR板、96孔PCR板、384孔PCR板、8联管或单个PCR反应管。
[0007]本实用新型的有益效果是:
[0008](I)本实用新型的固相载具带有引物层或引物、探针混合层，使用时只需加入酶混合液(DNA聚合酶与缓冲液的混合液或DNA聚合酶、逆转录酶与缓冲液的混合液)、灭菌水和模板，减轻劳动负荷，减少工作量，减少了加孔的出错率；
[0009](2)本实用新型的固相载具带有引物层或引物、探针混合层，能很快完成实验操作，缩短检测周期，大大提高了工作效率；
[0010](3)本实用新型的固相载具固定有引物层或引物、探针混合层，避免运输过程中因液体溢出导致污染，同时也因没有液体存在而更方便运输与储存。
【附图说明】
[0011]下面结合附图和实施例对本实用新型进一步说明。
[0012]图1是本实用新型固相载具装载多个PCR反应管/孔结构示意图。
[0013]图2是本实用新型多管固相载具上单个PCR反应管/孔的切面示意图。
[0014]图3是本实用新型固相载具装载单个PCR反应管结构示意图。
[0015]图4是本实用新型单管固相载具装载的单个PCR反应管切面示意图。
[0016]图5是使用本实用新型固相载具检测三种目标基因的荧光定量PCR扩增曲线示意图。
[0017]图中，1、固相载具，2、PCR反应管/孔，3、引物层或引物、探针反应层。
【具体实施方式】
[0018]一种固定有引物层或引物、探针混合层的固相载具，包括固相载具1，所述固相载具I上设有至少一个PCR反应管/孔2，该PCR反应管/孔2内固定有一层反应层3，其中反应层3为固化的引物层或固化的引物、探针混合层。固相载具I为48孔PCR板、96孔PCR板、384孔PCR板、8联管或单个PCR反应管等，只要能实现PCR反应的固相载具均可，此处不应当受到限制。
[0019]如图1、2所示，为本实用新型的一个优选实施例，固相载具I为96孔PCR反应板，其PCR反应孔2内固定有由引物、探针混合层组成的反应层3。图3、图4为本实用新型另一实施例，单个PCR反应管的结构示意图。
[0020]本实施例中，反应层3为引物、探针混合层，固定时，先将引物单溶、探针单溶，或引物、探针混合溶，溶解好后，分别加入到96孔PCR板的每一个孔中，短暂离心后将带有引物、探针混合层的96孔PCR固相载具放入烘箱中，35°C -95°C放置5分钟到3小时，将加入的液体水分蒸干，同时保留并固定引物、探针混合层。相同方法，固相载具内可单独固定有引物层。由于PCR反应所需的引物、探针已固定在PCR孔内，不再以液体形式存在，可以以任意形式很方便地放置于冰箱中，运输时只需打包即可，非常方便。而目前PCR反应的引物与探针一般配置成液体，分别存放于冰箱内，运输时要正置，小心存放，以防液体溢出，非常不便。
[0021]本实用新型固相载具使用时，只需将酶混合液(DNA聚合酶与缓冲液的混合液或DNA聚合酶、逆转录酶与缓冲液的混合液)、灭菌水和模板(病例样本、阴性对照、阳性对照)按比例混匀后，加入至每个PCR孔中即可进行PCR反应，使用方便，减少了实验人员的工作量。由于PCR反应所需的引物、探针已预先固定在PCR孔内，实验人员不需再向PCR反应孔内加入引物和探针，大大缩短了实验时间和检测周期，减轻了实验人员的工作负担，提高了工作效率。在本实施例中，如按一般的实验方法，用96孔PCR板单重反应检测32例样本，每例样本均检测3种目标基因，96个PCR反应管/孔刚好用完。在实验时，需先离心引物和探针，耗时2分钟；检测3种目标基因，需稀释3条探针与6条引物(上游引物、下游引物)，约需时间5分钟；取离心管做标记，需要2分钟；计算引物、探针用量，配制三种目标基因引物、探针混合液约需10分钟；将引物、探针混合液加入相应的孔位，每个孔位需8秒钟，加完96孔PCR板所需时间约13分钟。这样，完成一个96孔PCR板引物、探针的稀释、配制和加入约需30多分钟。而使用本实用新型固相载具，在实验时就可以节约这30多分钟。这对有时间要求或检测样本量较大的实验来说，非常重要。例如在三甲医院检验科，每天要检测上百例的样本，而且往往要求在半天内出结果。检验人员不仅工作量大，操作速度也要很快，工作压力可想而知。如果使用本实用新型固相载具，就可以节约一个多小时的检验时间，并且省去很多操作环节。特别地，由于省了很多工作，减少了检验时间，检验人员不用太过匆忙，实验操作会较为从容，这样，检验结果也会更为准确。由于检验所需的引物和探针已预先固定在固相载具内，不会发生检验人员因赶时间过于匆忙而将一种基因的引物和探针加错管位的问题，因而本发明还能有效避免因加错孔位而导致实验结果出错的检验事故。
[0022]综上所述本实用新型使用方便，能大大减少实验人员的工作量、缩短检测周期、提高工作效率、并且能有效降低实验的出错率。
【主权项】
1.一种固定有引物层或引物、探针混合层的固相载具，包括固相载具(1)，其特征是，所述固相载具(I)上装载至少一个PCR反应管/孔(2)，该PCR反应管/孔(2)内固定有一层反应层(3)。
2.根据权利要求1所述的固定有引物层或引物、探针混合层的固相载具，其特征是，所述反应层(3)为固化的引物层或固化的引物、探针混合层。
3.根据权利要求1所述的固定有引物层或引物、探针混合层的固相载具，其特征是，所述固相载具(I)为48孔PCR板、96孔PCR板、384孔PCR板、8联管或单个PCR反应管。
【专利摘要】本实用新型涉及PCR反应特指聚合酶链式反应的实验用具技术领域，尤其是一种固定有引物层或引物、探针混合层的固相载具，固相载具上至少有一个PCR反应管/孔，该PCR反应管/孔内固定有一层反应层。反应层为固化的引物层或固化的引物、探针混合层。固相载具是指装载有PCR反应管/孔的固相载体。本实用新型的固相载具带有引物层或引物、探针混合层，使用时只需加入酶混合液、灭菌水和模板，不需再加入PCR引物和探针，减轻劳动负荷，减少工作量，降低了加孔的出错率；能很快完成实验操作，缩短检测周期，提高了工作效率；由于PCR反应所需的引物、探针已固定在PCR管内，不再以液体形式存在，运输与储存非常方便。
【IPC分类】C12M1-00, C12M1-24
【公开号】CN204281754
【申请号】CN201420595112
【发明人】王蕾
【申请人】常州百代生物科技有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年10月15日