4] 上述样本稀释液包括磯酸氨二钢浓度20mmol，氯化钢浓度150mmol，牛血清白蛋 白浓度1 % -2 %，吐温-20浓度0. 1 %，其余为水。
[0化5] 上述巧光结合垫2上巧光标记的激发电磁波的波长为310-550nm，发射波长为 340-620nm的电磁波。
[0化6] 上述巧光结合垫2可W采用W下方法制成：
[0057] 制备巧光微粒标记的M化抗体；
[005引将18-22mg的巧光素或480-520mg巧光微球与SOmgMBL单克隆抗体混合后，边揽 拌边缓慢加入1-己基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺和N-哲基班巧酷亚胺，使其整 个反应体系中1-己基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺含量为0. 1-0. 3mg，N-哲基班巧 酷亚胺的含量为0. 1-0. 2mg，在4°C避光反应过夜；用Se地adex G25凝胶柱将抗体巧光标记 物进行纯化，去除杂质，用巧光保护剂复溶；经冻干保存备用；
[0化9] 制备巧光微粒标记兔IgG ;
[0060] 将18-22mg的巧光素或480-520mg巧光微球与50mg兔IgG混合后，边揽拌边缓慢 加入1-己基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺和N-哲基班巧酷亚胺，使其整个反应体 系中1-己基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺含量为0. 1-0. 3mg，N-哲基班巧酷亚胺的 含量为0. 1-0. 2mg，在4°C避光反应过夜；用Se地adex G25凝胶柱将抗体巧光标记物进行纯 化，去除杂质，用巧光保护剂复溶；经冻干保存备用；
[0061] 将上述制备好的巧光微粒标记的M化抗体和巧光微粒标记兔IgG混合，W使两种 抗体浓度分别都为化g/ml，按500ul/30cm均匀铺涂在条形的玻璃纤维上，再将条形的玻璃 纤维截断制成所述巧光结合垫2。
[0062] 上述巧光结合垫2也可W采用W下方法制成：
[0063] 制备巧光微粒标记的M化抗体；
[0064] 将18-22mg的巧光素或480-520mg巧光微球标记物与65mgMBL单克隆抗体，置 于4°C，调节体系P册.8-9. 0, 一边揽拌一边缓慢加入0. 2-1 %戊二醒；反应2-5小时，用 Se地adex G25凝胶柱将抗体巧光标记物进行纯化，去除杂质，用巧光保护剂复溶；经冻干保 存备用；
[00化]制备巧光微粒标记兔IgG ;
[0066] 将18-22mg的巧光素或480-520mg巧光微球标记物与兔IgG混合后，置于4°C，调 节体系抑6. 8-9. 0,一边揽拌一边缓慢加入0. 2-1%戊二醒；反应2-5小时，用Se地adex G25 凝胶柱将抗体巧光标记物进行纯化，去除杂质，用巧光保护剂复溶；经冻干保存备用；
[0067] 将上述制备好的巧光微粒标记的M化抗体和巧光微粒标记兔IgG混合，W使两种 抗体浓度分别都为化g/ml，按500ul/30cm均匀铺涂在条形的玻璃纤维上，再将条形的玻璃 纤维截断制成所述巧光结合垫2。
[0068] 上述巧光结合垫2还可W采用W下方法制成：
[0069] 制备巧光微粒标记的M化抗体；
[0070] 用P服.0-PH9. 6碳酸盐缓冲液溶解45mgMBL单克隆抗体，用P服.0-PH9. 6碳酸盐 缓冲液溶解或悬浮18-22mg巧光素或480-520mg巧光微球；边揽拌边将上述溶解的巧光素 或巧光微球渐渐加入抗体溶液中，加完后，继续避光揽拌10-14小时，结合完毕后，装入透 析袋中，用上述碳酸缓冲盐水透析过夜，用巧光保护剂复溶，经冻干保存备用；
[0071] 制备巧光微粒标记兔IgG ;
[0072] 用抑8. 0-PH9. 6碳酸盐缓冲液溶解45mg兔IgG，用抑8. 0-PH9. 6碳酸盐缓冲液溶 解或悬浮18-22mg巧光素或480-520mg巧光微球；边揽拌边将上述溶解的巧光素或巧光微 球渐渐加入抗体溶液中，加完后，继续避光揽拌10-14小时，结合完毕后，装入透析袋中，用 上述碳酸缓冲盐水透析过夜，用巧光保护剂复溶，经冻干保存备用；
[0073] 将上述制备好的巧光微粒标记的M化抗体和巧光微粒标记兔IgG混合，W使两种 抗体浓度分别都为化g/ml，按500ul/30cm均匀铺涂在条形的玻璃纤维上，再将条形的玻璃 纤维截断制成所述巧光结合垫2。
[0074] 本发明所述巧光标记垫2为巧光素与蛋白的标记物或巧光微球与蛋白的标记物 喷涂于玻璃纤维材料上制成，其中所使用的巧光素可为异硫氯酸巧光素、四己基罗丹明、四 甲基异硫氯酸罗丹明、藻红蛋白、多甲藻绿素蛋白、铜系馨合物、駿基巧光素、香豆素等其中 的一种或几种。
[0075] 实施例一
[0076] 在该实施例中，巧光定量检测M化免疫层析试剂盒，包括有巧光试纸条制作和样 本稀释液的配制。
[0077] 在该实施例中，包被膜的检测区T线处用0. 5mg/ml抗M化单克隆抗体包被液，使 用量为30ul/30cm。在包被膜的质控区C线处使用浓度为Img/ml的抗兔IgG进行包被，使 用量同为30ul/30cm。用于结合巧光标记的兔IgG，用于检测试纸条的有效性。
[007引在该实施例中，巧光标记液受310nm激发，发射波长为340皿。在该实施例中，巧光 标记液的制备采用含駿基的巧光微球标记物（本实施例用到的巧光素为7-哲基香豆素微 球）的制备方法（A)，步骤如下：
[0079] 将500mg的7-哲基香豆素微球分别与50mgMBL抗体或50mg兔IgG混合后，边揽 拌边缓慢加入1-己基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺（邸C)和N-哲基班巧酷亚胺 (N服），1-己基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺（邸C)和N-哲基班巧酷亚胺（N服）， EDC加0. 2mg，N服加0. Img，使其整个反应体系中邸C的含量为0. 2mg，NHS含量为0. Img， 在低温下2-8°C避光反应过夜。用Se地adex G25凝胶柱将抗体巧光标记物进行纯化，去除 杂质；用巧光保护剂复溶。
[0080] 将上述制备好的巧光微粒标记的M化抗体和巧光微粒标记兔IgG混合，W使两种 抗体浓度分别都为化g/ml，按500ul/30cm均匀铺涂在玻璃纤维上，冻干保存备用。
[0081] 将裁切好的样品垫、巧光结合垫、包被膜和吸水纸依次相互搭接地粘贴在底板上， 用切条机裁切成均匀的3--4mm宽膜条，组装在由塑料上壳和塑料下壳扣合而成的塑料卡 外壳（检测卡）中即成为成品的巧光检测试纸条。配合由磯酸氨二钢浓度20mmol，氯化钢 浓度150mmol，牛血清白蛋白浓度1% -2%，吐温-20浓度0. 1%，其余为水配制成的样品稀 释液即可对临床血液样本进行检测。
[00間 实施例二
[0083] 在该实施例中，巧光定量检测M化免疫层析试剂盒，包括巧光试纸条的制作和样 本稀释液配制。
[0084] 在该实施例中，包被膜的检测区T线处用Img/ml抗M化单克隆抗体包被液，使用 量为30ul/30cm。在包被膜的质控区C线处使用浓度为Img/ml的抗兔IgG进行包被，使用 量同为30ul/30cm，用于结合巧光标记的兔IgG，用于检测试纸条的有效性。
[0085] 在该实施例中，巧光标记液受550nm激发后，发射波长为620nm。在该实施例中，巧 光标记液的制备采用含氨基的巧光微球标记物（本实施例用到的巧光素为四甲基异硫氯 酸罗丹明微球）的制备方法，步骤如下：
[0086] 将500mg巧光胶乳标记物分别与65mgMBL抗体或65mg兔IgG混合后，置于4°C 环境，调节体系抑7. 0-8. 5, 一边揽拌一边缓慢加入0. 4-0. 6 %戊二醒；反应2-5小时，用 Se地adex G25凝胶柱将抗体巧光标记物进行纯化，去除杂质，用巧光保护剂复溶。
[0087] 将上述制备好的巧光微粒标记的M化抗体和巧光微粒标记兔IgG混合，W致两种 抗体浓度分别都为加g/ml，按500ul/30cm均匀铺涂在玻璃纤维上，冻干保存。
[008引将裁切好的样品垫、巧光结合垫、包被膜和吸水纸依次相互搭接地粘贴在底板上， 用切条机裁切成均匀的3--4mm宽膜条，组装在由塑料上壳和塑料下壳扣合而成的塑料卡 外壳（检测卡）中即成为成品的巧光检测试纸条。配合由磯酸氨二钢浓度20mmol，氯化钢 浓度150mmol，牛血清白蛋白浓度1% -2%，吐温-20浓度0. 1%，其余为水配制成的样品稀 释液即可对临床血液样本进行检测。
[0089] 实施例S
[0090] 在该实施例中，巧光定量检测M化免疫层析试剂盒，包括巧光试纸条的制作和样 本稀释液配制。
[0091] 在该实施例中，包被膜的检测区T线处用1. 5mg/ml抗M化单克隆抗体包被液，使 用量为30ul/30cm。在包被膜的质控区C线处使用浓度为2mg/ml的抗兔IgG进行包被，使 用量同为30ul/30cm，用于结合巧光标记的兔IgG，用于检测试纸条的有效性。
[0092] 在该实施例中，巧光标记液受490nm激发，发射波长为530皿。在该实施例中，巧光 标记液的制备采用含硫碳酷氨基的巧光素（本实施例用到的巧光素为异硫氯酸巧光素）的 制备方法，步骤如下：
[009引用抑8. 0-PH9. 6碳酸缓冲液分别溶解45mgM化抗体或45mg兔IgG，用抑8. 0-PH9. 6 碳酸缓冲液溶解或悬浮20mg异硫氯酸巧光素；边揽拌边将上述的异硫氯酸巧光素渐渐加 入球蛋白溶液中，加完后，继续避光揽拌12小时左右，结合完毕后，装入透析袋中，用上述 碳酸缓冲盐水在低温下透析过夜，用巧光保护剂复溶。
[0094] 将上述制备好的巧光物标记的M化抗体和巧光胶乳微粒标记兔IgG混合，W致两 种抗体浓度分别都为3ug/ml，按500ul/30cm均匀铺涂在玻璃纤维上，冻干保存备用。
[0095] 本发明所述的M化免疫层析