专利名称：用于检测乙酰胆碱酯酶活性抑制率的探针、用途及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于检测乙酰胆碱酯酶活性抑制率的探针、用途及制备方法。
背景技术：
阿尔茨海默氏病(AD)即所谓的老年痴呆症，是一种进行性发展的致死性神经退行性疾病，其病因主要是由于在皮层内的乙酰胆碱(Ach)的浓度过低；临床表现为认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力进行性减退，并有各种神经精神症状和行为障碍。乙酰胆碱(Ach)是一种中枢神经递质，而乙酰胆碱酯酶(AChE)水解乙酰胆碱(Ach)是调节中枢神经反应系统的一个重要过程。临床治疗AD主要基于乙酰胆碱酯酶抑制剂，并因此需要能检测乙酰胆碱酯酶活性抑制率的技术手段。此外，神经气体、含有机磷和氨基甲酸酯类的杀虫剂都是乙酰胆碱酯酶抑制剂，因此前述技术手段也可用于检测神经气体和农药。传统检测乙酰胆碱酯酶活性抑制率的方法有Ellmann比色、或者检测胆碱氧化所产生的过氧化氢的方法，但这些检测方法灵敏度低，往往会有背景干扰。据发明人了解，应用荧光探针的检测方法具有良好的灵敏性，应当由此角度入手，研发更好的检测方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的问题，提供一种用于检测乙酰胆碱酯酶活性抑制率的探针、用途、及制备方法。本发明技术构思如下据发明人所知，氯化乙酰硫代胆碱(ATC)在乙酰胆碱酯酶(AChE)作用下会生成硫代胆碱(Thiocholine)，只要制备能与硫代胆碱的巯基发生反应产生荧光的探针即可。
权利要求
1.一种用于检测乙酰胆碱酯酶活性抑制率的探针，其特征是，具有如式I所示的结构
2.一种制备权利要求I所述探针的方法，其特征是，包括以下步骤 第一步、先将如式A所示的荧光素与氯仿、甲醇、冠醚及氢氧化钠反应，再将反应产物提纯，得到式II所示荧光素单醛；
3.根据权利要求2所述方法，其特征是，第一步的具体过程为(1)将荧光素与氯仿、甲醇、15-冠-5放于反应容器中，保持反应温度于50°C _60°C并加入氢氧化钠溶液得到反应液，在该反应温度下持续搅拌该反应液；(2)当反应液颜色变为黑褐色时,冷却停止反应，然后加入硫酸酸化并摇晃反应液,使反应液pH为2-3,并使反应液颜色为黄褐色并产生沉淀；(3)收集沉淀，真空干燥后采用硅胶层析提纯，即得荧光素单醛；所述硅胶层析采用体积比200:3的CH2Cl2: CH3OH为洗脱液。
4.根据权利要求2所述方法，其特征是，第二步的具体过程为(1)将荧光素单醛、2_环戊烯酮、咪唑加至四氢呋喃中，再加入去离子水混合，持续搅拌得到混合液；(2)将混合液浓缩后，用乙酸乙酯萃取混合液，收集有机层溶液；(3)将有机层溶液经硅胶层析分离得到探针；所述硅胶层析采用体积比25:75的乙酸乙酯石油醚为洗脱液。
5.权利要求I所述探针用于检测乙酰胆碱酯酶活性抑制率的用途。
全文摘要
本发明涉及一种用于检测乙酰胆碱酯酶活性抑制率的探针、用途及制备方法。该探针具有如式Ⅰ所示的结构本发明探针在溶液中本身呈浅黄色且低荧光，与硫代胆碱(Thiocholine)巯基反应后产生强烈的绿色荧光(荧光发射波长525nm)，选择性强，灵敏度高，采用该探针的荧光检测方法在生物医药领域有极大的应用前景。
文档编号G01N21/64GK102964353SQ201210411860
公开日2013年3月13日 申请日期2012年10月25日 优先权日2012年10月25日
发明者陈小强, 王惠琳, 周国栋 申请人:南京工业大学