专利名称：一种尔他培南的分离纯化方法
技术领域：
本发明涉及一种尔他培南的纯化方法，具体说是一种使用多孔型聚苯乙烯共聚型 树脂纯化尔他培南的技术。
背景技术：
尔他培南(ertapenem，MK-0826，L-749, 345，商品名INVANZTM)为美国默克公司新 近开发的新型广谱碳青霉烯类抗生素。本品分别于2001年11月和2002年4月在美国和 欧洲上市，是唯一非肠道给药的ι-β甲基碳青霉烯类抗生素，具有广泛的抗菌活性，包括 革兰阳性与阴性需氧菌和厌氧菌。尔他培南在其生产过程中常会混入各种杂质，因此尔他培南的纯化在其生产过程 中十分重要。目前对于尔他培南的纯化文献报道较少，主要以柱层析的方法为主，即以硅胶 键合C8为分离载体，以缓冲盐和乙腈的体系为洗脱液进行分离纯化，但该种方法所用硅胶 C8分离载体的粒径较小，成本高，不耐酸碱，不利于生产放大。为此寻找一种粒径大、价格 低、化学性质稳定的物质作为分离载体来开发尔他培南的纯化方法，对于工业化生产具有 及其重要的意义。
发明内容
本发明的目的是开发研究一种能对尔他培南及其相关杂质进行纯化的方法，该方 法操作简单、产品纯度、得率均高，适合于工业化生产。本发明的方法是一种尔他培南及其相关杂质的快速分离纯化方法，其特征在于该 方法包括以下操作步骤称取一定量的尔他培南粗品用水溶解，以多孔型聚苯乙烯共聚型 树脂为分离填料的层析柱进行吸附，并用不同有机相比例的磷酸盐缓冲液进行洗脱，所得 洗脱液经后处理得到尔他培南纯化产品，并以高效液相色谱法(HPLC)检测其纯度。具体的分离纯化操作条件为a.分离载体多孔型聚苯乙烯共聚型树脂为苯乙烯或丙烯酸酯或两者与交联剂的 高聚物，粒径为60 120目；b.层析柱规格(100 1000) X (26 10) mm (I. D.)；c.流动相①0 0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液(pH = 6 8)和乙腈的体积比为 90 99 10 1 ；②0 0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液(pH = 6 8)和甲醇的体积比为60 95 40 5 ；③0 0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液(pH = 6 8)和乙醇的体积比为30 90 70 10 ；d.流速0· 5 5. OmL/min。本发明具有如下优点(1)所得的药物纯度高达90%以上，得率在70%以上。
(2)工艺操作简单，整个流程耗时少。(3)所使用分离载体的粒径适用范围较广，有利于工业化生产。(4)所使用分离载体的化学性质稳定，重复性好，使用寿命长，易于再生。
具体实施方案实验器材及试剂(1)实验仪器 BT-100恒流泵(上海沪西分析仪器公司)，戴安Summit型高效液相色谱系统(美 国戴安公司)，层析柱(上海锦华)。(2)实验材料聚苯乙烯型多孔树脂(MKF-GCM-T，南京麦科菲高效分离载体有限公司)，聚苯乙 烯型MKF-TPN型色谱柱(5 μ m, 150X4. 6mm (I. D.)，南京麦科菲高效分离载体有限公司)。(3)实验试剂尔他培南标品；尔他培南粗品(含量约为20 % 40 %，重量百分比)；磷酸二氢钠 和磷酸氢二钠；磷酸；高效液相去离子超纯水。实验预处理(1)树脂的预处理称量MKF-GCM-T树脂(60-120目)于砂芯漏斗中，按下列过程清洗树脂热水洗10 次一蒸馏水洗10次一乙醇洗3次一四氢呋喃或丙酮洗3次一乙醇洗5次一待用(2)尔他培南粗品溶液的配制称取一定量的尔他培南粗品样品以适量的超纯水溶解，临时现配。液相检测条件检测仪器戴安Summit型高效液相色谱系统，色谱柱:MKF_TPN型色谱柱(5 μ m, 150X4. 6mm)，流动相0. 02mol/L的磷酸盐缓冲液(pH7. 0)-乙腈(88 12)，流速1ml/ min,检测波长225nm，进样量20 μ L，柱温室温。实施例1分离纯化条件泵ΒΤ-100恒流泵，层析柱200mmX10mm(I.D.)，上样量0. lg，洗 脱液0. 02mol/L的磷酸盐缓冲液(ρΗ7· 0)-乙腈(95 5)，流速0. 5ml/min。按柱体积计， 收集上样后第4 6这3个柱体积的流出液，流出液经后处理得尔他培南纯化产品，得率为 62.9%,经HPLC检测其纯度约为98. 7%。实施例2分离纯化条件泵、层析柱和上样量同实施例1，洗脱液:A为0. 2mol/L的磷酸盐 缓冲液(ρΗ7· 0)-甲醇(95 5)，Β为0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液(ρΗ7· 0)-甲醇(60 40)， 其中A洗脱3个柱体积后换用B洗脱4个柱体积，流速1. Oml/min。按柱体积计，收集洗脱 液B第2到4这3个柱体积的流出液，流出液经后处理得尔他培南纯化产品，得率为61.0%， 经HPLC检测其纯度约为99. 1 %。实施例3分离纯化条件泵BT-100恒流泵，层析柱300mmX16mm(I.D.)，上样量lg，洗脱 液0. lmol/L的磷酸盐缓冲液(ρΗ7· 0)-乙腈(95 5)，流速2. Oml/min。按柱体积计，收集上样后第4 6这3个柱体积的流出液，流出液经后处理得尔他培南纯化产品，得率为 76. 1%,经HPLC检测其纯度约为98. 1 %。实施例4分离纯化条件泵、层析柱和上样量同实施例3，洗脱液A为0. 02mol/L的磷酸盐 缓冲液(ρΗ7· 0)-乙醇(90 10)，B为0. 02mol/L的磷酸盐缓冲液(ρΗ7· 0)-乙醇(30 70)， 其中A洗脱3个柱体积后换用B洗脱4个柱体积，流速3.0ml/min。按柱体积计，收集洗脱 液B第2到4这3个柱体积的流出液，流出液经后处理得尔他培南纯化产品，得率为82.1%， 经HPLC检测其纯度约为98. 3%。实施例5分离纯化条件泵、层析柱和上样量同实施例3，洗脱液A为0. 02mol/L的磷酸盐 缓冲液(PH7.0)-乙腈(99 1)，B为0.02mol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.0)_乙腈(90 10)， 其中A洗脱4个柱体积后换用B洗脱4个柱体积，流速1.0ml/min。按柱体积计，收集洗脱 液B第2到3这2个柱体积的流出液，流出液经后处理得尔他培南纯化产品，得率为79. 9 %， 经HPLC检测其纯度约为98. 5%。实施例6分离纯化条件泵BT-100恒流泵，层析柱500mmX26mm(I. D.)，上样量3g，洗脱 液0. 01mol/L的磷酸盐缓冲液(ρΗ7· 0)-乙腈(95 5)，流速5. Oml/min。按柱体积计， 收集上样后第4 6这3个柱体积的流出液，流出液经后处理得尔他培南纯化产品，得率为 88. 2%，经HPLC检测其纯度约为98. 3%0实施例7分离纯化条件泵、层析柱和上样量同实施例6，洗脱液:A为水-甲醇(90 10)， B为水-甲醇(70 30)，其中A洗脱3个柱体积后换用B洗脱4个柱体积，流速4.0ml/ min0按柱体积计，收集洗脱液B第2到4这3个柱体积的流出液，流出液经后处理得尔他 培南纯化产品，得率为85. 9%，经HPLC检测其纯度约为99. 2%。实施例8分离纯化条件泵BT-100恒流泵，层析柱1000 X 26mm(I. D.)，上样量10g，洗脱 液0. lmol/L的磷酸盐缓冲液(ρΗ7· 0)-乙腈(95 5)，流速5. Oml/min。按柱体积计，收 集上样后第4 6这3个柱体积的流出液，流出液经后处理得尔他培南纯化产品，得率为 92. 9%，经HPLC检测其纯度约为98.0%。实施例9分离纯化条件泵、层析柱和上样量同实施例8，洗脱液A为水-乙醇(80 20)， B为水-乙醇(50 50)，其中A洗脱3个柱体积后换用B洗脱4个柱体积，流速4.0ml/ min0按柱体积计，收集洗脱液B第2到3这2个柱体积的流出液，流出液经后处理得尔他 培南纯化产品，得率为89. 6%，经HPLC检测其纯度约为98. 5%。
权利要求
一种尔他培南的纯化方法，其特征在于该方法包括以下步骤称取一定量的尔他培南粗品用水溶解，以多孔型聚苯乙烯共聚型树脂为分离填料的层析柱进行吸附，并用不同有机相比例的磷酸盐缓冲液进行洗脱，所得洗脱液经后处理得到尔他培南纯化产品。
2.根据权利要求1所述的尔他培南的纯化方法，其特征在于所述多孔型聚苯乙烯共聚 型树脂为苯乙烯，或甲基丙烯酸酯，或两者与交联剂的高聚物，粒径在60-120目。
3.根据权利要求1所述的尔他培南的纯化方法，其特征在于所述尔他培南粗品的纯度 为重量百分比20% 40%。
4.根据权利要求1所述的尔他培南的纯化方法，其特征在于所述纯化产物的纯度在 90%以上，得率在70%以上。
5.根据权利要求1所述的尔他培南的纯化方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲液的离子 浓度在0 0. 2mol/L, pH值范围在6 8。
6.根据权利要求1所述的尔他培南的纯化方法，其特征在于所述洗脱液中有机相为甲 醇、或乙醇或乙腈。
7.根据权利要求1所述的尔他培南的纯化方法，其特征在于所述层析柱规格为 (100 1000) X (26 10)mm(I. D.)。
8.根据权利要求2所述的尔他培南的纯化方法，其特征在于所述多孔型聚苯乙烯共聚型树脂的交联剂为二乙烯基苯或二丙烯酸乙二醇酯或二甲基丙烯酸乙二醇酯。
全文摘要
一种尔他培南的纯化方法，是将尔他培南粗品用水溶解，以多孔型聚苯乙烯共聚型树脂为分离填料的层析柱进行吸附，并用不同有机相比例的磷酸盐缓冲液进行洗脱，所得洗脱液经后处理得到尔他培南纯化产品。本发明操作简单、产品纯度、得率均高，适合于工业化生产。
文档编号B01D15/08GK101838230SQ200910026018
公开日2010年9月22日 申请日期2009年3月17日 优先权日2009年3月17日
发明者刘晓宁, 方硕, 魏荣卿 申请人:南京工业大学