一种胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测试剂盒及其制备方法和用途。本发明所提供的一种定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体采用荧光微球标记。本发明所提供的试剂盒首次将胰岛素样生长因子结合蛋白-1通过荧光微球免疫层析技术进行检测，兼具灵敏性和特异性，具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。
【专利说明】一种胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测 试剂盒及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 胰岛素样生长因子结合蛋白-l(IGFBP-l)是用于检测胎膜破裂的最佳方法，也是 经美国FDA批准的金标准。世界各国临床上有胎膜早破试纸条、高磷酸化、低磷酸化及非磷 酸化等不同称谓，均指胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测方法。该法经临床证明优于其他 类似检测方法，深蓝胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测条准确性高（大于99% )，简单易 用。无论在妇产科诊所、医院检查室、门诊或家庭，均可得道同样准确的结果。
[0003] 非磷酸化的IGFBP-1主要存在羊水中由蜕膜细胞合成，临产时蜕膜与绒毛膜分 离，蜕膜细胞碎片漏到宫颈黏液中。IGFBP-1在羊水中的体积分数比母亲血液中高100倍? 1000倍，其他体液较少，宫颈黏液、精液和尿液对实验均无影响。
[0004] 宫颈阴道分泌物中的IGFBP-1可作为诊断胎膜早破的客观指标。
[0005] 目前已知的IGFBP-1检测方法还存在较多缺陷，如操作较为繁琐，耗时较长，不适 宜临床上使用。前我国市场上的IGFBP-1检测试剂盒准确度、灵敏度、重复性仍然较差。
【发明内容】
[0006] 鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种快速测定胰岛素样生 长因子结合蛋白-1含量的试剂盒，用于解决现有技术中的问题。
[0007] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种快速测定胰岛素样生长因子结 合蛋白-1含量的试剂盒，包括试纸卡，所述试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端 开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胰岛素样生长 因子结合蛋白-1单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上 的胰岛素样生长因子结合蛋白-1单克隆抗体采用荧光微球标记。
[0008] 优选的，所述金标垫上的胰岛素样生长因子结合蛋白-1单克隆抗体采用180nm荧 光微球标记，EX(nm) = 650/Em(nm) = 670,具有信号受背景干扰小，检测灵敏度高，结果重 复性好的优点。
[0009] 优选的，所述底板为PVC底板。
[0010] 优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样 端较远一侧。
[0011] 优选的，所述检测线上包被有胰岛素样生长因子结合蛋白-1单克隆抗体。所述金 标垫上的胰岛素样生长因子结合蛋白-1单克隆抗体与检测线上的胰岛素样生长因子结合 蛋白-1单克隆抗体可以是相同的抗体，也可以是不同的抗体。
[0012] 优选的，质控线上包被羊抗鼠抗体。
[0013] 优选的，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲 液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液 的浓度为20-200mM。
[0014] 优选的，本发明所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选 自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为 5_50mM〇
[0015] 优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、 PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10?50g/L。
[0016] 优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19TWEEN20、 S-20TWEEN80、S-13TRIT0NX-45、S-14TRITONX-100、S-15TRIT0NX305 中的任意一种或多 种的组合，所述表面活性剂的浓度为10?50g/L。
[0017] 优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明所述的金标垫在 预处理时所使用的预处理缓冲液包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠 和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3. 5 - 7. 5g/L， 缓冲液的pH值为7. 2 - 7. 6。
[0018] 优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：
[0019]
【权利要求】
1. 一种定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包 括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水 垫，所述金标垫上包含胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检 测线和质控线，所述金标垫上的胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体采用荧光微球标记。
2. 如权利要求1所述的定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测试剂盒，其特 征在于，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一 侧。
3. 如权利要求1所述的定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测试剂盒，其特征 在于，所述检测线上包被有胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体。
4. 如权利要求1所述的定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测试剂盒，其特征 在于，质控线上包被羊抗鼠抗体。
5. 如权利要求1所述的定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测试剂盒，其特征 在于，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸 缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为 20-200mM〇
6. 如权利要求1所述的定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测试剂盒，其特征 在于，所述金标垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸 盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为5-50mM。
7. 如权利要求6所述的定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测试剂盒，其特 征在于，所述缓冲液中还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000 或PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10?50g/L。
8. 如权利要求1所述的定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测试剂盒，其特征 在于，还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有试纸卡卡槽，所述试纸卡嵌于 所述试纸卡卡槽内，所述上盖设有测试窗和加样孔，所述测试窗的位置与所述检测线和质 控线的位置相配合，所述加样孔的位置与所述样品垫的位置相配合。
9. 如权利要求1所述的定量检测脂胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测试剂盒，其特 征在于，所述检测试剂盒用于定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1的含量。
10. 根据权利要求1?9任一权利要求所述的定量检测脂胰岛素样生长因子结合蛋 白-1的检测试剂盒的制备方法，具体包括如下步骤： 1) 用荧光微球标记的胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体溶液喷涂金标垫，制得包含 胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体的金标垫； 2) 在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体 及羊抗鼠抗体，制得包被后的硝酸纤维素膜； 3) 将样品垫、步骤1)制备的金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在 底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。
【文档编号】G01N33/68GK104459138SQ201410735829
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月5日 优先权日:2014年12月5日
【发明者】吉权 申请人:重庆乾德生物技术有限公司