一种沙格列汀中间体‑1的色谱纯度测定方法与流程

本发明涉及一种沙格列汀中间体-1（1S,2S,5S）-3-氨甲酰基-2-氮杂双环[3,1,0]己烷甲磺酸盐的色谱纯度测定方法，属于医药化工
技术领域：
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背景技术：
：数据显示，最近几年来患糖尿病的机率和死亡的机率呈现增高的趋向，发病年龄日益年轻化，各系统的并发症发病率很高，因而需要及时治疗糖尿病。目前治疗糖尿病的药物主要有：①胰岛素及其类似物；②促胰岛素分泌药物，主要包括磺酰脲类药物和非磺酰脲类药物；③降低或者延缓碳水化合物质代谢与吸收的药物，主要包括α-葡萄糖苷酶抑制剂和淀粉不溶素；④胰岛素增敏剂，主要有噻唑烷二酮类药物和非噻唑烷二酮类药物；⑤除上述治疗糖尿病的药物还有一些备受关注的新型药物主要包括胰高血糖素样肽-1（GLP-1）类似物、二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ）抑制剂、葡萄糖钠吸收转运蛋白-2（SGLT-2）抑制剂、11BHSD1抑制剂、G-蛋白偶联受体葡萄糖激酶抑制剂。沙格列汀作为一种抑制二肽基肽酶-4的药物，即通过选择性抑制二肽基肽酶-4的能力从而降低胰高血糖素样肽1和GIP在人类体内的失活，不但能提高胰高血糖素样肽-1和GIP浓度使得胰岛β细胞分泌胰岛素，而且还可以降低胰高血糖素浓度，从而降低血糖。沙格列汀作为一种有效的降血糖药物，对沙格列汀进行仿制需要对其质量进行控制，以求沙格列汀质量符合国家质量标准或行业标准等，而中间体质量直接或间接地影响沙格列汀原料药的质量，因此需要对其中间体-1进行内控质量控制，并测定沙格列汀中间体-1色谱纯度是否符合标准。因沙格列汀中间体-1是以有机盐的形式存在，极性较大，采用常规的流动相对沙格列汀中间体-1样品进行分析，保留时间短，不便确定其色谱纯度，故采用离子对色谱法对样品纯度进行分析。沙格列汀中间体-1化学名称为（1S,2S,5S）-3-氨甲酰基-2-氮杂双环[3,1,0]己烷甲磺酸盐，其结构如下所示：技术实现要素：为了克服（1S,2S,5S）-3-氨甲酰基-2-氮杂双环[3,1,0]己烷甲磺酸盐在十八烷基键合硅胶色谱柱保留时间短的缺陷，本发明解决的技术问题是提供了一种准确、稳定的快速测定（1S,2S,5S）-3-氨甲酰基-2-氮杂双环[3,1,0]己烷甲磺酸盐色谱纯度的测定方法。为解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：本发明的沙格列汀中间体-1色谱纯度的测定方法，首先配制流动相和供试品溶液，然后利用十八烷基键合硅胶色谱柱，使用配置紫外检测器的高效液相色谱仪测试峰面积，最后按照面积归一化法计算色谱纯度，其特征在于，所使用的流动相A相为6~12mmol/L磷酸氢二钾、6~14mmol/L的烷基磺酸钠（按照以上摩尔浓度范围称量磷酸氢二钾、烷基磺酸钠置于同一个容量瓶中，用纯化水溶解、定容并摇匀，组成缓冲离子对溶液），用10%磷酸溶液调节pH值。流动相B相为乙腈:水=95:5~75:25或甲醇:水=95:5~80:20，以上均为体积百分比。所述的沙格列汀中间体-1色谱纯度测定溶液在紫外检测器上的吸收值在150~250mV。所述紫外检测器的检测波长为205nm。所述进样体积为5~50μL。所述流动相流速为0.6~1.4mL/min。本发明提供的沙格列汀中间体-1色谱纯度测定方法，具有分辨率高、重复性好、峰呈现性好、操作简便等特点，能够准确、快速、稳定的测定沙格列汀中间体-1样品的色谱纯度，为沙格列汀中间体-1的质量控制提供了保障。附图说明图1为实施例1的典型色谱图。图2为实施例2的典型色谱图。具体实施方式本发明的（1S,2S,5S）-3-氨甲酰基-2-氮杂双环[3,1,0]己烷甲磺酸盐的色谱纯度测定方法，具体操作如下：一、配制流动相和沙格列汀中间体-1样品溶液（1）流动相的配制A相：6~12mmol/L磷酸氢二钾、6~14mmol/L的烷基磺酸钠（按照以上摩尔浓度范围称量磷酸氢二钾、烷基磺酸钠一起置于容量瓶中，用纯化水溶解、定容并摇匀，组成缓冲离子对溶液），用10%磷酸溶液调节pH值。B相：按照乙腈:水=95:5~75:25的比例配制500mL流动相（或按照甲醇:水=95:5~80:20的比例配制500mL流动相），充分振摇混合均匀，超声15min，脱气后备用；（2）沙格列汀中间体-1样品溶液配制用流动相A溶解沙格列汀中间体-1，使配制的样品溶液在紫外检测器上的吸收值在150~250mV；所用水为自制纯化水，所用磷酸氢二钾、戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、甲醇、乙腈均为色谱纯级别。二、测试峰面积利用十八烷基键合硅胶色谱柱，配有有紫外检测器的高效液相色谱仪测定样品，并记录相应的峰面积，测试条件如下：进样体积：5~50μL；流动相的流速：0.6~1.4mL/min；检测波长：205nm。三、计算结果将上述所要测定的沙格列汀中间体-1及各杂质的峰面积用面积归一化法计算沙格列汀中间体-1样品的纯度。下面通过实施例对本发明做进一步说明，目的是为了便于理解本发明的内容。实施例11、试验仪器选用HitachiD2000型高效液相色谱，配制在线脱气装置，四元梯度泵，100μL自动进样器，多波长紫外检测器，柱温箱，HitachiL2000色谱工作站。2、测试条件色谱柱HITACHILAROMC18，5μm，4.6×150mm；柱温35℃；流动相流速0.8mL/min；检测波长205nm；流动相A：按照要求称戊烷磺酸钠、磷酸氢二钾一定量置于同一容量瓶中，加入纯化水溶解、定容并摇匀，使戊烷磺酸钠浓度为8mmol/L，磷酸氢二钾浓度为10mmol/L，用10%的磷酸调pH值为4.5。流动相B为乙腈:水=90:10（V/V），梯度程序如下18时间（min）流动相A流动相B0901089010118515215545255545299010409010利用流动相A配制沙格列汀中间体-1样品溶液，使其在紫外检测器上的吸收值为195mV；进样量为10μL；待仪器运行平稳后，进样，记录色谱图及各物质峰面积，按照面积归一化法计算沙格列汀中间体-1的色谱纯度。本实施例的峰面积数据见表1所示，纯度为98.795%，其典型的色谱图见图1所示。表1实施例1的峰面积数据。实施例21、实验仪器同实施例1所述。2、测定条件色谱柱HITACHILAROMC18，5μm，4.6×150mm；柱温40℃；流动相流速1.0mL/min；检测波长205nm；流动相A：按照要求称庚烷磺酸钠、磷酸氢二钾一定量共置于烧杯内，加入纯化水溶解、定容并摇匀，使庚烷磺酸钠浓度为10mmol/L，磷酸氢二钾浓度为8mmol/L，用10%的磷酸调pH值为5.0。流动相B为甲醇:水=95:5（V/V），梯度程序如下18时间（min）流动相A流动相B0955109551285152060402560402995540955利用流动相A配制沙格列汀中间体-1样品溶液，使其在紫外检测器上的吸收值为210mV；进样量为10μL；待仪器运行平稳后，进样，记录色谱图及各物质峰面积，按照面积归一化法计算沙格列汀中间体-1的色谱纯度。本实施例的峰面积数据见表2所示，纯度为97.236%，其典型的色谱图见图2所示。表2实施例2的峰面积数据当前第1页1 2 3