专利名称：一种高效液相色谱法测定蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量的方法
技术领域：
本发明属于药物制剂分析领域，具体涉及一种高效液相色谱法测定蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量的方法。
背景技术：
蒿甲醚是一种高效、速效用于抗氯喹恶性疟及凶险型疟疾药物。分子式为C16H26O5,分子量:298.37;蒿甲醚为白色结晶或结晶性粉末，无臭，味微苦。在丙酮或三氯甲烷中极易溶解，在乙醇或乙酸乙酯中易容，在水中几乎不溶。其结构式见附图1。根据现有蒿甲醚注射剂制作工艺的研究(王宇和，蒿甲醚注射剂及其制剂工艺)，蒿甲醚注射剂是用由精致中炼油、茶油和中炼甘油三酸酯组成的混合注射用油加入蒿甲醚经过滤、灌封、通氮气、灭菌等流程制成。由于注射剂成分中含有茶油等成分，常规的蒿甲醚配制方法在蒿甲醚注射剂中蒿甲醚含量测定中不适用，中国药典2010版尚未对蒿甲醚注射液建立相关检测标准，国内对于这方面的研究还很少，姚静等(HPLC法测定蒿甲醚注射液的含量，姚静，程奇蕾，张启明等，药物分析杂志，2008，28(1):91 92)曾公开报道一种HPLC法测定蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量测定，采用C18柱(150mmX4.6mm，5um)，流动相选用乙腈-水(70: 30),流速1.0ml/min,样品溶解选用无水乙醇超声溶解；此法选用无水乙醇进行样品配制，需要较长时间的超声处理，样品配制比较费时，且常温条件下注射液中茶油等容易析出，检测结果相对不稳定；确立一种高效液相色谱法更准确、可靠地测定蒿甲醚注射液中蒿甲醚的含量对蒿甲醚注射液的质量控制具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于建立一种高效液相色谱法测定蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量的方法，具体通过以下技术方法实施:`(I)色谱条件:色谱柱选用以十八烷基键合硅胶为填充物，本发明分别选用Thermo C18柱(4.6 X 25Omm5 u m) > Thermo C18 柱(4.6 X 1 5Omm5 u m)和 Thermo C18 柱(4.6 X 10Omm5 u m)进行试验，优选Thermo C18柱(4.6 X 250mm5 y m),具有较好的分离效果。流动相为乙腈-7jC，乙腈比例为60% 80%，优选75%。流速1.0ml/min,柱温 30 40°C,优选 40°C。本发明使用Agilent-1260高效液相色谱仪，紫外检测器，检测波长216nm。(2)溶液制备:精密量取2ml蒿甲醚注射液至IOOml容量瓶，加适量甲醇与三氯甲烷(9: I)混合溶剂超声至溶液澄清，再用甲醇与三氯甲烷(9: I)混合溶剂定容至刻度线。本发明溶液制备还选用无水乙醇进行试验，注射液浓度稍大时待测样品溶液容易析出，配制的溶液稳定性差，故本发明选用甲醇与三氯甲烷(9: I)混合溶剂溶解样品。标准品溶液配制浓度与供试品溶液一致，均使用甲醇与三氯甲烷(9: I)混合溶剂溶解样品。
(3)测定法:分别量取蒿甲醚标准品和供试品溶液20 iil，自动进样测定，按外标法以峰面积计算蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量。按以上色谱条件，精密量取20 Ul蒿甲醚标准品溶液和待测溶液，分别注入液相色谱仪，蒿甲醚峰与杂质峰之间的分离度为7.25，主峰对称因子为1.03，理论板数按蒿甲醚峰计算为15000，注射液样品溶液中蒿甲醚峰对称因子为1.05，理论塔板数大于10000，任意两个相邻峰之间最小分离度为2.7，符合HPLC法测定要求。
图1为蒿甲醚结构式图2为蒿甲醚标准品高效液相图谱图3为蒿甲醚注射液高效液相图谱图4为蒿甲醚标准品进样体积与峰面积线性关系
具体实施例方式实施例1精密量取蒿甲醚注射液(来自天津太平洋医药有限公司)2ml置于IOOml容量瓶，加适量甲醇与三氯甲烷(9: I)混合溶剂超声(分两次超声，总共约15min，50Hz，)至油状物完全溶解，静置5分钟，再加甲醇与三氯甲烷(9: I)混合溶剂定容至刻度。溶液经
0.45um孔径滤头过滤即得供试品溶液；供试品溶液平衡配制5个样品。精密称量40mg蒿甲醚标准品置于25ml容量瓶，加甲醇与三氯甲烷(9: I)混合溶剂溶解并用甲醇与三氯甲烷(9: I)混合溶剂定容至刻 度，经0.45 孔径滤头过滤即得标准品溶液；标准品溶液配制5个样品。色谱条件:选用赛默飞世尔公司C18柱(4.6X250mm5iim);流动相为乙腈-水(75: 25)，流速1.0ml/min ;柱温40°C ;检测波长216m ;进样体积20 u 10按上述色谱条件，分别精密量取20 Ul标准品和供试品各5个，分别进样，所得峰面积值如表I所示:表I标准品和供试品峰面积
编号_I_2_3_4_5
标准品峰面积 1503.94275 1504.33826 1506.70581 1505.43616 1504.01025 供试品峰面积 1436.6773 1432.65906 1439.45264 1437.10986 1435.47363标准品溶液5个平衡样品分别进样所得峰面积RSD值为0.08% ;按外标法计算蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量，供试品溶液重复测量5次测得蒿甲醚注射液中蒿甲醚平均含量为95.44%，5次测量蒿甲醚含量RSD值为0.17%。实施例2:方法学考察蒿甲醚标样连续进样5次，峰面积RSD值为0.17%，精密度良好。蒿甲醚标准品按本发明方法配制成l.0mg/ml溶液，分别于O时、2时、4时、8时、12时、18时、24时测定，峰面积RSD值为0.58%，说明蒿甲醚标样在至少24小时内是稳定的，可用于含量测定。按相同浓度制成的供试品溶液，分别于0时、2时、4时、8时、12时、18时、24时测定，峰面积RSD值为1.02%，说明蒿甲醚注射液在至少24小时内是稳定的，可用于含量测定。 精密称蒿甲醚标准品，按本发明方法制成1.0mg/ml溶液，分别进样I yl，2 y，5111，10111，20111，30111，50111，70111，90111，100111，结果表明进样量在11^ 100 y g范围内与峰面积有良好的线性关系，线性方程为I = 34.928x+9.1303 (R2 = 0.9999)，进样量与峰面积标准曲线见 图4。
权利要求
1.一种高效液相色谱法测定蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量的方法，其特征在于: (1)色谱条件:色谱柱选用以十八烷基键合硅胶为填充物，流动相为乙腈-水(75: 25)，流速 1.0ml/min,柱温 40°C，检测波长 216nm ； (2)溶液制备:精密量取2ml蒿甲醚注射液至IOOml容量瓶，加适量甲醇与三氯甲烷(9: I)混合溶剂超声至溶液澄清，再用甲醇与三氯甲烷(9: I)混合溶剂定容至刻度线； (3)测定法:分别量取蒿甲醚标准品和供试品溶液20yl，自动进样测定，按外标法以峰面积计算蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量。
2.根据权利要求1中所述的蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量测定方法，其特征在于色谱柱选用C18柱(4.6X250mm5 u m),分离效果较好。
3.根据权利要求1中所述的蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量测定方法，其特征在于配制供试品溶液超声溶解时先超声lOmin，静置5min再超声至注射液中茶油完全溶解，溶液澄清。
4.根据权利要求1中所述的蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量测定方法，其特征在于按外标法以峰面积对蒿甲醚注射液中蒿甲醚进行含量测定时，供试品溶液重复测量5次测得蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量RSD 值为0.17%。
全文摘要
本发明公开了一种高效液相色谱法测定蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量的方法，其特征在于(a)色谱柱选用以十八烷基键合硅胶为填充物，流动相为乙腈-水(75∶25)，流速1.0ml/min，柱温40℃，检测波长216nm。(b)溶液制备精密量取2ml蒿甲醚注射液至100ml容量瓶，加适量甲醇与三氯甲烷(9∶1)混合溶剂超声至溶液澄清，再用甲醇与三氯甲烷(9∶1)混合溶剂定容至刻度线，蒿甲醚标准品同法配制。(c)测定法按外标法以峰面积计算蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量。本发明提出了一种更稳定可靠的高效液相色谱法测定蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量的方法，该方法操作简便，测定结果准确可靠，专属性强，检测时间较短，为蒿甲醚注射液质量控制提供了一种准确可靠的含量检测方法。
文档编号G01N30/74GK103235072SQ20131017597
公开日2013年8月7日 申请日期2013年5月14日 优先权日2013年5月14日
发明者张梅, 彭学东, 赵金召, 祁亚楠 申请人:张家港威胜生物医药有限公司