量子点‑β‑HCG单抗偶联物的制备方法及其应用与流程

文档序号:11946436阅读:来源:国知局

技术特征:

1.量子点-β-HCG单抗偶联物的制备方法及其应用,其特征在于按照下述步骤进行:

(1)量子点偶联β-HCG单抗

偶联时,加入磷酸盐调节反应液pH,在巯基丙酸修饰的CdTe量子点中先加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(EDC)溶液活化反应10-15 min,再加入NHS溶液反应10-15 min,最后加入β-HCG单抗于37℃反应2-4 h;

反应结束后,将得到的偶联物离心去沉淀,上清液经超滤离心管离心,并用磷酸缓冲液洗涤,最后浓缩后4℃保存;

(2)基于量子点的免疫印迹法

蛋白样品经过SDS-PAGE电泳按分子量大小分离,转至PVDF膜后并封闭,用量子点标记的β-HCG单抗做为一抗孵育,膜上目的蛋白即能与之进行特异性结合,最后采用紫外凝胶系统检测成像;

蛋白经SDS-PAGE电泳按分子量大小分离,再将PVDF膜于甲醇中激活,采用湿法转膜;

将转好的膜放入5%脱脂牛奶中,震荡封闭1 h;

用TBS溶液稀释成一系列浓度的量子点-β-HCG单抗偶联物,室温下孵育2 h;

反应后直接将膜置于紫外凝胶系统中检测成像;

观察荧光条带,并检测各条带荧光强度,得出线性关系。

2.根据权利要求1所述的量子点-β-HCG单抗偶联物的制备方法,其特征在于其中所述的的量子点,其表面带有羧基的CdTe量子点,发射波长为520 nm - 600 nm中的一种。

3.根据权利要求1所述的量子点-β-HCG单抗偶联物的制备方法,其特征在于其中步骤(1)中加入的量子点与EDC质量比为1:0.4 - 1:1,EDC与NHS质量比为1: 0.1 - 1: 0.3;

调节反应pH为7.0 – 8.0,每步反应10-15 min;

最后加入的量子点与β-HCG单抗质量比为1: 0.1-1: 0.5。

4.根据权利要求1所述的量子点-β-HCG单抗偶联物的制备方法的应用,其特征在于其中所述的量子点-β-HCG单抗偶联物的应用,检测的目的蛋白条带可针对HCG和β-HCG进行特征检测,并根据其荧光强度进行定量测定。

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