一种检测硫化氢的增强型荧光探针的制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种检测硫化氢的增强型荧光探针，所述荧光探针为NRS荧光探针，所述NRS荧光探针的结构通式如(I)所示，制备方法将尼罗红，2,4-二硝基氟苯和碳酸钾，加入到二甲基甲酰胺中，加热至70℃-80℃，回流反应3小时后，将反应液用二氯甲烷萃取收集有机相，将该有机相用无水硫酸镁干燥，经硅胶柱层析提纯得到目标产物。该探针具有线粒体定位功能，可以对线粒体进行实时、原位的在线检测，将有助于我们进一步了解硫化氢的生理功能，有助于增进对H2S生理作用的了解，为新型心血管药物的研发提供可视化的检测工具。
【专利说明】一种检测硫化氢的増强型荧光探针的制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及对硫化氢进行检测的荧光探针，具体涉及一种检测硫化氢的增强型荧 光探针及制备方法及在线粒体中应用。
【背景技术】
[0002] 硫化氢（H2S)是一种有刺激性气味的气体，是继一氧化氮（NO)和一氧化碳（CO)之 后的第3种具有信息传递功能的气体小分子。环境中的硫化氢主要来自于工业生产、水处 理、牲畜饲养过程中硫化氢的释放。硫化氢在很多生物的生理过程中都有重要作用，例如神 经传递的调节、胰岛素信号的抑制作用等。硫化氢水平异常可还可能与阿尔兹海默氏症、唐 氏综合症、糖尿病和肝硬化等疾病密切相关。硫化氢的生理学和病理学功能研宄已经成为 目前化学与生物学研宄的热点，而能在活体生物系统中准确快捷的检测硫化氢的方法成为 该领域的关键课题之一。
[0003] 上世纪90年代发现内源性硫化氢（hydrogen sulfide，H2S)在体内发挥着重 要生理作用，比如胱硫醚-B-合成酶（cystathionine-B_synthase，CBS)、胱硫醚裂解酶 (cystathionine-lyase, CSE)和半胱氨酸转移酶的生理代谢过程中均会产生硫化氢，其产 生的场所是在线粒体中。来源于线粒体中的硫化氢对于心脑血管系统、免疫系统以及神经 系统具有非常重要的调节作用。目前对硫化氢进行检测的荧光探针种类很多，但是绝大多 数都不具有线粒体定位功能，更无法实现对线粒体中所产生的硫化氢进行检测。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术的不足，本发明提供一种检测硫化氢的增强型荧光探针，该探针具 有线粒体定位功能，可以对线粒体进行实时、原位的在线检测，将有助于我们进一步了解硫 化氢的生理功能，有助于增进对H 2S生理作用的了解，为新型心血管药物的研发提供可视化 的检测工具。
[0005] 本发明采用的技术方案为：
[0006] 一种检测硫化氢的增强型荧光探针，所述荧光探针为NRS荧光探针，所述NRS荧光 探针的结构通式如（I)所示：
[0007]
【权利要求】
1. 一种检测硫化氢的增强型荧光探针，其特征在于，所述荧光探针为NRS荧光探针，所 述NRS荧光探针的结构通式如（I)所示：
2. -种如权利要求1所述的检测硫化氢的增强型荧光探针的制备方法，其特征在 于包括如下步骤：将尼罗红，2, 4-二硝基氟苯和碳酸钾，加入到二甲基甲酰胺中，加热至 70°C-80°C，回流反应3小时后，将反应液用二氯甲烷萃取收集有机相，将该有机相用无水 硫酸镁干燥，经硅胶柱层析提纯得到目标产物。
3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述尼罗红，2, 4-二硝基氟苯和碳酸 钾的摩尔比为1:1. 2:1. 2。
4. 根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述硅胶柱层析中的洗脱剂为 CH2C12:CH30H= 40:1 ;Si02300-400 目。
5. 如权利要求1所述的检测硫化氢的增强型荧光探针在检测水体中硫离子或硫化氢 的应用。
6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述荧光探针在检测活细胞线粒体中硫 化氢的应用。
7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述活细胞为Hela细胞株、MCF-7细胞株 或RAW264. 7细胞株。
【文档编号】C09K11/06GK104479669SQ201410657865
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年11月18日 优先权日:2014年11月18日
【发明者】于海波, 李红玲, 方沛菊, 吕春娇, 宋有涛 申请人:辽宁大学