专利名称：一种新城疫病毒免疫胶体金测试卡的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及养殖场、防疫检疫部门以及医疗机构等单位诊断或检测新城疫病毒的 技术，具体涉及快速检测新城疫病毒的测试卡。
背景技术：
新城疫病毒(Newcastle disease, ND)是一种急性、败血性、高度接触性传染病， 其传播迅速，发病率和死亡率高。 一旦爆发，会给养鸡业造成不可估量的经济损失。因此 养殖场、防疫检疫部门以及医疗机构等单位经常需要诊断或检测结果。国家质检总局在
2001年下发文件，要求对食肉出n企业进行每两个月一次的定期监测，该规定要求用鸡胚
病毒分离方法。鸡胚病毒分离方汰是-种敏感特异方法，但是耗时较长，约需3周左右， 且操作烦琐，只能起监测作用，不能作快速检测用，不利于快速通关和控制禽肉携带病毒。 C隨7775A (专利屮请号为200510008997.6)"检测新城病毒的核苷序列、试剂盒及检验 方法"，该发明选择新城疫病毒F基冈(合成F蛋白)作为靶区域，选择能够反映裂解位 点特性且缺乏二级结构的保守区设计多对引物和探针，建立荧光PCR检测新城疫病毒，该 方法比传统的P(:R方法灵敏度高100 1000倍，但从样品处理到出结果需要4小时左右， 该方法的实施还需荧光定量PCR仪等昂贵仪器，不宜在基层推广。
目前，现有技术对新城疫病毒的诊断或检测主要包括血凝抑制(HI)试验检测抗血凝 素(HA)抗体；酶联免疫吸附测定(KL:[SA)方法检测新城疫病毒共有的特异性抗体或抗原。 其中HI试验虽然比较敏感，但受外界因素影响较大而削弱了其实用价值；ELISA检出阳性 血清时间曱，敏感度高，与H1试验相比更适合于大批量血清学调查，但因其条件要求高， 操作不便，在实际应用中未能发挥其应有作用。而免疫荧光技术(IFT)存在假阳性(非特异 性荧光)问题。禾拥基因扩增(PCR)方法可直接检出病毒的基因，农业部动物检验所新城 疫检测实验室在国内旨先建立-歩法PT PCR快速检测强毒新城疫，将新城疫的检测时间 缩短到12小时之内。但所需的设备昂贵，在临床检测方面受到了很大的限制。可见研究 一种快速检测新城疫病毒的诊断试剂以便对疫情进行现场及时监控，已经是目前畜牧生产 中急需解决的问题。
实用新型内容
针对现有技术存在的上述不足，本实用新型的目的是提供一种结构简单、操作方便、 快速，而且敏感和特异性好的新城疫病毒免疫胶体金测试卡。
本实用新型的目的是这样实现的 一种新城疫免疫胶体金测试卡，由试剂条和测试卡 盒构成；其中，试剂条由背衬、样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫组成，背衬上平面中部设 有NC膜，NC膜的两端分别相邻连接结合垫和吸水垫；样品垫设于结合垫的上方；结合垫 上喷有金标抗体Abl; NC膜上喷有线宽为lmm的捕获抗体Ab2和质控抗体Ab3;结合垫放 在金标抗体与样品中NDV结合的位置；
测试卡盒由盒体和盒盖组成，盒盖上设有一个加样孔和一个阅读窗口，加样孔正对样 品垫；阅读窗口正对NC膜；盒体的中部设有用于固定所述试剂条的凹槽，凹槽的两侧均 匀设有用于与盒盖连接的凸柱。
相比现有技术，本实用新型具有如下优点
本实用新型采用胶体金标记技术原理，即用胶体金作为示踪标记物，依据新城疫抗原
抗体反应的特异性；根据胶体金的高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应等物理特性， 加上结合物所具有的免疫牛物学特性，对新城疫病毒血凝素蛋白单克隆抗体进行标记。 再利用免疫胶体金层析技术制成胶体金试剂条，该试纸条可以检测患病动物血液、粪便中 的新城疫病毒。这种技术具有操作方便、快速的特点，而且敏感和特异性好。
新城疫免疫胶体金测试卡结构简单，易于掌握使用；并且成本低廉，适用于基层或临 床检测新城疫病毒；可以检测禽类血液、粪便的新城疫病毒，10rain左右出结果，敏感性 达10ng/ml，可用干新城疫的快速诊断，适用于涉及需要新城疫快速诊断或检测的养殖场、 防疫检疫部门以及医疗机构等。
图1是本实用新型试剂条的结构示意图； 图2是本实用新型测试卡盒的结构示意图； 图3是本实用新型测试卡盒体的结构示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对木实用新型作进一步说明。
如图1所示， 一种新城疫免疫胶体金测试卡，由试剂条和测试卡盒构成；其中，试剂 条由背衬:l、样品垫2、结合垫3、硝酸纤维NC膜4和吸水垫5组成；背衬l、样品垫2、
结合垫3、硝酸纤维NC膜4和吸水垫5均为宽度相当的薄片条形结构，背衬1上平面的中 部设有NC膜4 (即硝酸纤维NC膜)，硝酸纤维NC膜4的两端分别相邻连接结合垫3和吸 水垫5;样品垫2设于结合垫3的上方；结合垫3上喷有金标抗体Abl (新城疫病毒单克 隆抗体)；硝酸纤维NC膜4上喷有线宽为1 mm的捕获抗体Ab2 (羊抗NDV抗体)和质控抗 体Ab3 (兔抗Balb/C球蛋白抗体)；结合垫3放在金标抗体与样品中NDV结合的位置。
如图2和图3所示，测试卡盒由盒体11和盒盖8扣合(卡接)而成，盒盖8上设有 一个加样孔9和一个阅读窗口 10，加样孔9正对样品垫2，是加样品的位置；阅读窗口 10 正对硝酸纤维NC膜4，阅读窗口 10旁印有T和C字母，分别代表NC膜检测线的位置和质 控线的位置。盒体U的中部设有用于固定所述试剂条的凹槽12，凹槽12的两外侧均匀设 有用于与盒盖8连接的凸柱13;图中，14是起支撑作用的凸块。
使用本实用新型快速检测新城疫病毒的方法，步骤如下
1、 本实用新型利用抗原抗体反应的特异性和胶体金免疫层析简单快速原理，建立了 新城疫病毒单克降抗体(Abl.， Antibody 1)和羊抗新城疫病毒多克隆抗体(Ab2， Antibody 2) 以及羊抗Balb/C小鼠免疫球蛋白抗体(Ab3， Antibody 3);
2、 确定结合华设《i::处卵.液(80mM Na2B4O710H2O， 0.1% PVA, 0.1% Tween-20， 0.3%BSA，所述百分比均为重量百分比浓度)，将结合垫(玻璃纤维膜)浸泡于处理液中， 在4。C条件下过夜(约12小时)；然后干37'C条件下烘千(4一5h);再将Abl标记胶体金 并喷在结合垫上；然后在硝酸纤维NC膜上喷有线宽为1咖的捕获抗体Ab2 (羊抗NDV抗 体)和质控抗体Ab3 (兔抗Ba]b/C球蛋白抗体)；最后通过结合垫、样品垫、背衬、塑料 卡等分别组装成试剂条和测试卡。
3、 将待检测的杼品加在样品垫上过滤后，样品中的NDV与结合垫中的金标抗体Abl 结合，通过层析作用先与NC膜上的Ab2结合形成可见的结合线(检测线，简称T线)，未 结合完的金标抗休继续层析与Ab3结合，形成第二条结合线(质控线，简称C线)；
4、 观察结果阳性则出现两条结合线；阴性则仅出现一条.C线；试剂条无效则不出
现线条。
以上实施方式仅用f-帮助木领域技术人员更加全面的理解本实用新型，但并不对本实用
新型作任何PL:制。凡依照本实用新型的内容所做出的任何本领域等同的替换均属于本实用新
型保护的范围之内。
权利要求1、一种新城疫免疫胶体金测试卡，由试剂条和测试卡盒构成；其中，试剂条由背衬(1)、样品垫(2)、结合垫(3)、NC膜(4)和吸水垫(5)组成，背衬(1)上中部设有NC膜(4)，NC膜(4)的两端分别相邻连接结合垫(3)和吸水垫(5)；样品垫(2)设于结合垫(3)的上方；结合垫(3)上喷有金标抗体Ab1；NC膜(4)上喷有线宽为1mm的捕获抗体Ab2(6)和质控抗体Ab3(7)；结合垫(3)放在金标抗体与样品中NDV结合的位置；测试卡盒由盒体(11)和盒盖(8)组成，盒盖(8)上设有一个加样孔(9)和一个阅读窗口(10)，加样孔(9)正对样品垫(2)；阅读窗口(10)正对NC膜(4)；盒体(11)的中部设有用于固定所述试剂条的凹槽(12)，凹槽(12)的两侧均匀设有用于与盒盖(8)连接的凸柱(13)。
专利摘要本实用新型提供一种新城疫免疫胶体金测试卡，由试剂条和测试卡盒构成；其中，试剂条由背衬、样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫组成，背衬上中部设有NC膜，NC膜的两端分别相邻连接结合垫和吸水垫；样品垫设于结合垫的上方；结合垫上喷有金标抗体Ab1；NC膜上喷有线宽为1mm的捕获抗体Ab2和质控抗体Ab3。测试卡盒由盒体和盒盖组成，盒盖上设有一个加样孔和一个阅读窗口，盒体的中部设有用于固定所述试剂条的凹槽，凹槽的两侧均匀设有用于与盒盖连接的凸柱。它具有结构简单，测试操作方便、快速等特点，而且成本较低；适用于基层或临床检测新城疫病毒；10min左右出结果，敏感性达10ng/ml。
文档编号G01N33/558GK201203618SQ20082009843
公开日2009年3月4日 申请日期2008年5月29日 优先权日2008年5月29日
发明者吴胜昔, 胡仁建, 蔡家利 申请人:重庆工学院