专利名称：分子筛分离式单克隆抗体血型鉴定方法及试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种血型鉴定方法，具体地讲是公开了一种分子筛分离单克隆抗体血型鉴定方法及试剂盒，属于临床医学检测试剂盒技术领域。
背景技术：
目前，医学临床使用的血型鉴定产品主要为以下种类1、单克隆抗体试剂液体针剂。
2、单克隆抗体血型鉴定卡。
3、多克隆抗体试剂液体针剂。
单克隆抗体液体针剂是利用高滴度的单克隆抗体，于一定体积的人体血液或血清混合，是指在玻璃片上发生凝聚反应，根据凝聚结果，认为判定血液类型。其缺点在于操作时间长，操作手续繁杂，采集血样量较多，人为误判率高等缺点。
对于多克隆抗体液体针剂由于其抗体反应特异性差，所以不仅存在着单克隆抗体试剂的使用缺点，同时误判率更高，现也成为临床淘汰的血型鉴定产品。
而分离式抗体血型鉴定试剂卡或试剂盒制作工艺复杂，成本较高，并且在全血凝聚反应过程中，存在着凝血呈像弥散，界限模糊，不易判断等不足。
发明内容
本发明公开一种分子筛分离式单克隆抗体血型鉴定方法，解决了常规的血型鉴定产品误判率高，操作繁杂等缺点。
本发明还公开了利用该方法制作的试剂盒，适用于工业化生产和医用临床。
本发明的技术解决方案如下1)单克隆抗体的制备稳定培养的杂交细胞系的建立采用标准的抗体制备方法将已建立的稳定培养系的小鼠形质肿瘤细胞与从人体中取出的具有表面抗原的血细胞融合，制成杂交瘤细胞系；抗体上清大量制备杂交瘤细胞按1∶8～15的体积比在DMEM或MEM，alpha-MEM，RPMI-1640等完全培养液中，加湿培养箱37℃，5％CO2的条件下传代培养，使细胞过度生长至死亡，溶液至108-10/ml，收获单克隆抗体上清液，检验抗体滴度；抗滴度的测定采用标准的间接酶联免疫吸收测定法，终结果为1～10mg/l，用生理盐水稀释，其滴度为1∶500～1000；2)分离物的制备将生物活性珠与葡聚糖凝胶及琼脂糖凝胶中的一种或两种，按5～10与1～2、2～5的比例混合，加水膨润后用酸碱平衡及平衡缓冲液平衡，PH7.4～6.4，加压脱气灭菌，放置稳定，制成分离物；3)将步骤2制得分离物装入柱子模型制成分离柱，分离柱中在加入步骤1制成的单克隆抗体上清液，制成试剂盒。
本发明的试剂盒包括由生物活性珠与葡聚糖凝胶及琼脂糖凝胶中的一种或两种制成的分离物装填在柱子模型的铸型中制成分离柱，分离柱中含有滴度为1∶500～1000的单克隆抗体。
分离柱为多聚丙烯塑料铸型，内壁厚为2±0.5mm，分离柱直径为13±0.5mm，柱高5±0.5mm，可承受12000×g的离心压力。
该试剂盒为ABO式血型判定试剂盒，其产品为A、B式两种，从凝聚与非凝聚反应上可判断定为A、B、O或AB，本发明不仅在即A(A型)即B(B型)或即A，又B的AB型，和非A非B的O型等类型上分离清晰，同时每一呈像组中又详细分为五个亚类，即阳性++++，阳性+++，阳性++，阳性+，阴性。因而提高了判断的有效性和显著性。每一血样的凝聚反应必须属于其中某一亚型。通过A、B分别操作，不存在任何机会的误判。
本发明与同类产品的操作比较试验，见下表1表1
本发明与同类产品的检定结果比较，将被测试人血样品12个，分别用上述同类产品进行检测，结果见下表2表2
本发明的积极效果在于采用分子筛作为分离技术，克服了单克隆抗体和多克隆抗体试剂操作繁杂，误判率高等缺点，具有操作简单，抗体纯度高，滴度好，易于分离，操作省时省力，成像清晰，易于判断，误判率低等优点，适用于工业化生产，作为医学临床检验具有极其广泛的前景。
具体实施例方式通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
实施例11)单克隆抗体的制备稳定培养的杂交细胞系的建立采用标准的抗体制备方法将已建立的稳定培养系的小鼠形质肿瘤细胞与从人体中取出的具有表面抗原的血细胞融合，制成杂交瘤细胞系；抗体上清大量制备杂交瘤细胞按1∶10在DMEM完全培养液中，加湿培养箱37℃，5％CO2的条件下传代培养，使细胞过度生长至死亡，溶液至110/ml，收获单克隆抗体上清液，检验抗体滴度；抗滴度的测定采用标准的间接酶联免疫吸收测定法，终结果为1～10mg/l，用生理盐水稀释，其滴度为1∶500～1000；2)分离物的制备将生物活性珠S-X4 5份，葡聚糖凝胶S-200HR 2份，琼脂糖凝胶CL-4B 3份混合，加水膨润后，用0.2mol/L盐酸或0.5mol/L氢氧化钠酸碱平衡及平衡缓冲液平衡，PH7.4～6.4，加压脱气灭菌，放置稳定，制成分离物；3)将步骤2制得分离物装入柱子模型制成分离柱，分离柱中在加入步骤1制成的单克隆抗体上清液，制成试剂盒。
实施例2抗体上清大量制备将实施例1制备的杂交瘤细胞按1∶8体积比在MEM完全培养液中，加湿培养箱37℃，5％CO2的条件下传代培养，使细胞过度生长至死亡，溶液达90/ml，收获上清并检验抗体滴度。
抗滴度的测定采用标准的间接酶联免疫吸收测定法，终结果为1～10mg/l，用生理盐水稀释，其滴度为1∶500～1000。
分离物的制备将生物活性珠S-X8 8份，葡聚糖凝胶S-300HR 5份混合，加水膨润后用0.5mol/L氢氧化钠酸碱平衡及平衡缓冲液平衡，PH7.4～6.4，加压脱气灭菌，放置稳定，装入柱子模型制成分离柱，分离柱中在加入上述的单克隆抗体上清液，制成试剂盒。
实施例3抗体上清大量制备将实施例1制备的杂交瘤细胞按1∶12体积比在alpha-MEM完全培养液中，加湿培养箱37℃，5％CO2的条件下传代培养，使细胞过度生长至死亡，溶液达100/ml，收获上清并检验抗体滴度。
抗滴度的测定采用标准的间接酶联免疫吸收测定法，终结果为1～10mg/l，用生理盐水稀释，其滴度为1∶500～1000。
分离物的制备将生物活性珠S-X12 8份，葡聚糖凝胶S-400HR 5份混合，加水膨润后用0.5mol/L氢氧化钠酸碱平衡及平衡缓冲液平衡，PH7.4～6.4，加压脱气灭菌，放置稳定，装入柱子模型制成分离柱，分离柱中在加入上述的单克隆抗体上清液，制成试剂盒。
实施例4抗体上清大量制备将实施例1制备的杂交瘤细胞按1∶15体积比在RPMI-1640完全培养液中，加湿培养箱37℃，5％CO2的条件下传代培养，使细胞过度生长至死亡，溶液达90/ml，收获上清并检验抗体滴度。
抗滴度的测定采用标准的间接酶联免疫吸收测定法，终结果为1～10mg/l，用生理盐水稀释，其滴度为1∶500～1000。
分离物的制备将生物活性珠S-X8 8份，葡聚糖凝胶S-300HR 5份混合，加水膨润后用0.2mol/L盐酸酸碱平衡及平衡缓冲液平衡，PH7.4～6.4，加压脱气灭菌，放置稳定，装入柱子模型制成分离柱，分离柱中在加入上述的单克隆抗体上清液，制成试剂盒。
权利要求
1.一种分子筛分离式单克隆抗体血型鉴定试剂盒，其特征在于由生物活性珠与葡聚糖凝胶及琼脂糖凝胶中的一种或两种制成的分离物装填在柱子模型的铸型中制成分离柱，分离柱中含有滴度为1∶500～1000的单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于分离柱为多聚丙烯塑料铸型，内壁厚为2±0.5mm，分离柱直径为13±0.5mm，柱高5±0.5mm，具有可耐受高强度及部分有机溶剂及承受12000×g的离心压力。
3.根据权利要求1所述的试剂盒的制备方法，包括以下步骤制成1)单克隆抗体的制备稳定培养的杂交细胞系的建立采用标准的抗体制备方法将已建立的稳定培养系的小鼠形质肿瘤细胞与从人体中取出的具有表面抗原的血细胞融合，制成杂交瘤细胞系；抗体上清大量制备杂交瘤细胞按1∶5-15体积比在完全培养液中，加湿培养箱37℃，5％CO2的条件下传代培养，使细胞过度生长至死亡，溶液至108～1010/ml，收获单克隆抗体上清液，检验抗体滴度；抗滴度的测定采用标准的间接酶联免疫吸收测定法，终结果为1～10mg/l，用生理盐水稀释，其滴度为1∶500～1000；2)分离物的制备将生物活性珠与葡聚糖凝胶及琼脂糖凝胶中的一种或两种，按5～10与1～2、2～5的比例混合，加水膨润后用酸碱平衡及平衡缓冲液平衡，PH7.4～6.4，加压脱气灭菌，放置稳定，制成分离物；3)将步骤2制得分离物装入柱子模型制成分离柱，分离柱中在加入步骤1制成的单克隆抗体上清液，制成试剂盒。
全文摘要
本发明公开一种分子筛分离式单克隆抗体血型鉴定试剂盒，由生物活性珠与葡聚糖凝胶及琼脂糖凝胶中的一种或两种制成的分离物装填在柱子模型的铸型中制成分离柱，分离柱中含有滴度为1∶500～1000的单克隆抗体，构成层状结构。采用分子筛作为分离技术，克服了单克隆抗体和多克隆抗体试剂操作繁杂，误判率高等缺点，具有操作简单，抗体纯度高，滴度好，易于分离，操作省时省力，成像清晰，易于判断，误判率低等优点，适用于工业化生产，作为医学临床检验具有极其广泛的前景。
文档编号G01N33/531GK1598585SQ20041001104
公开日2005年3月23日 申请日期2004年8月18日 优先权日2004年8月18日
发明者乔娜 申请人:乔娜