一种外周血淋巴细胞微核的检测试剂盒及其检测方法与流程

文档序号:12112278阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种人外周血淋巴细胞微核的检测方法,包括如下步骤:

(1)用红色荧光染料对离体的人外周血淋巴细胞进行染色,得到红色荧光染色后细胞;

(2)用裂解液对所述红色荧光染色后细胞进行一次裂解和染色,得到裂解和染色后细胞;

(3)流式细胞仪检测所述裂解和染色后细胞,根据荧光强度判断活细胞中含有微核的细胞;

所述裂解液中的溶质由氯化钠、柠檬酸钠、Triton X-114、Rnase和绿色荧光染料组成。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:

所述离体的人外周血淋巴细胞为用溶血素裂解全血培养物后得到的人外周血淋巴细胞;

和/或,所述红色荧光染料为EMA或7-AAD;

和/或,所述绿色荧光染料为DAPI、SYTOX Green或YO-PRO-1;

和/或,所述氯化钠、所述柠檬酸钠、所述Triton X-114、所述Rnase和所述绿色荧光染料的配比为(310-330)mg:(540-560)mg:(0.16-0.17)mg:0.688U:(4.2-4.5)mg。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:

所述红色荧光染料为EMA溶液;

和/或,所述绿色荧光染料为DAPI;

和/或,所述氯化钠、所述柠檬酸钠、所述Triton X-114、所述Rnase和所述DAPI的配比为321mg:550mg:0.165mg:0.688U:4.373mg。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法,其特征在于:

所述氯化钠在所述裂解液中的浓度为0.293-0.878mg/ml;

和/或,所述柠檬酸钠在所述裂解液中的浓度为0.588-1.176mg/ml;

和/或,所述Triton X-114在所述裂解液中的浓度为0.214-0.322μg/ml;

和/或,所述DAPI在所述裂解液中的浓度为0.2-0.5μg/ml;

和/或,所述RNase在所述裂解液中的浓度为1.0-1.5μg/ml;

和/或,所述EMA溶液中EMA的浓度为0.10-0.25mg/ml。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:

所述氯化钠在所述裂解液中的浓度为0.579mg/ml;

和/或,所述柠檬酸钠在所述裂解液中的浓度为0.991mg/ml;

和/或,所述Triton X-114在所述裂解液中的浓度为0.297μg/ml;

和/或,所述DAPI在所述裂解液中的浓度为0.4μg/ml;

和/或,所述RNase在所述裂解液中的浓度为1.239μg/ml;

和/或,所述EMA溶液中EMA的浓度为0.125mg/ml。

6.一种用于检测人外周血淋巴细胞微核的试剂盒,其包括权利要求1-5中所述的红色荧光染料、权利要求1-5中所述的裂解液、溶血素和阳性标准品。

7.权利要求1-5中任一所述的方法或权利要求6所述的试剂盒在检测或辅助检测在人外周血淋巴细胞微核率中的应用。

8.权利要求1-5中任一所述的方法或权利要求6所述的试剂盒在检测和/或监护人群健康中的应用。

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