本发明涉及生物
技术领域：
，尤其涉及一种快速检测EB病毒的方法。
背景技术：
：EB病毒(epstein-barrvirus,EBv)，又称人类疱疹病毒4型(Humanherpesvirus4(HHV-4))。EB病毒的形态与其他疱疹病毒相似，圆形、直径180nm，基本结构含核样物、衣壳和囊膜三部分。核样物为直径45nm的致密物，主要含双股线性DNA，其长度随不同毒株而异平均为17.5×104bp分子量108。衣壳为20面体立体对称，由162个壳微粒组成。囊膜由感染细胞的核膜组成，其上有病毒编码的膜糖蛋白，有识别淋巴细胞上的EB病毒受体，及与细胞融合等功能。此外在囊膜与衣壳之间还有一层蛋白被膜。EB病毒是Epstein和Barr于1964年首次成功地将Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，认为该病毒是多种恶性肿瘤的病因之一，它主要感染人类口咽部的上皮细胞和B淋巴细胞。在中国南方鼻咽癌患病人群中大多都检测到有EB病毒基因组存在。本病分布广泛，多呈散发性，亦可引起流行。病毒携带者和病人是本病的传染源。经口密切接触为主要传播途径，飞沫传播虽有可能，但并不重要。发病以15-30岁的年龄组为多，6岁以下多呈不显性感染。全年均有发病，似以晚秋初冬为多。一次得病后可获较持久的免疫力。目前检验EB病毒的方法多种多样，但是未处理过的EB病毒进行检验会有一定的误差，影响对结果的判断，对人体健康不利。所以，我们需要一种在检验EB病毒之前对EB病毒进行预处理的方法，以提高病毒检测的结果的准确性。技术实现要素：本发明的目的是为了解决现有技术中检验准确度较低的缺点，而提出的一种快速检测EB病毒的方法。为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：设计一种快速检测EB病毒的方法，包括以下步骤：步骤一：取口咽部的上皮细胞和B淋巴细胞进行预处理；步骤二：将预处理完成的细胞进行离心，弃上清液，得沉淀物；步骤三：将沉淀物点样在量子点标记免疫层析试纸上接近EB病毒IgA单克隆抗体的一端，反应5min后，在紫外分析仪中观察结果；其中，所述的咽部的上皮细胞和B淋巴细胞进行预处理的方法为：将所取的细胞在营养液中35-40℃条件下摇床培养12-24h，进行煮沸5-8min，然后加入强碱，超声波处理5-15s。优选的，所述强碱为氢氧化钠或氢氧化钾。优选的，所述营养液的pH值为7.0-7.2。优选的，所述营养液由如下重量配比的原料制成：基础营养液80-100份、健康B细胞1-3份、GDNF0.3-0.5份、小牛血清1-3份、维生素C0.5-1.5份、维生素E0.5-1.5份、氯化钠2-4份、磷酸盐0.2-0.6份。优选的，所述基础营养液为牛肉浸液。优选的，所述磷酸盐为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠以质量比1：2的混合物。本发明提出的一种快速检测EB病毒的方法，有益效果在于：本发明在检测EB病毒之前对EB病毒进行预处理，先进行营养液的培养然后进行煮沸处理然后加入强碱进行裂解，方便在使用量子点标记免疫层析试纸检测的时候更加快速得到更加准确的结果。具体实施方式下面将结合本发明实施例对技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。实施例一种快速检测EB病毒的方法，包括以下步骤：步骤一：取口咽部的上皮细胞和B淋巴细胞进行预处理；预处理的方法为：将所取的细胞在pH值为7.0-7.2的营养液中35-40℃条件下摇床培养12-24h，进行煮沸5-8min，然后加入氢氧化钠，超声波处理5-15s；步骤二：将预处理完成的细胞进行离心，弃上清液，得沉淀物；步骤三：将沉淀物点样在量子点标记免疫层析试纸上接近EB病毒IgA单克隆抗体的一端，反应5min后，在紫外分析仪中观察结果。其中，营养液由如下重量配比的原料制成：牛肉浸液80份、健康B细胞1份、GDNF0.3份、小牛血清1份、维生素C0.5份、维生素E0.5份、氯化钠2份、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠以质量比1：2的混合物0.2份。结果检验：配制经过预处理的三种浓度的EB病毒溶液，浓度分别为1.0，2.0，5.0ug/L，利用检测试纸和化学发光试纸盒对样本进行检测，每个浓度检测3次；配制未经过预处理的三种浓度的EB病毒溶液，浓度分别为1.0，2.0，5.0ug/L，利用检测试纸和化学发光试纸盒对样本进行检测，每个浓度检测3次将样品点样在组装好的试纸上接近EB病毒IgA单克隆抗体的一端，反应5min后，在紫外分析仪中观察结果。用正常人的血液设为空白对照。结果判定：在C带显现红色荧光带的前提下，目视T带的荧光带强度，与空白对照，荧光越弱，代表待测液中含被检物的浓度越低；同时记录显现结果时间。其中，-表示隐形，+表示阳性，+越多，荧光强度越大。实验结果见表1、表2。表1：各种浓度EB病毒的试纸条检测结果表2：各种浓度EB病毒的出现结果时间病毒溶液（ug/L）未预处理组预处理组1.045min9min2.035min8min5.025min4min由以上结果可知，通过预处理的EB病毒检测结果出现时间更短，且采用量子点标记免疫层析试纸检测结果更加直观、方便。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
技术领域：
的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3