专利名称：一种花椒油hplc-dad指纹图谱的构建方法
技术领域：
本发明涉及一种调味品指纹图谱的构建方法，特别涉及一种花椒油HPLC-DAD指纹图谱的构建方法。
背景技术：
花椒油是指应用超临界CO2萃取、有机溶剂萃取等方法从花椒中提取的花椒油树 脂与食用油适量混合制成的具有麻香味的调味油，或着是直接用食用油浸泡花椒所制成的具有麻香味的调味油。花椒油中麻味的强弱直接影响其质量，根据国内外大量研究结果表明，花椒麻味强弱是由花椒酰胺类物质含量所决定的。花椒油是香精生产中的常用原料之一，其质量控制是香精产品稳定性的指标之一。指纹图谱能够比较全面地反映花椒油麻味成分提取物所含化学成分的种类、数量及相互之间的比例等信息，进而有效地表征其内在质量。本专利申请旨在建立一套基于HPLC-DAD数据的花椒油麻味成分指纹图谱分析检测方法，为花椒油的质量控制提供科学的依据和指导。
发明内容
本发明的目的是提供一种花椒油麻味成分HPLC-DAD指纹图谱的构建方法以及由此方法所得到的花椒油标准指纹图谱，通过该标准指纹图谱为花椒油的质量控制提供科学的依据和指导。为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种花椒油HPLC-DAD指纹图谱的构建方法，包括如下步骤I)、供试品溶液的制备准确称取0. Ig花椒油于IOmL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇匀，30°C下浸提4h，冷却后，转入IOmL刻度离心试管中，离心，取上清液0. ImL于IOmL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇匀，经0. 2 y m滤膜过滤后即为供试品溶液。2)、HPLC-DAD分析色谱条件安捷伦1200型高效液相色谱仪(四元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，DAD检测器及ChemStation色谱工作站)色谱柱ZORBAXEclipse XDB-C18 (4. 6 X 150mm，5 y m)流动相组成为甲醇冰=60 40 (体积比)，流速I. OmL/min,柱温30°C，DAD扫描波长254nm，参比波长360nm，进样量I y L。在此条件下分析供试品溶液，得到花椒油的指纹图谱。一种由上述所述构建方法得到的花椒油标准指纹图谱，该标准指纹图谱通过对10批次花椒油采用上述方法建立的指纹图谱的分析比较，确定了 3个共有特征峰，其保留时间分别为9. 483min, 10. 374min, 11. 148min，这些共有特征峰构成了花椒油的指纹特征，可作为花椒油的标准指纹图谱。
一种花椒油麻味成分HPLC-DAD指纹图谱的分析检测方法，包括如下步骤I)、花椒油麻味成分的提取准确称取0. Ig花椒油于IOmL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇匀，30°C下浸提4h，冷却后，转入IOmL刻度离心试管中，离心，取上清液0. ImL于IOmL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇匀，经0. 2 y m滤膜过滤后即为待测液。2)、花椒油麻味成分的HPLC-DAD分析色谱条件安捷伦1200型高效液相色谱仪(四元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，DAD检测器及ChemStation色谱工作站)色谱柱ZORBAXEclipse XDB-C18 (4. 6 X 150mm，5 y m)
流动相组成为甲醇冰=60 40 (体积比)，流速I. OmL/min,柱温30°C，DAD扫描波长254nm，参比波长360nm，进样量I y L。在此条件下分析步骤I)制得的待测液，得到花椒油麻味成分的指纹图谱，并与上述得到的花椒油标准指纹图谱进行分析比较。本发明所具有的优点和有益效果本发明制得的花椒油标准指纹图谱适用于对花椒油质量的鉴别和控制，且花椒油的分析检测方法制作简便，色谱条件容易实现，方法的稳定性和重现性都比较好。
图I为本发明得到的花椒油的标准指纹图谱，图中从左到右分别标出了其共有特征峰I号、2号、3号。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不限定本发明的保护范围。实施例I一种花椒油HPLC-DAD指纹图谱的构建方法，包括如下步骤I)、供试品溶液的制备准确称取0. Ig花椒油于IOmL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇勻，30°C下浸提4h，冷却后，转入IOmL刻度离心试管中，离心，取上清液0. ImL于IOmL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇匀，经0. 2 y m滤膜过滤后即为供试品溶液。2)、HPLC-DAD分析色谱条件安捷伦1200型高效液相色谱仪(四元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，DAD检测器及ChemStation色谱工作站)色谱柱ZORBAXEclipse XDB-C18 (4. 6 X 150mm，5 y m)流动相组成为甲醇冰=60 40 (体积比)，流速I. OmL/min,柱温30°C,DAD扫描波长254nm，参比波长360nm，进样量I y L。在此条件下分析供试品溶液，得到花椒油的指纹图谱。按照上述方法对10批次花椒油建立指纹图谱，记录色谱图，确定了 3个共有特征峰，其保留时间分别为9. 483min, 10. 374min, 11. 148min，这些共有特征峰构成了花椒油的指纹特征，可作为花椒油的标准指纹图谱，如图I所示。
其中以2号峰的色谱峰分离度好、强度高，并且为所有批次图的共有峰，因此选择为参照物峰，且在进行稳定性和精密度考察试验时选用2号峰的数据进行计算。方法学考察稳定性试验取同一供试溶液，分别在0、3、6、9、12、15、18、21、24h不同时间点检
测指纹图谱，再用夹角余弦相似度计算样品与Oh样品相似度的RSD值。以评价样品和仪器的稳定性。结果显示相似度RSD值为2. 7%。说明供试溶液与测试仪器在24h内基本稳 定，没有明显变化，符合指纹图谱检测的要求。精密度试验取同一供试溶液，连续进样8次，利用夹角余弦相似度计算相似度，将后7次进样的图谱分别与第I次进样图谱进行相似度计算，得出后7个样品相似度的RSD值，用以评价该方法的精密度。结果显示其相似度RSD值为2. 3%。说明实验的总体精密度良好，符合指纹图谱检测的要求。
权利要求
1.一种花椒油HPLC-DAD指纹图谱的构建方法，其特征在于包括如下步骤 1)、供试品溶液的制备 准确称取0. Ig花椒油于IOmL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇匀，30°C下浸提4h，冷却后，转入IOmL刻度离心试管中，离心，取上清液0. ImL于IOmL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇匀，经0. 2 y m滤膜过滤后即为供试品溶液。
2)、HPLC-DAD分析色谱条件 安捷伦1200型高效液相色谱仪色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C18 (4. 6 X 150mm，5 y m) 流动相组成为甲醇水=60 :40，流速I. OmL/min,柱温30°C， DAD扫描波长254nm，参比波长360nm，进样量I y L。
在此条件下分析供试品溶液，得到花椒油的指纹图谱。
2.一种由上述所述构建方法得到的花椒油标准指纹图谱，其特征在于该标准指纹图谱通过对10批次花椒油采用上述方法建立的指纹图谱的分析比较，确定了 3个共有特征峰，其保留时间分别为9. 483min, 10. 374min，11. 148min，这些共有特征峰构成了花椒油的指纹特征，可作为花椒油的标准指纹图谱。
3.一种花椒油麻味成分HPLC-DAD指纹图谱的分析检测方法，包括如下步骤 1)、花椒油麻味成分的提取 准确称取0. Ig花椒油于IOmL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇匀，30°C下浸提4h，冷却后，转入IOmL刻度离心试管中，离心，取上清液0. ImL于IOmL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇匀，经0. 2 y m滤膜过滤后即为待测液。
2)、花椒油麻味成分的HPLC-DAD分析色谱条件 安捷伦1200型高效液相色谱仪(四元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，DAD检测器及ChemStation色谱工作站)色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C18 (4. 6 X 150mm，5 y m) 流动相组成为甲醇水=60 :40，流速I. OmL/min,柱温30°C， DAD扫描波长254nm，参比波长360nm，进样量I y L。
在此条件下分析步骤I)制得的待测液，得到花椒油麻味成分的指纹图谱，并与上述得到的花椒油标准指纹图谱进行分析比较。
全文摘要
本发明涉及一种花椒油HPLC-DAD指纹图谱的构建方法，包括如下步骤1)供试品溶液的制备准确称取0.1g花椒油于10mL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇匀，30℃下浸提4h，冷却后，转入10mL刻度离心试管中，离心，取上清液0.1mL于10mL容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，摇匀，经0.2μm滤膜过滤后即为供试品溶液。2)HPLC-DAD分析，得到花椒油的指纹图谱。本发明制得的花椒油标准指纹图谱适用于对花椒油质量的鉴别和控制，且花椒油的分析检测方法制作简便，色谱条件容易实现，方法的稳定性和重现性都比较好。
文档编号G01N30/02GK102749400SQ201210260460
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月26日 优先权日2012年7月26日
发明者刘娜 申请人:天津春发生物科技集团有限公司