一种gp73检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种定量检测高尔基体糖蛋白-73GP73的检测试剂盒及其制备方法和用途。本发明提供一种定量检测高尔基体糖蛋白-73GP73的检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含高尔基体糖蛋白-73GP73抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的高尔基体糖蛋白-73GP73抗体采用荧光微球标记。本发明所提供的检测试剂盒首次将高尔基体糖蛋白-73GP73通过荧光微球免疫层析技术进行检测，兼具灵敏性和特异性，具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。
【专利说明】-种GP73检测试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种高尔基体糖蛋白-73检测试剂盒及其 制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 高尔基体糖蛋白-73 (GolgiProtein 73, GP73)又称II型高尔基体膜蛋白（Golgi phosphoprotein2, GOLPH 2)，其在慢性肝炎、肝硬化等病人血清中浓度升高，而在肝细胞肝 癌病人血清中升高更加明显，和正常人或良性肝病病人之间呈显著差异。有研究表明，血清 GP73用于肝癌的诊断，优于血清GP73检测。据文献报道，GP73检测肝癌的灵敏度为69%， 特异性为75%。对于早期肝癌的诊断，GP73的敏感性为62%，而GP73敏感性仅为25%。 6?73水平低于2〇11§/1的肝癌患者中，有57%的人群6?73水平显著升高。这表明，6?73 的应用能够大大提高对GP73阴性的肝癌患者的检出率。
[0003] 目前已知的高尔基体糖蛋白_73(GP73)检测方法还存在较多缺陷，如操作较为繁 琐，耗时较长，不适宜临床上使用。目前，我国市场上的高尔基体糖蛋白_73(GP73)检测试 剂盒准确度、灵敏度、重复性仍然较差。
【发明内容】
[0004] 鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种快速测定血清或血浆 中高尔基体糖蛋白-73GP73含量的试剂盒，用于解决现有技术中的问题。
[0005] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种快速测定血清或血浆中高尔基 体糖蛋白-73GP73含量的试剂盒，包括试纸卡，所述试纸卡包括底板、及位于底板表面的从 加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含高尔基 体糖蛋白-73GP73单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫 上的高尔基体糖蛋白-73GP73单克隆抗体采用荧光微球标记。
[0006] 优选的，所述金标垫上的高尔基体糖蛋白-73GP73单克隆抗体采用180nm荧光微 球标记，EX(nm) = 650/Em(nm) = 670,具有信号受背景干扰小，检测灵敏度高，结果重复性 好的优点。
[0007] 优选的，所述底板为PVC底板。
[0008] 优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样 端较远一侧。
[0009] 优选的，所述检测线上包被有高尔基体糖蛋白-73GP73单克隆抗体。所述金标垫 上的高尔基体糖蛋白-73GP73单克隆抗体与检测线上的高尔基体糖蛋白-73GP73单克隆抗 体可以是相同的抗体，也可以是不同的抗体。
[0010] 优选的，质控线上包被羊抗鼠抗体。
[0011] 优选的，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、TriS-HCl缓冲 液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液 的浓度为20-200mM。
[0012] 优选的，本发明所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选 自甘氨酸缓冲液、TriS-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为 5_50mM〇
[0013] 优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、 PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10?50g/L。
[0014] 优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19TWEEN 20、 S-20TWEEN 80、S-13TRIT0N X-45、S-14TRIT0N X-100、S-15TRIT0N X305 中的任意一种或多 种的组合，所述表面活性剂的浓度为10?50g/L。
[0015] 优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明所述的金标垫在 预处理时所使用的预处理缓冲液包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠 和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3. 5 - 7. 5g/L， 缓冲液的pH值为7. 2 - 7.6。
[0016] 优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：
[0017]
【权利要求】
1. 一种定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73的检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底 板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫， 所述金标垫上包含高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质 控线，所述金标垫上的高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体采用荧光微球标记。
2. 如权利要求1所述的定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73的检测试剂盒，其特征在 于，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。
3. 如权利要求1所述的定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73的检测试剂盒，其特征在 于，所述检测线上包被有高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体。
4. 如权利要求1所述的定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73的检测试剂盒，其特征在 于，质控线上包被羊抗鼠抗体。
5. 如权利要求1所述的定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73的检测试剂盒，其特征在 于，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸 缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为 20-200mM〇
6. 如权利要求1所述的定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73的检测试剂盒，其特征在 于，所述金标垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐 缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为5-50mM。
7. 根据权利要求6所述的定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73的检测试剂盒，其特征在 于，所述缓冲液中还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000和 PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10?50g/L。
8. 如权利要求1所述的定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73的检测试剂盒，其特征在 于，还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有试纸卡卡槽，所述试纸卡嵌于所 述试纸卡卡槽内，所述上盖设有测试窗和加样孔，所述测试窗的位置与所述检测线和质控 线的位置相配合，所述加样孔的位置与所述样品垫的位置相配合。
9. 如权利要求1所述的定量检测脂高尔基体糖蛋白-73 GP73的检测试剂盒，其特征在 于，所述检测试剂盒用于定量检测血清或血浆中高尔基体糖蛋白-73 GP73的含量。
10. 根据权利要求1?9任一权利要求所述的定量检测脂高尔基体糖蛋白-73 GP73的 检测试剂盒的制备方法，具体包括如下步骤： 1) 用荧光微球标记的高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体溶液喷涂经预处理的金标垫，制 得包含高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体的金标垫； 2) 在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体及羊 抗鼠抗体，制得包被后的硝酸纤维素膜； 3) 将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在底 板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。
【文档编号】G01N33/68GK104360080SQ201410735827
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年12月5日 优先权日:2014年12月5日
【发明者】吉权 申请人:重庆乾德生物技术有限公司